垂体腺瘤组织miR-26b-5p表达与术后复发的关系

聂兴玉 张铁耀 郝 昌

垂体腺瘤是比较常见的颅内肿瘤，大多为良性，手术切除能够取得较好的治疗效果。然而，部分垂体腺瘤表现为侵袭性生长，可累及周围组织，手术彻底切除难度非常大，术后复发风险较高。垂体腺瘤的发生机制较复杂，可能与免疫功能低下、转录因子、基因突变等有关。研究表明微小核糖核酸（microRNA，miRNA）与肿瘤形成密切相关。miR-26b-5p能通过沉默转录因子表达，调控胶质瘤细胞凋亡、侵袭。miR-26b-5p 还可靶向调节人类Jagged1 基因，抑制肿瘤细胞增殖。本文探讨垂体腺瘤组织miR-26b-5p 表达变化及其与术后复发的关系，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2018 年1 月～2020 年1 月月手术切除的124例垂体腺瘤组织，其中男67例，女57例；年龄25～55 岁，平均（40.65±13.11）岁；吸烟史31 例，饮酒史28例。本研究方案获伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：术后病理证实为垂体腺瘤；年龄≥18岁；术前无免疫治疗、放/化疗史；知晓研究目的与意义，签署同意书。排除标准：有脑膜炎、脑梗死等病史；合并心脏、肝脏等重要脏器功能不全；有自身免疫疾病、血液系统疾病病史；患其他原发性肿瘤；长期使用激素、免疫抑制剂；患可影响免疫功能的疾病（例如结核病、类风湿性疾病等）。

1.3 miR-26b-5p 表达水平的检测 利用实时逆转录聚合酶链反应法（quantitative real-time reverse tran⁃scription polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测垂体腺瘤组织miR-26b-5p相对表达水平。利用Trizol法提取总RNA，逆转录反应合成cDNA，然后行PCR反应，反应条件：94 ℃、10 min（预变性）；94 ℃、30 s（变性），60 ℃、30 s（退火），72 ℃、30 s（延伸），循环30次。引物序列：miR-145-5p 上游引物为5′-CTA⁃AATGCAGAAGTGCAC- 3′ ，下 游 为 5′- TTTG⁃GAAAGTCAGGTGCAATT-3′；内参U6上游引物序为5′-GGAAATTCGTGTCGGTCT-3′，下游为5′-GTA⁃AGACACGGGTACGAAA-3′。利用2计算miR-26b-5p 的相对表达量。根据miR-26b-5p 表达水平均值分成高表达与低表达。

1.4 随访及术后复发的定义 术后随访48 个月。复发的定义：术后已消失的症状再次出现；内分泌指标达到缓解标准后再次升高；影像学检查再次出现肿瘤生长。

1.5 统计学方法 应用SPSS 20.0软件分析；正态分布的计量资料采用±

s

表示，行

t

检验；计数资料行

χ

检验；利用多因素logistic 回归模型分析垂体腺瘤术后复发的危险因素；绘制受试者工作特征（receiver op⁃erating characteristic，ROC）曲 线 分 析miR- 26b-5p 表达水平判断术后复发的效果；

P

<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 术后复发率124例中，术后复发34例，复发率为27.42%（34/124）。90例未见复发。

2.2 miR-26b-5p 表达与垂体腺瘤术后复发的关系复发垂体腺瘤miR-26b-5p 相对表达量（1.25±0.43）明显低于非复发垂体腺瘤[（1.87±0.49）；

P

<0.001]。2.3 垂体腺瘤术后复发的危险因素 单因素分析显示，肿瘤侵袭性、肿瘤大小和病程、肿瘤切除程度、术后辅助治疗、miR-26b-5p表达水平与垂体腺瘤术后复发有关（

P

<0.05，表1）。多因素logistic回归分析显示，肿瘤侵袭性生长、肿瘤最大径≥40 mm、病程≥12个月、miR-26b-5p低表达是术后复发的独立危险因素（

P

<0.05，表2），而肿瘤全切除、术后辅助治疗是预防术后复发的有益因素（

P

<0.05，表2）。

表1 本文124例垂体腺瘤术后复发影响因素的单因素分析（例）

注：与非复发组相应值比，*<0.05

危险因素性别 男女年龄<40岁≥40岁侵袭性生长 是否病理类型肿瘤最大径病程肿瘤切除程度术后辅助治疗miR-26b-5p表达无功能性腺瘤功能腺瘤≤10 mm 10～29 mm≥30 mm<12个月≥12个月全切除未全切除有无高表达低表达复发组20（58.82%）14（41.18%）15（44.12%）19（55.88%）26（76.47%）*8（23.53%）7（20.59%）27（79.41%）3（8.82%）18（52.94%）13（38.24%）*16（47.06%）18（52.94%）*4（11.76%）30（88.24%）*19（55.88%）*15（44.12%）7（20.59%）27（79.41%）*非复发组47（52.22%）43（47.78%）44（48.89%）46（51.11%）22（24.44%）68（75.56%）24（26.67%）66（73.33%）15（16.67%）67（74.44%）8（8.89%）66（73.33%）24（26.67%）44（48.89%）46（51.11%）83（92.22%）7（7.78%）60（66.67%）30（33.33%）

表2 本文124例垂体腺瘤术后复发影响因素的多因素logis⁃tic回归分析

危险因素侵袭性生长肿瘤最大径病程≥12个月肿瘤全切除术后辅助治疗miR-26b-5p低表达95%置信区间1.825～4.768 P值<0.001≤10 mm 10～29 mm≥30 mm比值比2.950 1.000 2.162 3.152 3.521 0.839 0.948 1.232 0.978～4.779 1.714～5.796 1.260～9.839 0.755～0.932 0.923～0.974 1.058～3.524 0.057<0.001 0.016 0.001<0.001<0.001

2.4 miR-26b-5p表达水平判断垂体腺瘤术后复发的效果ROC 曲线分析显示，miR-26b-5p 表达水平评估垂体腺瘤术后复发的曲线下面积（area under curve，AUC）为0.841（95% CI 0.767～0.915；

P

<0.001），最佳截断值为1.518，敏感度为84.80%，特异度为81.00%。见图1。

图1 ROC曲线分析miR-26b-5p表达水平评估垂体腺瘤术后复发的效果

3 讨论

垂体腺瘤的形成过程较复杂，涉及血管生成、细胞粘附、细胞增殖等因素，具体机制尚不清楚。研究显示垂体腺瘤的发生是多种因素参与的复杂过程，可能与基因异常表达所致的细胞增殖、分化有关。研究表明miR-26 家族与肿瘤发生、发展存在密切关联。miR-26b-5p 为miR-26 家族的一员，其异常表达也与肿瘤发生有关。本研究显示，与未复发的垂体腺瘤相比，复发垂体腺瘤组织miR-26b-5p表达水平明显下降。miR-26b-5p 在多种肿瘤中起到抑制细胞增殖的作用。研究发现肝癌组织呈低表达，下调VE-cadherin、Snail 和基质金属蛋白酶Ⅱ的表达水平，抑制血管生成。miR-26b-5p 还能抑制S100钙结合蛋白A7的表达，从而抑制肝内胆管癌细胞的迁移与分化、增殖。有研究发现，垂体腺瘤miR-26b-5p表达下降，且与Ki-67表达呈负相关，与垂体腺瘤的侵袭性密切相关。而赵红阳等发现Ki-67 指数越高，垂体腺瘤术复发风险也相应增高。这提示，miR-26b-5p 对垂体腺瘤有抑制作用，可能涉及对Ki-67的调控。

垂体腺瘤大多预后良好，但仍无法完全避免术后复发，部分病人因肿瘤过大，或肿瘤存在侵袭性，导致完全切除难度增加，影响病人预后。本文发现垂体腺瘤术后复发与肿瘤大小、侵袭性、病程、肿瘤切除程度、术后辅助治疗等有关。分析原因可能为肿瘤过大、有侵袭性以及病程长的病人，垂体腺瘤进展较明显，尤其是侵袭性肿瘤，可侵犯邻近组织，全切除率低，术后复发风险高。本文还发现miR-26b-5p低表达增加垂体腺瘤术后复发的风险，表达水平越低，则术后复发风险越高；ROC曲线分析显示miR-26b-5p 表达水平对评估垂体腺瘤术后复发有一定的价值。曹文红发现miR-26b-5p 高表达能对高迁移率族蛋白组A1 以及Vimentin 水平进行调控，降低肿瘤细胞的迁移能力与侵袭能力。这提示miR-26b-5p 表达降低，则抑制细胞增殖、侵袭的能力降低，增加术后复发的风险。

总之，复发垂体腺瘤的miR-26b-5p表达水平明显下降，miR-26b-5p 表达变化与术后复发密切相关，对评估垂体腺瘤术后复发有一定的价值。