晕宁颗粒的质量标准提高研究

郑宗江 赵 颖

南京市中医院药学部，江苏南京 210022

医院制剂是临床用药的重要组成部分，其在保障患者健康、满足医院科研需要及弥补市场药物供给不足等方面发挥着重要的作用[1-3]。医院制剂的发展有着悠久历史，在此期间，其监管制度不断完善[4-5]。自2005年以来，国家加强对医院制剂的监管，导致一些医院制剂由于严格的申请注册标准等原因而萎缩。2017年公布的《中医药法》，国家高度重视医院制剂的研发和应用，因此，医院制剂又迎来了新的机遇[6]。目前，医院制剂存在不足之处，如医院制剂的质量控制系统尚不完善，部分医院制剂缺乏科学、合理的质量控制体系。因此，建立科学、合理的质量标准，才能更好地造福更多患者[7-9]。晕宁颗粒是南京市中医院自制制剂，该方由制何首乌、芍药、丹参、陈皮、白术等十味药组成，具有补益肝肾，熄风化痰，和中止呕的作用。本研究在该制剂原有的质量标准基础上，开展了质量标准提高研究。

1 材料

1.1 仪器

安捷伦1260 infinityⅡ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AL104型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；labtower edi15纯化水系统（aglilent technologies公司）。

1.2 试药

芍药苷对照品（批号：110736-201842），由中国药品鉴定研究院提供，含量以97.4%计。晕宁颗粒样品（批号：180710、180209、170512）及阴性对照品（缺白芍）。

2 含量测定

2.1 色谱条件的选择

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm，粒度：5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）；检测波长：260 nm；进样量：10 μl；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷2.90 mg（含量以97.4%计）至5 ml的量瓶，加甲醇定容，制成芍药苷浓度为0.58 mg/ml的溶液，作为芍药苷对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取晕宁颗粒，研细，称定3 g，放入具塞锥形瓶内，倒入70%甲醇25 ml，称量后，放入超声机30 min，冷却，再称量，倒入70%甲醇补足缺失的重量，摇匀后，过滤即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取相当于0.3 g白芍的阴性制剂，制备处理同供试品溶液[10-11]。

2.3 系统适用性试验

采用不同的流动相比例进行分离。流动相1：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（12∶88）；流动相2：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（13∶87）；流动相3：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（14∶86），结果显示，以流动相2分离效果最佳。见图1～3。

图1 乙腈∶0.1磷酸水溶液（12∶88）

图2 乙腈∶0.1磷酸水溶液（13∶87）

图3 乙腈∶0.1磷酸水溶液（14∶86）

2.4 专属性试验

分别取芍药苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，摇匀，按照上述色谱条件，进样10 μl，测定。结果显示，阴性样品溶液在与芍药苷对照品溶液相同的保留时间位置处，无干扰。见图4～6。

图4 芍药苷色谱图

图5 晕宁颗粒样品图

图6 晕宁颗粒阴性色谱图

2.5 标准曲线的制备

精 密吸取上述对照品液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml，加入至2 ml容量瓶中，加甲醇定容，得系列芍药苷对照品溶液，其中芍药苷浓度分别为28.25、56.50、84.75、113.00、141.25 μg/ml。分别精密吸取上述5种浓度的对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，平行进2针，同上色谱条件，以平均峰面积均值（Y）为纵坐标，进样浓度（X）为横坐标，得到回归方程，绘制标准曲线。回归方程为Y=8.8963X+68.9700、相关系数r=0.9999；芍药苷在28.25～141.25 μg/ml范围线性关系良好。见图7。

图7 芍药苷的线性关系图

2.6 精密度试验

精确吸取芍药苷对照品溶液，连续进样6次，记录其峰面积测量值，RSD值为0.53%，提示仪器的精密度试验良好。

2.7 重复性试验

取同一批号（170512）的样品6份，按照上述方法测定供试品中芍药苷的含量，计算平均含量，RSD值为0.63%，提示样品的重复性试验良好。

2.8 稳定性试验

按照上述方法，并每隔2 h测定一次峰面积，直至10 h，RSD值为0.95%。提示芍药苷在10 h内基本稳定。

2.9 加样回收率试验

称量含芍药苷总量为0.8137 mg/g的颗粒1.5 g，精确称量后，放入具塞锥形瓶中，平行处理6份。精密加入浓度为1.1570 mg/ml芍药苷对照品溶液1 ml，倒入70%甲醇约25 ml，称重后，放入超声机，超声30 min，取出放凉，再次称重后，倒入70%甲醇补足缺失的重量，摇匀后，过滤，即得。色谱条件同前，进样量10 μl。测定其芍药苷含量，结果显示，本法的加样回收率试验良好，加样回收率符合要求。见表1。

表1 加样回收试验结果

2.10 样品测定及含量限度的确定

依照含量测定法，测定了三批不同样品中芍药苷的含量。结合三批样品的含量测定结果，取平均含量最低的180209批次来制订芍药苷的标准，暂定为本品芍药苷含量不得少于0.355 mg/g。见表2。

表2 不同批次的样品含量测定（mg/g）

3 讨论

白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根[12]。白芍主要含有单萜及其苷类化合物、三萜类化合物、多酚类化合物、黄酮类化合物、多糖类化合物等，现代药理研究显示白芍具有抗炎、镇痛、保肝、促进造血功能、抗血栓、抗肿瘤以及抗氧化等作用，被广泛应用于临床[13-14]。白芍中的萜类化合物主要为单萜，还有其糖苷类化合物和三萜类化合物。其中研究最为广泛的是单萜及其糖苷类化合物。芍药苷是发现最早的一种单萜苷、也是单萜类成分中含量最高的，大量研究证明芍药苷具有抗抑郁、抗炎、镇痛、抗肿瘤、保肝、保护神经、调节免疫、镇静催眠等多种药理作用[15-16]。治疗眩晕的方剂中，多数含有药味白芍，诸如白芍天麻饮、葛根汤、防眩汤等[17-18]。本研究选芍药苷作为质控检测指标，在含量测定研究中，考察了甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水溶液，发现甲醇-水、甲醇-甲酸水，存在拖尾的情况，乙腈-水，基线不平稳。乙腈-磷酸水溶液条件良好，因此将乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）列入标准正文。