IGRT+TP方案对非小细胞肺癌患者HAb18G、MMP-9水平的影响

麻发强 赵春龙 廖光辉 邹茵 黄贵佳 杨完

(贵州医科大学第二附属医院，贵州 凯里 556000)

非小细胞肺癌与长期的电离辐射、吸烟、遗传、环境接触、肺部慢性感染因素有关〔1〕。其中非小细胞癌包括腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、非小细胞肺癌占到肺癌的80%，当发现体内存在50%的非小细胞时就已经处在中晚期了〔2〕。临床表现为体重减轻、咳嗽、痰出血、胸部腹痛、疲乏、食欲缺乏、体重减轻、低热等，治疗非小细胞肺癌的治疗方法主要有靶向治疗、手术治疗、免疫治疗、放化疗〔3，4〕。尤其要注意的是非小细胞肺癌严重影响患者的呼吸系统，给治疗增加了难度，有些患者会严重的危害到患者的生命〔5，6〕。通过放疗、化疗的方法可以有效地延长患者的生命，但是并不能很好地治愈非小细胞肺癌。且目前临床中缺乏有效治疗非小细胞肺癌的治疗方法，本研究旨在探讨引导放射治疗(IGRT)+化疗方案(TP)方案对非小细胞肺癌患者HAb18G、基质金属蛋白酶(MMP)-9水平的影响。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2017年4月至2018年4月在贵州医科大学第二附属医院收治的非小细胞肺癌病患82例，诊断标准：符合《NCCN非小细胞肺癌临床实践指南》〔7〕对非小细胞肺癌的诊断标准。排除标准：高血压、合并糖尿病、心力衰竭、妊娠期、哺乳期、心力衰竭。随机分为TP治疗组和IGRT联合组各41例，TP治疗组年龄41～62岁，平均(48.92±9.98)岁，IGRT联合组年龄42～63岁，平均(49.87±9.98)岁，两组资料差异无统计学意义(P>0.05)。研究经医院伦理委员会批准后，所有研究对象及家属签署了知情同意书。

药物来源：顺铂注射剂(齐鲁制药有限公司，国药准字：H20023461)，规格：20 mg×5支/盒。紫杉醇注射剂(哈药集团生物工程有限公司，国药准字：H20059962)，规格：5 ml×3瓶/盒。

1.2治疗方法 TP治疗组采用化疗方案治疗：给予非小细胞肺癌患者紫杉醇135 mg/m2，加入氯化钠溶液稀释，静脉滴注3 h，使用顺铂25 mg/m2，以静脉滴注1～3 d，21 d为1个周期，以上均接受42 d的周期进行化疗。IGRT联合组在TP治疗组的基础上采用图像引导放射治疗进行治疗：非小细胞肺癌患者双手举起并交叉抱头将手放在额头处，然后采用热塑膜进行固定，接着采用Philips 16排大孔径螺旋CT模拟定位机对非小细胞肺癌患者进行扫描，着重扫描患者胸部，厚层为5 mm，接着从环甲膜扫描到肺底部，获得定位图像以后输送到Varian工作站和Varian Eclipse逆向调强计划系统，采用5野放疗，计划靶区(PTV)剂量为50 Gy，要求90%的PTV达到处方剂量，双肺受照20 Gy剂量时体积<37%，脊髓最大剂量≤40 Gy。

1.3HAb18G检测 抽取非小细胞肺癌患者的空腹静脉血4.56 ml，离心半径6 cm平均52 s转速3 000 r/min进行离心处理12 min，分离上层血清，在-66℃的环境下保存备用，采用免疫荧光定量检测法检测HAb18G，将非小细胞肺癌患者血液放在不加抗凝剂的试管中。随后将血液放在乙二胺四乙酸(EDTA)的试管中以后将血浆吸出。采集完成后马上进行检测，将抽取非小细胞肺癌患者血放在取血器后加缓冲液，混匀61 s后，将试剂卡滴三滴混合液，插入试剂卡等待185 s，就可以出来HAb18G的检测结果。反应体系：8 μl cDNA模板、10 μl SYBRP Green mix、2 μl PCR Primer mix。反应条件：95℃ 10 min；95℃ 10 s；60℃ 1 min；40个循环。以β-actin为内参，采用2-△△Ct方法计算HAb18G表达量。内参引物序列：上游：5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′，下游：5′-GAGGATCTTCATGA-GGTAGTCAGT-3′。HAb18G引物序列：上游：5′-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3′，下游：5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′。

1.4血清MMP-9、细胞角质素片段抗原(CYERA)21-1、糖类抗原(CA)125、癌胚抗原(CEA)水平检测 采用酶联免疫吸附试验检测血清MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA，制作标准品，以1∶2的稀释液稀释样品；在反应孔中加入以稀释的标准品100 μl/孔，在37℃恒温孵育箱中湿育2 h；用洗涤液将反应板洗3次后，加入1∶100倍稀释后的抗体工作液100 μl/孔，放于37℃恒温孵育箱中湿育47 min；继续清洗反应板2次后，在反应孔内加入TMB溶液100 μl/孔，置于37℃恒温孵育箱中湿育47 min后在反应孔内加入终止液100 μl/孔终止反应，在451 nm波长测定吸光度，颜色反应深浅与MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA水平呈正比，经绘制标准曲线计算MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA水平。

1.5临床疗效评价 依据WHO的标准将临床疗效分为：完全缓解、部分缓解、稳定、进展。完全缓解：非小细胞肺癌肿瘤完全消失；部分缓解：非小细胞肺癌肿瘤缩小一半以上；稳定：非小细胞肺癌中肿瘤缩小或者增大不超过肿瘤本身的25%，且没有新病灶的出现；进展：非小细胞肺癌中的肿瘤缩小或者增大超过肿瘤本身的25%，且有新病灶的出现。(有效为有效缓解+部分缓解)。

1.6不良反应情况统计 统计出在治疗非小细胞肺癌过程中非小细胞肺癌患者出现食欲不振、掉发、干呕等不良反应情况。

1.7生存周期统计 在非小细胞肺癌患者治疗结束后行为期12个月的随访，统计中位生存期、生存率。

1.8统计学处理 采用SPSS20.0软件行t、χ2检验。

2 结 果

2.1两组HAb18G、MMP-9水平变化比较 两组治疗前HAb18G、MMP-9表达差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后两组HAb18G、MMP-9水平明显低于治疗前，且IGRT联合组的HAb18G、MMP-9水平明显低于TP治疗组(P<0.05)。见表1。

表1 两组HAb18G、MMP-9水平变化比较

2.2两组肿瘤标志物水平变化比较 两组治疗前CYERA21-1、CA125、CEA表达差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后两组CYERA21-1、CA125、CEA水平明显低于治疗前，且IGRT联合组明显低于TP治疗组(P<0.05)。见表2。

表2 两组肿瘤标志物水平变化比较

2.3两组临床疗效比较 IGRT联合组治疗总有效率(90.24%，完全缓解16例、部分缓解21例、稳定2例、疾病进展2例)明显高于TP治疗组(63.41%，完全缓解12例、部分缓解14例、稳定8例、疾病进展7例；χ2=8.289，P=0.003)。

2.4不良反应发生情况比较 IGRT联合组总不良反应发生率(14.63%；食欲不振3例、掉发2例、干呕1例)略高于TP治疗组(12.19%，食欲不振2例、掉发2例、干呕1例)，但两组比较无统计学差异(χ2=0.104，P=0.745)。

2.5两组生存周期比较 IGRT联合组中位生存期、生存率均明显高于TP治疗组(P<0.05)。见表3。

表3 两组生存周期比较

3 讨 论

非小细胞肺癌在中国是最为常见的肿瘤，死亡率与发病率在恶性肿瘤的首位，男性的发病率要远远高于女性〔8〕。当发现已经患有非小细胞肺癌的时候一定要戒烟，原发病灶位置与转移情况都会影响非小细胞肺癌的症状。非小细胞肺癌是源于支气管腺体、支气管黏膜、肺泡上皮的一类肺恶性肿瘤，按照组织病理学可以将癌分为多种亚型，比如：腺癌、腺鳞癌、鳞状细胞癌、肉瘤样癌等〔9〕。非小细胞肺癌与基因长期、环境因素的长期相互作用有关，环境抑素指的是自身因素、营养状态等。非小细胞肺癌会出现远外转移的症状，比如会出现肝脏转移、肾上腺、中枢神经系统转移、骨骼转移、淋巴结转移〔10〕。

IGRT是一种利用放射线有效的治疗肿瘤的局部治疗方法，放射治疗的疗效取决于放射敏感性，不同的器官及肿瘤的位置在照射的位置出现变化的时候会出现不同的反应，可以按照不同种类的肿瘤分类：比如消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、神经系统肿瘤、皮肤及软组织恶性肿瘤、骨恶性肿瘤、淋巴类肿瘤等〔11，12〕。但是一般晚期肿瘤患者是绝对不可以进行放射治疗的，另外一些肺癌合并大量腔积液、食管癌穿孔也不可以使用放射来治疗，尤其是肺功能严重不全的患者不可以放射治疗〔13〕。化疗是一种可以全身治疗的手段，通过口服、体腔给药等途径都会随着血液循环至全身器官和组织，化疗包括根治性化疗、姑息性化疗、术前辅助化疗、术后辅助化疗、腔内化疗〔14〕。通过规范的化疗有极大的可能性治愈恶性肿瘤，敏感或者相对性敏感的恶性肿瘤是在术前或者术后进行化疗的，但是化疗是有一定性的副作用的，比如会出现消化系统的反应，呕吐、恶心、便秘、腹泻等，其中恶心呕吐是最常见的，还会出现骨髓移植、脱发、肝肾功能损害等〔15〕。但是如果非小细胞肺癌患者的体质太差或者年龄太大不建议采用化疗，还有一些严重器官受损、早期癌症、对化学药物不敏感或者已经产生了耐药性的患者也不建议采用化疗〔16〕。

HAb18G、MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA都会在非小细胞肺癌中出现异常表达的水平变化，都可以成为非小细胞肺癌新的肿瘤标志物，都可以作为非小细胞肺癌的诊断标准〔17〕。HAb18G在非小细胞肺癌中出现升高表达，与非小细胞肺癌病理、转移、预后都有一定的相关性。可以用作非小细胞肺癌中的参考指标，表达越高越说明恶化程度越高，非小细胞肺癌的预后感越差，可以为临床提供一定的参考价值。MMP-9属于MMPs家族，可以重塑或者降解细胞外基质动态的平衡〔18〕。MMP-9可以分解肺内及呼吸道的结构复合物，还可以参与肺和呼吸道的重建〔19〕。CYERA21-1可以作为一种新的肺癌肿瘤标志物，对非小细胞肺癌有着较高的诊断价值，可以作为化疗、放疗早期有效的指标。可以从血清、胃液、尿液等体液或者排泄物中检出，对恶性肿瘤的病情检测、疗效评价有着极大的诊断价值〔20，21〕。本研究说明IGRT联合TP可改善患者的预后情况，延长患者的生命，有良好的治疗效果。

综上，IGRT联合TP治疗的效果可显著改善非小细胞肺癌患者体内的HAb18G、MMP-9水平，并改善临床症状，对非小细胞肺癌有良好的疗效。