火棘果黄酮提取工艺优化及其抗油脂氧化活性分析

火棘果是蔷薇科常绿野生灌木果树火棘的果实，主要分布在我国东南、 西南和西北部

。 火棘果提取物具有抗氧化、 增强免疫力、 促进血凝等作用， 这与其含有槲皮素、 芦丁等黄酮类化合物有关

。 黄酮类化合物不仅具有抗菌、 抗病毒、 抗肿瘤、 抗心血管疾病等广泛的生理活性和药理活性， 而且具有较强的抗氧化性能

。 各种食用油脂是人们日常生活中不可或缺的食品原料， 但油脂在加工、 运输和贮藏等过程中极易受到外界环境如光照等因素的影响发生氧化， 从而影响食用油脂品质与安全

。 为保证油脂在贮藏期内的稳定性， 常在油脂中加入BHT、 TBHQ 等化学抗氧化剂以延缓食用油脂的氧化， 而这些人工合成抗氧化剂的转化产物及其潜在毒性备受争议

， 故无毒副作用的天然油脂抗氧化剂的开发受到了社会各届的关注。 鉴于黄酮的抗氧化性能

， 本研究采用火棘果为原料， 提取其中黄酮类物质， 以正交法优化最佳提取工艺， 并探索火棘果黄酮在油脂中的抗氧化效果， 为开发天然高效的油脂抗氧化剂提供一定的理论依据与试验基础的同时， 实现商洛当地自然资源的综合开发利用。

围手术期护理是从患者确定入院治疗时起， 是对患者进行心理、生理、社会等整体性护理，在整个围手术期中，根据不同阶段需求，给予护理措施[5]。陈秀丽等人[6]为探讨镜下切除肠息肉围术期护理措施，纳入251例结肠息肉患者例，对患者的肠息肉切除患者进行围术期护理，研究结果发现，镜下息肉切除术是一种方便、快捷的治疗方法，但易发生并发症，因此应加强患者的围术期护理。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料及试剂 火棘果， 采自陕西省商洛市商州区； 乙醇、 石油醚、 三氯化铝、 醋酸钠等(均为分析纯)， 国药集团； 芦丁， 广州分析测试中心科力技术开发公司； 菜籽油、 猪油(市售)。

1.1.2 主要仪器及设备 电热恒温水浴锅(HH-6)，上海康华生化仪器制造厂； 紫外可见分光光度计(754型)， 上海菁华仪器有限公司； 电动研磨粉碎机(HXYM19)， 佛山市海迅电器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原料的预处理 将采摘的火棘果清洗干净， 放至恒温干燥箱中60 ℃烘干(前后两次质量差不超过0.01~0.05 g)， 粉碎后， 过60 目筛后备用

。

2.2.4 提取温度对提取效果的影响 由图5 可知， 随着提取温度的增加， 火棘果黄酮的得率增加， 当提取时间超过70 ℃时， 火棘果黄酮的得率呈现出下降趋势。这可能是由于适当升温有利于黄酮类物质的溶出、 扩散； 但当温度过高时， 一方面乙醇提取剂开始挥发， 导致提取剂浓度降低， 另一方面温度过高会造成黄酮物质结构破坏， 影响黄酮提取效果， 致使黄酮得率降低

。

1.2.3 标准曲线的制作 称取芦丁标准品0.012 5 g，加入乙醇溶解， 定容至100 mL， 即得芦丁对照品溶液。准确吸取对照品溶液0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 10.0 mL分别置于25 mL 容量瓶中， 加入AlCl

溶液2 mL 及NaCl溶液3 mL， 摇匀后在25 ℃环境中显色5 min， 再以80%乙醇定容至刻度摇匀， 以80%乙醇溶液作空白对照， 在波长418 nm 处测定吸光度

， 绘制标准曲线。

3.2 从最基本的需要满足了农村文化生活需要。在农村乡镇官场开展的民间自娱性广场文化，如村头街尾的扭秧歌、交谊舞、健身操，公园、庭院的演唱会、故事会、读书会等。这种类型的广场文化不受时间、场地、服饰、设施、水平等条件的限制，多以健身强体、自娱自乐为目的。这种自娱性广场文化满足了农民群众精神生活的需求，起到了调节身心，陶冶思想情操，增进人际交往，激发工作活力等最基本的作用。

1.2.4 样品中黄酮含量的测定 准确量取火棘果提取液2 mL 置于25 mL 容量瓶中， 按1.2.3 中的方法， 在波长418 nm 处测定吸光度， 通过标准曲线的回归方程计算样品浓度， 并通过式(1) 计算火棘果中黄酮类化合物的得率。

今后，只要在住宅小区内有固定场所，为小区居民或村民提供自行车维修、小家电维修、缝纫修补、管道疏通和卫生保洁等服务的，就可不办理营业执照，只要向所属居委会或村委会备案即可。

1.2.5 火棘果黄酮提取的单因素试验 (1) 料液比对提取效果的影响: 按照1.2.2 中的方法， 称取10 g 火棘果粉末， 在乙醇浓度为75%、 提取温度为70 ℃条件下提取3 h。 设置料液比为1 ∶5、 1 ∶10、 1 ∶15、 1 ∶20、1 ∶25 进行试验， 测定样品吸光度并计算黄酮的得率。(2) 乙醇浓度对提取效果的影响: 按照1.2.2 中的方法， 称取10 g 火棘果粉末， 在料液比为1 ∶15， 提取温度为70 ℃条件下提取3 h。 设置乙醇浓度为55%、65%、 75%、 85%、 95% 进行试验， 测定样品吸光度并计算黄酮的得率。 (3) 提取时间对提取效果的影响: 按照1.2.2 中的方法， 称取10 g 火棘果粉末， 在料液比为1 ∶15、 乙醇浓度为75%、 提取温度为70 ℃条件下， 设置提取时间为1、 2、 3、 4、 5 h 进行试验， 测定样品吸光度并计算黄酮的得率。 (4) 提取温度对提取效果的影响: 按照1.2.2 中的方法， 称取10 g 火棘果粉末， 在料液比为1 ∶15、 乙醇浓度为75%、 提取时间为3 h 条件下， 设置提取温度为50 ℃、 60 ℃、 70 ℃、 80 ℃、90 ℃进行试验， 测定样品吸光度并计算黄酮的得率。

1.2.6 正交试验 根据火棘果黄酮提取的单因素试验结果， 以黄酮得率作为标准， 采用L

( 3

) 正交表进行正交试验， 优化火棘果黄酮提取的最佳工艺条件(表1)。

2.2.2 乙醇浓度对提取效果的影响 由图3 可知， 随着乙醇浓度的增加， 火棘果黄酮的得率增加， 当乙醇浓度超过75%时， 火棘果黄酮的得率呈现出下降趋势。 这可能是由于当乙醇浓度较小时， 乙醇浓度的增加会加大乙醇与溶质接触， 同时由于溶剂浓度不同极性不同， 在一定的乙醇浓度范围内， 会利于黄酮类物质的溶出； 随着乙醇浓度继续增加， 亲脂性成分(如鞣质等) 会与黄酮类物质竞争溶剂， 阻碍其溶出， 从而使火棘果黄酮的得率降低

。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

2.2.1 料液比对提取效果的影响 由图2 可知， 随着料液比的增加， 火棘果黄酮的得率增加， 当料液比超过1 ∶15 时， 火棘果黄酮的得率呈现出下降趋势。 这可能是由于溶剂量的增加， 加大了溶液传质推动力， 利于黄酮类物质的溶出， 进而提取率变大； 之后溶剂量的继续增加， 会使杂质溶出， 有碍黄酮类物质溶出， 提取率下降

。

2.2 火棘果黄酮提取的单因素试验结果

由图1 可知， 芦丁标准曲线的回归方程为

＝15.971

-0.011，

＝0.999 4 ＞0.999， 证明该回归方程有效。

1.2.7 火棘果黄酮的抗油脂氧化性试验 抗油脂氧化试验设计2 组， 1 组为动物油新炼制猪油、 1 组为植物油菜籽油。 准确称取50.0 g 油脂数份， 置于100 mL 的烧杯中， 分别添加相同浓度的黄酮样品、 芦丁、 BHT(2， 6-二叔丁基对甲酚)， 并设置空白对照。 放置在(60±1)℃烘箱中， 每12 h 振荡1 次， 并交换在烘箱中的位置。 定期测定过氧化值(POV)， 测定方法采用GB/T5538-2005/ISO 3960: 2001 《动植物油脂过氧化值测定》

。

2.2.3 提取时间对提取效果的影响 由图4 可知， 随着提取时间的增加， 火棘果黄酮的得率增加， 当提取时间超过3 h 时， 火棘果黄酮的得率呈现出略微下降趋势。这可能是由于在提取时间较短时， 黄酮与多糖等物质结合不易溶出； 随着时间的延长， 原料中的黄酮大量快速溶出， 得率升高； 但随着提取时间继续增加， 由于黄酮含量为一定值， 大部分黄酮已基本溶出后， 溶液趋于饱和， 黄酮含量不再升高； 若提取时间过长， 容易造成黄酮的缓慢分解， 使其得率下降

。

从信的内容判断，杨小水与常江的通信远远不止这八封，有些信可能弄丢了。按时间顺序，头两封信简单，客气，就像两个陌生人见面先握手，然后才试探着深入。

式(1) 中，

—测定液中黄酮类化合物的浓度(mg/mL)、

—提取液的总体积(mL)、

—称取的样品质量(mg)

1.2.2 样品的制备 以石油醚为溶剂， 采用索氏提取法对火棘果进行脱色处理。 脱色后的火棘果中加入乙醇， 回流提取并抽滤， 收集滤液， 得到样品溶液。

回煞这个仪式，在纳平山和相距十多公里的坡业不同。据坡业的陶兴文介绍，回煞之后，还有除灵，这是两个时间上分开的仪式。而且，回煞不吹芦笙，只有除灵才吹。但在纳平山，回煞和除灵这两个仪式，合二为一，一步到位，回煞的后半段就是除灵，期间还要吹16个“调”的芦笙。

2.3 正交试验优化最佳提取工艺

根据火棘果黄酮提取的单因素试验结果， 以黄酮得率作为标准， 选定料液比、 乙醇浓度、 提取时间、 提取温度为正交试验中的4 个因素， 优化火棘果黄酮提取的最佳工艺条件。 由表2 可知， 4 种因素影响火棘果黄酮得率的主次顺序为A ＞B ＞C ＞D， 即料液比＞乙醇浓度＞提取时间＞提取温度。 正交试验分析确定最佳的提取工艺条件组合为A

B

C

D

。

正交试验分析的最优组合A

B

C

D

与正交试验(9组) 中最佳组合A

B

C

D

不一致。 为确定最优的工艺条件， 进行验证试验， 由表3 可知， 在A

B

C

D

工艺条件下， 火棘果黄酮得率为2.34%， 高于A

B

C

D

工艺条件下的火棘果黄酮得率2.23%， 因此得到最优提取工艺条件组合为A

B

C

D

， 即料液比1 ∶15、 乙醇浓度为75%、 提取时间为3 h、 提取温度为70 ℃。

2.4 火棘果黄酮的抗油脂氧化活性

选择植物油脂中代表性的菜籽油、 动物油脂中代表性的猪油作为研究对象。 在2 种油脂中分别加入芦丁、火棘果黄酮、 BHT， 分别设置空白对照， 测定这8 种组合放置期内的POV。 由图6 可知， 植物油脂在放置期内的氧化酸败现象不太明显。 3 种抗氧化剂(火棘果黄酮、 BHT、 芦丁) 对菜籽油的抗氧化效果相似， 且与空白组相差不大， 即在植物油脂中加入抗氧化剂的意义不大， 这可能是由于植物油脂中含有一些天然的维生素，如维生素E 等具有抗氧化的作用

。

与之形成鲜明对比的是动物油脂， 在放置期内， 尤其是后期发生明显的氧化酸败现象， POV 迅速升高。 3种抗氧化剂(火棘果黄酮、 BHT、 芦丁) 对猪油的抗氧化效果不尽相同。 空白猪油组伴随着时间的推移， 迅速发生急剧的氧化酸败现象； 芦丁对猪油没有明显的抗氧化效果， 与空白组相差不大； BHT 干扰游离基反应， 可以有效清除自由基

， 对猪油的氧化酸败有强烈的抑制作用， 20 d 时过氧化值基本保持不变； 黄酮类化合物是作为金属离子络合物来抑制油脂的自动氧化， 火棘果黄酮可与微量金属元素螯合以减少自由基的产生， 因而能够消除金属离子对油脂的催化作用， 从而发挥抗氧化功能， 其抗氧化效果明显， 但不及BHT。

根据40例颈部富血供包块患者的临床诊断资料及其在CT扫描诊断与MRI扫描诊断中的实际表现，对比研究影像学特征。综合性的研究CT扫描诊断与MRI扫描诊断颈部富血供包块的临床效果。

3 结论与讨论

本研究以乙醇为溶剂提取火棘果中的黄酮， 并对其提取工艺进行优化， 同时探索火棘果黄酮对于不同油脂的抗氧化活性。 通过正交试验确定火棘果中黄酮提取的最佳工艺组合为A

B

C

D

， 即料液比1 ∶15、 乙醇浓度为75%、 提取时间为3 h、 提取温度为70℃。 其中， 4种因素影响火棘果黄酮得率的主次顺序为料液比＞乙醇浓度＞提取时间＞提取温度。 此工艺下， 火棘果黄酮的得率为2.34%。 植物油脂在放置期内氧化现象不明显，而动物油脂在放置期内发生明显的氧化酸败现象， POV迅速升高。 火棘果黄酮在菜籽油中添加的意义不大， 但在猪油中添加火棘果黄酮可以有效地延缓猪油的氧化，表现出较强的抗油脂氧化活性。

[1]李伟， 程超， 张应团， 等.不同火棘果实功效成分的聚类分析[J].食品科学， 2008，29(9):207-210.

[2]甘秀海， 赵杨， 周欣， 等.火棘不同药用部位中槲皮素含量的比较[J].中国实验方剂学杂志， 2012，11(18):100-102.

[3]黄荣， 傅小红， 常波.分光光度法测定火棘提取物中的总黄酮[J].华西药学杂志， 2013，28(6):642-643.

[4]Meda A， Lamien C E， Romito M， et.al.Determination of the total phenolic， Flavonoid and proline contents in Burkina Fasan honey， as well as their radical scavenging activity[J].Food Chemistry， 2005，91(3):571-577.

[5]王思阳.食用油氧化判别检测方法研究[D].陕西咸阳:西北农林科技大学， 2018.

[6]陈华凤.油脂中抗氧化剂BHT、 TBHQ 及其转化产物的研究[J].质量技术监督研究， 2018(4):16-19.

[7]李伟， 田成， 汪满， 等.火棘果黄酮提取工艺优化及其抗氧化作用[J].湖北民族学院学报(自然科学版)，2013，31(2):145-148.

[8]Zhang J S， Chen L H， Zhang W L.Adsorption and desorption characteristics ofmacroporous resin to flavonoids from leaves and rattan

[J].Food Science，2013(25):383-387.

[9]李彬， 刘晓娇， 张薇.酸枣叶中三萜皂苷乙醇回流法浸提工艺优化[J].商洛学院学报， 2016，30(4):36-39.

[10]蒋德锡， 陈文芝， 贾建静.分光光度法测定角花胡颓子中的总黄酮[J].华西药学杂杂志， 2011，26(1):81-82.

[11]于新， 黄小红， 李小华， 等.紫外分光光度法测定非洲山毛豆总黄酮含量及方法评价[J].中国粮油学报，2009，24(11):132-136.

[12]姚红娟， 唐浩国， 郭介之， 等.苹果黄酮的分离纯化及抗油脂氧化研究[J].食品科学， 2014，35(11):83-88.

[13]霍宗庆， 徐婉晴， 刘言娟.响应面法优化白玉菇多糖的提取工艺[J].食品工业科技， 2017，38(21):145-149.

[14]李月， 王桂花， 范媛媛， 等.地参总黄酮的提取及抗氧化活性研究[J].分子科学学报， 2019，35(1):55-61.

[15]李萌萌， 焦天慧， 吕长鑫， 等.红树莓籽中黄酮提取工艺及抗氧化活性研究[J].中国食品学报， 2017，17(2):101-109.

[16]郝教敏， 杨文平， 李红玉， 等.黑麦类黄酮最佳提取条件及清除亚硝酸盐能力研究[J].中国食品学报， 2017，17(1):126-133.

[17]向莉， 陈轩， 王月慧， 等.响应面法优化黑粒小麦麸皮多酚提取工艺[J].食品工业科技， 2017，38(22):173-177、183.