Biolis 30i生化分析仪检测血清25-羟维生素D的初步评价

邹春霞，刘 琴，王玲萍，许 中

(1.苏州市立医院检验科，江苏 苏州 215001；2.苏州市相城区漕湖人民医院检验科，江苏 苏州 215144）

维生素D是一种脂溶性维生素，同时也是一种具有激素样作用的类激素样物质，在人体内调节钙磷代谢，参与骨骼形成，有抗佝偻病及抗骨质疏松的重要作用。血清维生素D水平与佝偻病、骨质疏松相关，同时还与高血压、糖尿病、肿瘤、免疫性疾病、感染等多种疾病相关[1-3]。25-羟维生素D[25(OH)D]是维生素D在体内的主要循环形式。因此，临床一般将血清25(OH)D作为衡量体内维生素D水平的最佳指标[4]。

本研究旨在通过对日本东京贸易医疗设备株式会社（Tokyo Boeki Medisys Inc.）生产的Biolis 30i全自动生化分析仪应用苏州博源医疗科技有限公司生产的总25(OH)D胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒进行分析性能评估，整体评价Biolis 30i全自动生化分析仪检测总25(OH)D的临床应用。

1 材料与方法

1.1 样品来源 性能验证样本，低值、中值和高值等血清样品，均来自2020年1月—3月本院血清样品，样品收集后在-20 ℃下冻存；方法学比对验证样品，选取本院同期无溶血、脂血、黄疸新鲜血清样品30 例，样品收集后在-20 ℃下冻存。

1.2 主要仪器与试剂 Biolis 30i全自动生化分析仪（日本东京贸易医疗设备株式会社），相应配套总25(OH)D试剂（校准品和质控品），由苏州博源生产，批号为200110；罗氏COBAS E6000全自动电化学发光仪及相应配套试剂，批号为201013。前者为性能验证及比对试验试剂，后者为参比试剂。进行性能验证实验前应做好仪器校准，使用质控品进行常规质量控制，确保在控后方可进行实验。

1.3 正确度试验 选取低、中、高3个不同浓度水平（Co）的临床血清样品，分别加入25(OH)D3标准溶液（北京中科，Cs＝150 ng/mL），配制成待测回收样品（浓度C），重复测定3 次，计算各自的样品回收率（R）[5]。

1.4 精密度试验 参照NCCLS EP15-A文件[5]要求，选取低值和高值浓度血清样品，每个样品重复测定4次，每日一个批次，连续测定5 d。

1.5 线性范围 参照NCCLS EP6-A文件[6]，将高值（H）与低值（L）血清样本按比例进行稀释，L:H分别为5:0、4:1、3:2、2:3、1:4、0:5。每个浓度测定2 次，实验当天完成，以理论值为X轴，实测均值为Y轴绘制散点图。

1.6 可报告范围 选择临床高值血清样本，用稀释液按1:2、1:5、1:10、1:20比例稀释血清，并对各稀释后的样本重复检测2 次，取均值。比较各稀释样品的实测值和理论值，计算比值R，根据120%≥R≥80%的最大稀释比例定为可接受限的规则。

1.7 干扰实验 取两个血清标本，分别加入一定量的高浓度血红蛋白（干扰检查A试剂盒，SYSMEX出品）至样本中，配制成血红蛋白浓度为1.13、2.26、4.52和8.21 g/L的溶血样本，同时配制空白对照样本（用空白液替换高浓度血红蛋白），测定溶血样本和空白对照样本，计算相对偏差B。判断标准为相对偏差B≤12.5%表示对结果无影响[7]。

1.8 统计学分析 应用MedCalc分析软件。

2 结果

2.1 正确度试验 血清样品回收率，均在90%～110%，符合厂商声明。详见表1。

表1 正确度试验结果

2.2 精密度试验 低值样本和高值样本的批内精密度分别为3.76%和2.72%，均小于1/4 TEa（6.25%）允许范围内；总精密度分别为4.54%和3.26%，均小于1/3 TEa（8.33%）。批内及总精密度在厂商声明的允许范围内。

2.3 线性范围 结果在8.0～152.0 ng/mL范围内线性关系良好，回归方程为Y＝-0.9882X+0.209，R2＝0.9973。结果显示，本检测系统线性良好。详见图1。

图1 线性范围散点图

2.4 可报告范围 本实验的最大稀释度为1:5倍，分析测量范围上限为145 ng/mL，可报告范围为145×5＝725 ng/mL。

2.5 干扰实验 结果显示，标本的血红蛋白浓度≤4.52 g/L对检测结果无明显影响，详见表2。

表2 溶血干扰试验结果

2.6 临床样品比对 取本院2020年1月—3月无明显溶血、脂血、黄疸的新鲜血清样品30 例，同时应用Biolis 30i（Y）和罗氏（X）进行25(OH)D比对检测。结果显示，两种方法一致性良好（回归方程Y＝0.8969X-1.6121，R2＝0.9527）。

3 讨论

Biolis 30i全自动生化分析仪是一款台式小型生化分析仪，具有体积小、轻便、功能齐全等特点，检测速度达到270 T/h，13 个固定波长，检测项目可达到36 个，适合小型实验室应用。本文参照CLSI文件对Biolis 30i全自动生化分析仪配套苏州博源生产的总25(OH)D试剂的重要检测性能，包括正确度、精密度、线性范围、干扰试验等进行评价。结果显示，低、中、高浓度血清样品的回收率分别为97.8%、102.3%、102.4%，在可接受范围内；低值、高值血清样品的批内精密度为3.76%和2.72%，小于厂商声明的1/4 TEa（6.25%）；总精密度分别为4.54%、3.26%，在1/3 TEa（8.33%）允许范围内；线性范围为8.0～152 ng/mL，分析测量范围上限145 ng/mL，可报告范围为725 ng/mL；应用临床血清样本，分别用Biolis 30i全自动生化分析仪与同类产品罗氏发光进行了方法学比对，结果一致性良好（R2＝0.9707）。结果表明，Biolis 30i全自动生化分析仪配套博源生产的总25(OH)D检测试剂盒的性能实验参数，符合相应的实验室质量要求，可常规检测开展。

同时，为了探讨采用末梢微量血在儿童进行25(OH)D检测的可能性，我们进行了反复多次实验，发现在采集末梢血样本离心后，易产生溶血。在性能验证时，加入了血红蛋白干扰试验，以观察其对实验的影响程度，结果显示，在样本轻度到中度溶血时（血红蛋白浓度≤4.52 g/L），对应用博源胶乳比浊法试剂检测25(OH)D无明显影响。有关末梢微量血检测25(OH)D的相关数据，后续将会进行总结。

维生素D具有非常重要的生理功能，而临床血清标本检测的灵敏度和准确性一直是困扰实验室的难题，众所周知，LC-MS/MS是检测25(OH)D的金标准，但设备过于昂贵，人员的专业要求高等限制了临床推广应用[8]。目前检测方法较多，但因平台不同，结果的一致性无法保证[9]。随着研究的进一步深入及相关技术的推广应用，相信在不远的将来，25(OH)D检测方法将多样化，性能也更灵敏、更准确，朝着微量、全自动化高通量等方向发展[10]。我们也一直在进行这方面的尝试，以使得25(OH)D的检测更准确、更便捷、更适用于基层医疗机构。