酒石酸泰万菌素注射小鼠后LD5050 的测定

杨海涵，王思怡，唐华侨，胥世洪，房春林

（1.成都乾坤动物药业有限公司，四川 成都 611130；2.四川农业大学，四川 成都 611130；3.成都农业科技职业学院，四川 成都 611130）

酒石酸泰万菌素作为目前兽医临床上常用的大环内酯类抗生素，主要用于防治猪支原体肺炎、细胞内劳森菌引起的猪增生性肠炎（回肠炎）、猪痢疾短螺旋体引起的猪痢疾，但是其剂型只有可溶性粉，没有注射剂，限制了其用于危重病例的救治。为了考察酒石酸泰万菌素注射给药的安全，笔者选用小鼠开展了相关急性毒性试验。

1 材料

1.1 实验小鼠 昆明系SPF 级小鼠120 只，购自重庆医科大学，雌雄各半，体重18～20 g，给药前禁食12 h，不禁水。

1.2 药品 酒石酸泰万菌素由成都某动物药业股份有限公司提供，给药时过滤除菌。

2 试验方法

采用改良寇氏法，并参照农业农村部新兽药一般毒性实验技术要求进行［1-2］。

2.1 预试试验

2.1.1 给药剂量换算 参照同族抗生素酒石酸泰乐菌素对猪的注射剂量（5～13 mg/kg 体重）［2］，拟定本品的注射剂量为10 mg/kg 体重，换算成小鼠的注射剂量为100 mg/kg体重［3］，即2 mg/20 g体重。

2.1.2 分组 将小鼠随机分成5组，每组6只，雌雄各半，给药前各组小鼠禁食不禁水12 h，给药2 h后自由饮食。

2.1.3 试验方法 按照酒石酸泰万菌素临床给药剂量的3 倍（300 mg/kg 体重）至18 倍（1 800 mg/kg体重）用注射用水稀释后腹腔注射小鼠，注射体积约0.2 mL/只，确定实验小鼠0%和100%死亡的剂量范围。当零死亡的给药剂量大于5 000 mg/kg体重时，表明LD50大于5 000 mg/kg体重，不需进行正式试验，只需进行最大耐受量测定和重复试验。

2.2 正式试验 根据预试结果将小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半，按照预试验得到的0%和100%死亡范围，以1∶1.2～1.4的比值确定每组的给药剂量。连续观察7 d，每天上、下午各观察1 次，包括精神状态（不动、过度兴奋、萎靡、惊跳），肌肉状态（四肢麻痹、震颤），步态（有无异常），皮毛情况（是否蓬松、无光），各天然孔状态（有无异常分泌物、大小便是否正常）等。死亡小鼠解剖观察内脏器官病变。

2.3 LD50的计算 采用改良寇氏法对酒石酸泰万菌素的LD50进行计算，如果LD50超出5000mg/kg体重，则进行最大耐受量测定和重复试验。

3 结果

3.1 预试试验 按照小鼠注射给药剂量2 mg/20 g体重，分别以3 倍递加的剂量腹腔注射小鼠，根据实际体重调整注射剂量，得出酒石酸泰万菌素腹腔注射小鼠的全部致死剂量（100%死亡）为40 mg/20 g 体重，全不致死剂量（0%死亡）为6 mg/20 g体重。试验结果见表1。

表1 酒石酸泰万菌素腹腔注射小鼠的预试结果

3.2 正式试验 根据预试试验结果，以36 mg/20 g体重（药液浓度为180mg/mL）为最高剂量，6mg/20g体重（药液浓度为30 mg/mL）为最低剂量。设定给药剂量相邻两组的比值为K＝1.348，受试药物溶液按“1∶K系列稀释法”等容量配制。每组实验动物腹腔注射体积为0.2 mL/20 g 体重，根据实际体重调整注射剂量。结果见表2。

表2 酒石酸泰万菌素腹腔注射小鼠的正试结果

3.3 毒性反应 小鼠给药后，表现出蜷缩、活动减少，腹腔注射后15～30 min 被毛凌乱、弓背、震颤、惊厥、迅速死亡，12 h后未发生死亡，未发现天然孔出血，解剖死亡鼠也无肉眼可见病变。未死亡小鼠自主活动减少，出现蜷缩现象，被毛凌乱，弓背、食欲略为下降，严重者出现运动失调、呼吸加深等症状，采食量下降，以上体征均在给药12～24 h 后基本恢复正常，给药后观察7 d，小鼠未出现死亡。结果见表3。

表3 注射后0～12 h、12～24 h小鼠的采食情况及7 d后体重

3.4 LD50计算 数据整理结果见表4。

表4 正式试验的数据整理

按照改良寇氏法项下公式计算得出：酒石酸泰万菌素腹腔注射小鼠的LD50为734.85 mg/kg体重，LD50的95%可信限为478.63～1 128.23 mg/kg体重。

4 脏器系数测定

采集死亡小鼠和未死亡小鼠7 d 后的肝脏、脾脏、肾脏，称取重量及小鼠体重，计算脏器系数，并与对照组比较，结果差异不显著（表5、表6）。

表5 死亡小鼠的脏器系数

表6 未死亡小鼠的脏器系数

5 未死亡小鼠的血常规检查

对未死亡小鼠进行血常规检查，发现7 d 观察期后各组小鼠的白细胞相对较少，但均在正常范围内，红细胞和血小板差异不显著。

6 结论与分析

本试验得出酒石酸泰万菌素腹腔注射小鼠的LD50为734.85 mg/kg 体重，LD50的95%可信限为478.63～1 128.23 mg/kg 体重，可以判为低毒（501～5 000 mg/kg 体重）［2］。腹腔注射后出现急性死亡，12 h 基本耐过，24 h 后食欲恢复，运动、呼吸等恢复正常。观察7 d 后与对照组比较，体重差异不大，肝脏、脾脏、肾脏的脏器系数也与对照组无显著差异。据报道［4-8］，用泰万菌素给小鼠口服时LD50小于同族抗生素泰乐菌素的LD50（12.22g/kg），小于泰妙菌素的LD50（1.58 g/kg），也小于替米考星口服给药的LD50（2.071 g/kg），但注射给药高于替米考星对小鼠注射给药的LD50（595.36 mg/kg）。以上结果说明泰万菌素口服安全，但注射给药存在风险，其安全性需要进一步验证。■