新辅助治疗后血清miR-448和miR-143水平对胰腺癌患者术后生存和预后的影响

李秀明 刘 璐 万 琼 张 珉

胰腺癌患者预后差，主要原因在于大多数患者确诊胰腺癌时已处于晚期，仅有15%～20%患者可行手术切除肿瘤达到治愈目的[1-2]。有研究报道术前行新辅助治疗可帮助提高局部进展期和临界可切除患者的手术可切降低除率[3]。新辅助治疗是指通过术前全身化疗或局部放疗降低肿瘤负荷，以期达到降期治疗以及降低术后肿瘤复发率，最终达到延长生存期的目的[4]。目前新辅助治疗已成为临界可切除胰腺癌和局部进展期胰腺癌的标准治疗措施[5]。微小RNA(miRNA)是一类长约为20个核苷酸的非编码RNA，主要存在于真核生物中[6]。有研究证实miRNA通过与mRNA结合调控基因的表达参与肿瘤的发生、发展[7]。目前有研究证实miRNA已广泛应用于肺癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤中[8]。因此本研究探讨胰腺癌患者新辅助治疗前后血清miR-448和miR-143水平的变化及其对术后结局和预后的影响，以期寻求新的生物标志物。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2016年7月至2018年7月本院收治的胰腺癌患者60例，年龄18～69岁，平均(57.32 ±7.64)岁。纳入标准：①符合美国国立综合癌症网络胰腺癌临床实践指南[9]中关于胰腺癌的诊断标准，患者经病理检查确诊为胰腺癌； ②术前接受新辅助性治疗，行根治性切除手术治疗患者；③ 临床及随访资料完整者； ④患者签署自愿受试同意书，患者及其家属需签署知情同意书。排除标准：① 未获得胰腺癌病理学确诊者；②合并其他恶性肿瘤患者；③合并其他器官严重性病变患者。

1.2 血清miR-448和miR-143水平检测

新辅助治疗后无菌采集静脉血3 ml，分离上清保存于RNAse-free的EP管中，-80 ℃低温保存。采用SuperScript IV Reverse Transcriptase逆转录试剂盒(美国Thermo Fisher公司)合成cDNA模板，保存于-80 ℃。使用Primer Premier 6.0软件设计引物序列，采用SYBR Green qPCR MasterTM试剂盒(美国Thermo Fisher公司)进行PCR检测。包括上、下游引物各0.5 μl、10 μl Mixima SYBR Green qPCR Master Mix(2×)、模板cDNA 1 μl，加入ddH2O至总反应体系为20 μl。反应条件为95 ℃预变性30 s，95 ℃ 30 s、54 ℃ 60 s、72 ℃退火延伸60 s，共40个循环。以U6为内参，采用2-△△Ct法测定计算miR-448、miR-143的相对表达量。

1.3 随访

通过门诊、住院和电话相结合的方式进行随访，末次随访时间为2021年5月1日，中位随访时间为7.24个月。生存时间起点为患者病理确诊日，终点为死亡、失访日或随访截止日。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 生存及死亡情况分析

胰腺癌患者1年生存率为30.00%(18/60)，2年生存率为15.00%(9/60)，3年生存率为8.33%(5/60)，中位生存期为7.24个月。胰腺癌患者的年龄、肝转移、KPS评分、CA19-9水平以及miR-448和miR-143水平与患者中位生存期显著相关(P<0.05)，见表 1。

表1 胰腺癌的基本临床资料及其生存相关性

2.2 胰腺癌患者预后影响因素多元线性回归分析

本研究通过多元线性回归分析，以患者预后作为因变量，miR-448水平、miR-143水平、肝转移、KPS评分、CA19-9水平为自变量。结果显示miR-448水平、miR-143水平、肝转移、KPS评分、CA19-9水平是胰腺癌患者预后的影响因素(P<0.05)，见表2、表3。

表2 自变量赋值

表3 胰腺癌患者预后影响多元回归分析

2.3 胰腺癌患者预后影响因素对生存结局的预测价值分析

肝转移、KPS评分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平评估胰腺癌患者生存结局的预测价值AUC分别为0.743，0.712，0.802，0.754，0.763，见表4。

表4 miR-448水平、miR-143水平、肝转移、KPS评分、CA19-9对生存结局的预测价值ROC分析

3 讨论

胰腺癌根据肿瘤与血管之间的解剖学关系，可分为可切除、边界可切除和不可切除3种类型[10]。根治性切除目前胰腺癌患者最有效的治疗手段，但是由于早期胰腺癌发生血液、淋巴和神经等组织转移，因此，术后复发转移率极高，预后差，据2019年美国癌症学会统计显示，目前胰腺癌的5年累积生存率不足9%[11-12]。其原因主要是由于胰腺癌仅能通过外科手术完全切除肿瘤来达到治愈目的，但一半以上的胰腺癌患者在确诊时已为晚期，可手术切除肿瘤仅占15%～20%，局部进展期患者占30%～40%，50%～60%的患者合并远处转移[13-14]。

美国综合癌症网络发布对临界可切除胰腺癌的治疗意见是先行新辅助治疗再手术[15]。新辅助治疗可以诱导肿瘤细胞进入休眠状态，抑制微转移灶以及原发灶发展[16]。研究报道，术前行新辅助治疗能够提高局部进展期和临界可切除胰腺患者的肿瘤手术可切除率[17]。新辅助治疗，即通过术前全身化疗或局部放疗减少肿瘤负荷，从而达到降期治疗，提高术中肿瘤完整切除率、降低术后肿瘤复发率及延长患者生存期的目的[18-19]。

基于目前miRNA在恶性肿瘤组织中存在异常表达，且在病情演进过程中发挥重要作用推测其在胰腺癌的发生发展中发挥作用[20]。miR-448水平、miR-143均是在胰腺癌中异常表达，是发挥作用的重要miRNA[21]。CA19-9是胰腺癌预后的重要生物标志物，有研究显示在急性胆管炎、胰腺炎、肝癌等患者中均可出现异常表达，因此不能将CA19-9作为单独诊断胰腺癌的指标[22-23]。本研究中胰腺癌患者的年龄、肝转移、KPS评分、CA19-9水平以及miR-448和miR-143水平与患者中位生存期显著相关。miR-448水平、miR-143水平、肝转移、KPS评分、CA19-9水平是胰腺癌患者预后的影响因素。肝转移、KPS评分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平评估胰腺癌患者生存结局的预测价值AUC分别为0.743，0.712，0.802，0.754，0.763。

综上所述，肝转移、KPS评分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平是胰腺癌患者预后的独立影响因素，具有对胰腺癌患者术后生存结局的预测价值。但是本研究存在一定的局限性，例如纳入的样本量较少，中心单一，未涉及miRNA表达对胰腺癌病情影响的分子机制研究，因此还需要进一步扩大样本量以及多中心的临床研究、基础研究。