息肉切除术治疗早期结直肠癌对患者血清中CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9水平的影响

郭 洁 方 玲

结肠直肠癌(CRC)是由遗传和环境因素相互作用引起的非常异质的疾病[1]。 每年约有1235108人被诊断为CRC，每年约有609051人死于CRC[2-5]。研究表明，大肠息肉可能会发展成恶性肿瘤，因此，对其诊断和治疗成为预防结直肠癌的关键之一[6]。早期选择性切除结直肠息肉是预防结直肠癌的关键。已有研究表明，CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平在肿瘤Ⅰ、Ⅱ期患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著相关性[7]。鉴于此，本文旨在探讨息肉切除术治疗早期结直肠癌对患者血清中CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平的影响，期望为临床上结直肠息肉切除后患者的生化状态提供参考，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年5月至2021年5月本院收治的104例结直肠癌患者为研究对象，其中，男性61例，女性43例；年龄24～73岁。根据形态学分类方法[8]，其中有蒂隆起型病变49例，无蒂隆起型病变22例，亚蒂隆起型病变33例。

1.2 治疗方法

采取冷圈套息肉切除术。冷圈套息肉切除术是一种易于应用的技术，已成为小型息肉的常用技术[9]。将圈套鞘推进，打开圈套并围绕息肉。 然后圈套慢慢地逐渐闭合，捕获息肉周围1～2 mm的正常组织，直至完全闭合并且息肉被切断。

1.3 样本采集

采集104例早期结直肠癌患者息肉切除手术前后肘前静脉血5 ml。采用红细胞溶解法分离有核细胞。采用TRIZOL法抽取总RNA。利用核酸蛋白检测仪测定样品的OD230、OD260和OD280，OD260与OD280的比值在1.7至2.0之间，用1%的琼脂糖胶进行电泳检测提取的RNA质量，5S、18S和28S的条带清晰可见。

1.4 观察指标

1.4.1 血清标志物的mRNA水平 用Taka逆转录试剂盒(货号：RR037A)将提取的总RNA中的mRNA逆转录为cDNA。用南京诺唯赞RT-qPCR试剂盒(货号：Q711)，在ABI的qPCR仪(型号：7500)进行RT-qPCR反应。使用PRIMER 5.0设计qPCR引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列如表1。

表1 目的基因和内参基因引物

1.4.2 血清标志物的蛋白水平 采用酶联免疫吸附试验，使用江莱ELISA试剂盒(货号：JL29650,JL13635,JL19231,JL10977)检测息肉切除术前后CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 息肉切除术治疗前后血清肿瘤标志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的mRNA水平的比较

经过冷圈套息肉切除术治疗后，在mRNA水平上，患者血清中肿瘤标志物CEA、MMP-2和MMP-9的水平明显下降，且治疗前后差异具有统计学意义，其中CEA具有显著差异(P<0.05)，MMP-2和MMP-9具有极显著差异(P<0.01)。而IL-2在治疗后在mRNA水平上有略微的上升，但差异不明显，见图1。

注：*P<0.05，**P<0.01，NS：无明显差异。

2.2 息肉切除术治疗前后血清肿瘤标志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的蛋白水平的比较

经过冷圈套息肉切除术治疗后，在蛋白表达水平上，患者血清中肿瘤标志物CEA，MMP-2和MMP-9的水平明显下降，且治疗前后差异具有统计学意义(P<0.05)；而IL-2的蛋白水平治疗前后差异不明显，见表2。

表2 治疗前后血清中CEA IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白水平比较

3 讨论

结肠直肠癌是全球诊断的第三大常见癌症。虽然流行病学数据显示世界各地的结直肠癌发病率显著变化，但总体发病率呈缓慢但稳定下降趋势，主要集中在发达国家[10]。但是，我国结直肠癌的发病率和死亡率均高于世界平均水平[11]。因此，早诊早治水平的提高至关重要，其中，内镜息肉切除术是治疗早期结直肠癌的重要手段之一。

癌胚抗原(CEA)是结直肠癌患者中最常用的肿瘤标志物[12]，属于免疫球蛋白超家族分子的高分子量糖蛋白，起着促进人类结肠直肠癌细胞聚集的细胞间粘附分子的作用[13]。大肠癌患者的CEA增加约60%至85%[14]。

T细胞在免疫应答过程中产生的IL-2是一种重要的免疫调节因子。IL-2诱导T细胞增殖，促进B细胞的抗体产生和增殖，并且是活化诱导的细胞死亡所必需的。此外，IL-2增强自然杀伤细胞活性并促进干扰素分泌[15]。因此，IL-2在免疫细胞和免疫应答的增殖中起着核心作用。另外，IL-2水平反映了细胞免疫活性。当细胞免疫功能受到抑制时，IL-2水平明显下降[16]。

迄今为止，已经描述了20多种MMPs[17]。明胶酶MMP-2和MMP-9对癌症侵袭和转移有着潜在贡献[18]。已经报道了许多类型的人类癌症和细胞培养以及癌症动物模型中MMP-2和MMP-9表达水平的显著增加，从而为明胶酶水平与癌症侵入或转移之间的强关联提供了证据[19]。

本研究中，息肉切除术治疗早期结直肠癌后，与治疗前相比，CEA、MMP-2和MMP-9的mRNA水平明显下降，IL-2的mRNA水平略微上升；CEA、MMP-2和MMP-9的蛋白水平明显下降，IL-2的蛋白水平略有上升，2组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的mRNA水平与其蛋白质水平高度相似，说明CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白在结直肠癌中的调控主要是在转录水平上的，而不是经由蛋白质翻译后修饰或者降解的途径。

综上所述，息肉切除术治疗早期结直肠癌后，患者血清中的CEA、MMP-2以及MMP-9在mRNA水平和蛋白水平上均有明显下降，IL-2在mRNA水平和蛋白水平上略有上升。