脑膜瘤Nestin表达与术后复发的关系

麦麦提依明·托合提 李金贤 乌拉别克·毛力提 赵文君 黄啸元 吴尚谕 王继超

脑膜瘤是颅内常见的肿瘤，大多数为良性，与周围组织界限清晰。部分脑膜瘤膨胀性生长，可能累及血管、颅骨、脑实质，与周围组织解剖结构复杂，增加了肿瘤全切除难度，导致术后容易复发。脑膜瘤复发影响病人的预后。研究表明巢蛋白（Nestin）是一种肿瘤干细胞标记物，参与肿瘤细胞增殖、侵袭、生长等过程。有学者发现Nestin 与非小细胞肺癌的淋巴结转移、分化程度、肿瘤大小等病理特征有关。本文探讨Nestin 在脑膜瘤组织中的表达及其与脑膜瘤术后复发的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2015 年9 月～2017 年9 月手术切除的169 例脑膜瘤，其中男78 例，女91 例；年龄31～73岁，平均（50.53±12.48）岁；WHO分级Ⅰ级133例，Ⅱ级20 例，Ⅲ级16 例。纳入标准：术后病理证实为脑膜瘤；年龄≥18岁；术前无放/化疗及免疫治疗史；3个月内无免疫抑制剂、糖皮质激素应用史。排除标准：复发性脑膜瘤；合并严重的心、肝、肾脏功能障碍；合并患其他原发性肿瘤；存在血液系统疾病、自身免疫性疾病、传染性疾病；既往有精神病史。

1.2 检测方法 利用免疫组化染色法测定Nestin表达情况。组织蜡块切片，厚4 μm。脱蜡、水化后，PBS清洗3 次，3 min/次。利用3%双氧水灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3 次，3 min/次。用PBS 洗3 次，3 min/次，微波炉加热行抗原修复，冷却至室温。加正常山羊血清，室温下反应20 min。加一抗4 ℃过夜，PBS 洗3 次，3 min/次。加二抗室温下反应30 min，PBS 洗3 次，3 min/次。加辣根酶标记链霉卵白素液，室温下反应30 min。PBS洗3次，3 min/次。行DAB显色后，苏木精复染，显微镜下观察。免疫组化染色结果判断：若细胞核、细胞质中可见棕黄色以及棕褐色染色，则判定为阳性细胞（图1），选取5 个高倍视野（×200）进行观察，染色结果计分：无染色为0分，黄色1为分，棕黄色2为分，棕褐色3为分；阳性细胞占比0～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。两者乘积为最终评分，0～1分为阴性，≥2分为阳性。

图1 免疫组化染色检测脑膜瘤Nestin表达（SP法，×200）

1.3 随访方法 术后随访4 年，随访时进行MRI 检查。肿瘤基底部硬膜缘或肿瘤侵袭部位如矢状窦或海绵窦内等部位少量残留肿瘤再次生长，或全切除术后再发现肿瘤定为复发。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计数资料行

χ

检验；正态分布计量资料用±

s

表示，行

t

检验；采用多因素logistic回归模型分析脑膜瘤术后复发的危险因素；

P

<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑膜瘤Nestin表达 脑膜瘤Nestin阳性表达率为73.37%（124/169），其中WHO分级Ⅰ级脑膜瘤Nestin阳性表达率[50.94%（27/53）]明显低于Ⅱ级、Ⅲ级脑膜瘤[分别为80.90%（72/89）、92.59%（25/27）；

P

<0.001]。2.2 脑膜瘤术后复发率及术后复发的危险因素169例中，术后复发43 例，复发率为25.44%。脑膜瘤WHO分级、肿瘤大小、肿瘤侵袭性生长、肿瘤侵犯海绵窦、肿瘤包绕血管神经、Nestin 表达水平、肿瘤切除程度与术后复发有关（

P

<0.05；表1）。多因素lo⁃gistic回归分析显示，WHO分级Ⅱ～Ⅲ级、肿瘤直径≥5 cm、肿瘤侵袭性生长、肿瘤侵犯海绵窦、肿瘤包绕血管神经、Nestin 表达阳性是脑膜瘤术后复发的独立危险因素（

P

<0.05，表2），肿瘤全切除是预防术后复发的保护因素（

P

<0.05，表2）。

表1 脑膜瘤术后复发影响因素的单因素分析（例）

注：与未复发组相应值比，*<0.05

危险因素性别 男女年龄WHO分级<50岁≥50岁Ⅰ级Ⅱ～Ⅲ级<5 cm≥5 cm肿瘤大小瘤周水肿肿瘤钙化肿瘤侵袭性生长肿瘤侵犯海绵窦肿瘤包绕血管神经Nestin表达肿瘤切除程度阴性阳性全切术未全切除未复发组62（49.21%）64（50.79%）59（49.17%）67（53.17%）117（92.86%）9（7.14%）86（68.25%）40（31.75%）95（75.40%）32（25.40%）22（17.46%）30（23.81%）21（16.67%）42（33.33%）84（66.67%）67（53.17%）59（46.83%）复发组16（37.21%）27（62.79%）14（32.56%）29（67.44%）16（37.21%）27（62.79%）*8（18.60%）35（81.40%）*32（74.42%）17（39.53%）24（55.81%）*25（58.14%）*22（51.16%）*3（6.98%）40（93.02%）*9（20.93%）34（79.07%）*

表2 脑膜瘤术后复发影响因素的多因素logistic回归分析

危险因素WHO分级Ⅱ～Ⅲ级肿瘤直径≥5 cm肿瘤侵袭性生长肿瘤侵犯海绵窦肿瘤包绕血管神经Nestin表达阳性肿瘤全切除比值比3.528 2.718 2.979 3.067 3.774 2.715 0.877 95%置信区间1.278～9.739 1.840～4.015 1.633～5.434 1.487～6.326 1.898～7.504 1.198～6.153 0.802～0.959 P值0.015<0.001<0.001 0.002<0.001 0.017 0.004

3 讨论

脑膜瘤是常见的颅内肿瘤，多为良性，手术切除效果良好。但部分脑膜瘤部位特殊，涉及复杂的血管、神经组织，手术全切除难度大，术后复发率高。如何改善脑膜瘤预后仍是临床需要解决的问题。

本文结果显示脑膜瘤术后复发与多种因素相关，其中WHO 分级、肿瘤大小、肿瘤侵犯海绵窦、肿瘤包绕血管神经以及肿瘤切除程度为较常见的影响因素。另外，本文结果显示Nestin 阳性表达也是脑膜瘤术后复发的一种危险因素。Nestin 基因多态性在肿瘤中有重要的调节作用，Nestin 的Thr315 或Thr1299磷酸化对细胞增殖有较大影响，参与肿瘤进展。王攀等发现Nestin过表达与皮肤黑素瘤的病理分级、肿瘤大小有关，提示Nestin具有促肿瘤进展作用。Nestin 表达还与乳腺癌进展有关，受SOX10调节，对乳腺癌干细胞特性进行调控。Nestin是肿瘤干细胞标记物，在细胞骨架构成中发挥重要作用，可通过对细胞粘附因子以及肌动蛋白进行调控，影响肿瘤细胞浸润、迁移与增殖，促进肿瘤进展。Nestin 还与炎症反应有关，可能是神经炎症反应的依赖性标记物。本文发现脑膜瘤Nestin 表达与WHO 分级有关，随着WHO 分级增高，Nestin 阳性率也相应增高，提示Nestin可能促进脑膜瘤进展。

总之，Nestin 表达与脑膜瘤WHO 分级有关，其阳性表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素。