乙酰甲喹注射液含量测定方法的建立及方法对比

高 婷，李应超，刘 钧，杜继红，张小飞，周艳飞，周保腾，巩 浩，秦俊杰，王亚芳★

（1.北京市兽药饲料监测中心 102629；2.北京生泰尔科技股份有限公司 102629）

乙酰甲喹属于喹噁啉类合成抗菌药，具有广谱抗菌活性，对革兰氏阴性菌作用强于阳性菌，对仔猪黄痢、白痢、犊牛副伤寒、鸡大肠杆菌均有效，主要用于密螺旋体所致猪痢疾及细菌性肠炎[1-3]。近年来研究发现喹噁林类药物在动物体内代谢后会产生毒性较大的代谢物，会对组织造成一定的毒性损害，进而有致畸、致癌、致突变的风险，因此建立一种稳定的乙酰甲喹注射液含量测定方法具有重要的意义[4-6]。

目前乙酰甲喹注射液含量测定标准为：精密量取本品适量（约相当于乙酰甲喹0.2 g）置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取四次（40、30、30、30mL），合并三氯甲烷，低温蒸干，残渣加醋酐20mL，振摇使溶解，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸（0.1 mol/L）滴定至溶液显黄绿色，并将滴定结果用空白试验校正[7]。上述方法为非水滴定法，处理步骤繁琐，对人员操作水平及经验要求较高，提取过程中容易增大误差，方法专属性不强[8-10]。为统一相同组分兽药检验质量标准，使检验流程更加标准化、科学化，参照乙酰甲喹原料药及乙酰甲喹片含量测定项质量标准，修订乙酰甲喹注射液含量测定项。本实验采用紫外-可见分光光度法测定乙酰甲喹注射液的含量，并对该方法精密度、稳定性、重复性和加样回收等结果进行考察，考察结果符合要求。方法简便、快速、环境友好，可为兽药产品质量检测部门提供科学的技术方法与依据。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

紫外分光光度计，型号SHIMADZU UV-2450

1.2 实验试剂及样品

1.2.1 实验试剂：①乙酰甲喹对照品，来源/批号/规格：中国兽医药品监察所/K0111704/100.0%；②甲醇，来源/批号/规格：Fisher Chemical/203196/99.9%；③盐酸，来源/批号/规格：国药集团化学试剂有限公司/10011018/36.0%～38.0%；④二甲基甲酰胺，来源/批号/规格：北京化工厂/20130814/99.5。

1.2.2 实验样品： 《兽药质量标准》（2017年版）中乙酰甲喹注射液共有3个含量规格：0.5%，2%和5%。本实验样品来源为企业提供及抽检样品，共计9批，其中0.5%规格有2批，为以下编号①和②，2%规格有3批，为以下编号③、④和⑤，5%规格有4批，为以下编号⑥、⑦、⑧和⑨。9批样品覆盖标准中3个含量规格。

2 方法

2.1 紫外-可见分光光度法条件

检测波长：400～200 nm；狭缝宽度：2.0 nm；采样间隔：0.5 s。

2.2 溶液配制

2.2.1 乙酰甲喹对照品溶液配制 取乙酰甲喹对照品50 mg，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加二甲基甲酰胺10mL，0.1mol/L盐酸溶液30mL，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5mL，置100mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 乙酰甲喹注射液溶液配制 精密量取本品适量（约相当于乙酰甲喹50 mg），置250mL棕色量瓶中，加二甲基甲酰胺10mL，0.1mol/L盐酸溶液30mL，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5mL，置100mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.2.3 精密度考察溶液配制同2.2.1.

2.2.4 稳定性及重复性考察溶液配制同2.2.2

2.2.3 加标回收样品溶液制备 精密量取规格为0.5%的样品①5mL，分别精密加入乙酰甲喹对照品20 mg、25mg、30mg；精密量取规格为2%的样品④1mL，分别精密加入乙酰甲喹对照品16mg、20mg、24mg，稀释步骤同2.2.2。

3 结果与分析

3.1 确定是否有非法添加

根据农业农村部169号公告对9批样品进行非法添加筛查，结论为9批样品未添加水杨酸。

3.2 确定最大吸收波长

取2.2.1溶液，按照条件2.1，进行200～500nm全波段扫描，根据吸收光度值及波峰位置，确定乙酰甲喹的最大吸收波长为381 nm，图1为乙酰甲喹对照品溶液的紫外吸收图谱。

图1 乙酰甲喹对照品溶液的紫外吸收图谱

3.3 精密度

取样品①，按照条件2.1，照紫外-可见分光光度法测定，连续测定6次，吸光度分别为0.540、0.544、0.545、0.546、0.548、0.547，计算吸光度RSD值，经计算，RSD值为0.16%。

3.4 稳定性

取样品①，分别于0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h照紫外-可见分光光度法测定，吸光度分别为：0.566、0.566、0.565、0.565、0.567、0.567，计算含量RSD值，经计算，RSD值为0.16%。

3.5 重复性

取样品①共6份，照紫外分光光度法测定，吸光度分别为0.565、0.567、0.564、0.566、0.566、0.564，计算含量的RSD值，经计算，RSD值为0.20%。

3.6 线性关系

取乙酰甲喹对照品50 mg，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加二甲基甲酰胺10mL，0.1mol/L盐酸溶液30mL，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取1mL、2mL、3mL、5mL、10mL续滤液，置100mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，照紫外-可见分光光度法测定，以乙酰甲喹对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，如图2，线性范围为2～20μg/mL，线性相关系数为0.9999。

图2 乙酰甲喹注射液线性相关曲线

3.7 加标回收试验

取样品① 5mL、样品④ 1mL、样品⑦ 0.5mL，分别按照样品含量的80%、100%、120%进行加标回收，加标回收率在97.91%～102.99%范围内，RSD小于2.0%，具体结果如表1：

表1 样品加标回收试验结果

3.8 对9批样品分别采用非水滴定法和紫外-可见分光光度法计算含量，具体结果对比如表2：

表2 两种方法测定9批样品结果及对比

4 讨论与结论

新建立的紫外-可见分光光度法的精密度、稳定性和重复性的RSD值分别为0.165，0.16%，0.2%，线性范围为2～20μg/mL，线性相关系数为0.9999，加标回收率为97.91%～102.99%。经方法对比发现，紫外-可见分光光度法测量结果相对偏差为0%～0.1%，低于该方法相对偏差规定值1.0%，非水滴定测定结果相对偏差为0.1%～1.1%，高于该方法相对偏差规定值0.5%，由此可见，紫外-可见分光光度法稳定性高于非水滴定测定法；另外两种方法平均偏差为0.5%～2.0%，偏差较大，而且非水滴定法含量测定结果偏低，可能是由于萃取过程及蒸干过程中造成乙酰甲喹物质流失。与原标准中非水滴定法相比，该方法简便、快速、稳定，具有环境友好性。