枫香树不同部位中芦丁含量的测定及枫香树叶的生药学研究

周燕霞，乐志燕

(江西医学高等专科学校药学院，江西 上饶 334000)

0 引言

枫香树系金缕梅科枫香属植物，因其外形与枫树极为相似且有芳香味而得名，为1996年版《江西省中药材标准》收载的中药品种[1]。主要分布于我国河南、山东、江西、四川、云南等地，多生于平地。具有祛风除湿、利水除湿、解毒止痛、止血生肌等功效，临床上常用于治疗伤暑腹痛、创伤出血、泄泻咳血等疾病[2]。研究显示，枫香树中含有色素、黄酮类、挥发油、酚酸类、环烯醚萜类等成分[3-4]，其中黄酮类化合物是枫香树药材中主要活性成分，具有抗炎镇痛、抗氧化、抗抑郁以及抗肿瘤等多种药理活性，常作为质量控制指标性成分[5]。据报道，枫香树全身都是宝，其树脂能入药以解毒止痛、止血生肌，根、茎、叶及果实亦可入药以祛风除湿、通络活血[6-7]。目前，对于枫香树不同部位中黄酮类成分的含量测定研究较少，仅有学者对枫香树叶中黄酮类成分进行了HPLC含量测定研究，根和茎中黄酮类成分的含量测定研究还尚未见相关研究报道。因此，为进一步开发利用枫香树药材，本文以芦丁为指标成分，建立了枫香树不同药用部位(根、茎、叶)中芦丁的HPLC含量测定方法，对其进行性状、显微特征研究，以期为枫香树药材的资源开发、综合利用和质量控制研究提供依据、奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦科技有 限 公 司 )；phenomonex-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱(上海精瑞科学仪器有限公司)；sartorius BS-124S电子天平(德国赛多利斯公司)；PH100-3B41L-IPL显微镜(江西凤凰光学股份有限公司)；XL-02A中药粉碎机(济南欧莱博科学仪器有限公司)；检验筛(沪江仪器纱筛厂)，酒精灯及其他显微鉴定为实验室常用仪器。

1.2 试药

对照品芦丁(批号111869-201802，纯度99.6%)购自中国药品生物制品检定所。枫香树药材购买于揭阳中药市场，经鉴定为枫香属植物枫香Liquid-ambar formosana Hance的根茎叶；甲醇、磷酸、无水乙醇、水合氯醛、间苯三酚、稀甘油、碘试液等均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为去离子水。

表1 加样回收率实验结果(n=6)

2 方法与结果

2.1 不同部位中芦丁含量的测定

2.1.1 色谱条件

采用phenomonex-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈(20)-0.1%磷酸水溶液(80)为流动相等度洗脱，检测波长为 360 nm；流速为 1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；进样量10 μL。理论塔板数按芦丁峰计算，应不得低于3000，结果见图1。

图1 HPLC色谱图

2.1.2 标准品溶液制备

精密称取芦丁对照品16.0 mg，至50 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，定容，摇匀，配得质量浓度分别为0.32 mg·mL-1的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液制备

精密称取干燥粉碎后的枫香树根、茎、叶各1.0 g，分别置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，称重，超声提取30 min，冷却后称重，用70%乙醇补足失重，得供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察

精密吸取“2.2”项下对照品溶液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mL置 10 mL的容量瓶中，加入甲醇溶液并定容至刻度。按“2.1”项下色谱条件进样分析，以峰面积Y对进样浓度X计算得回归方程Y=206685X+149.51(r=0.999 8)，表明芦丁在浓度范围0.008-0.32 mg·mL-1内与峰面积呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样测定6次，计算峰面积。结果芦丁峰面积RSD为1.73%，表明仪器的精密度良好。

2.1.6 重复性试验

取枫香树茎样品6份，按“2.3”项下方法制成溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算峰面积。结果芦丁峰面积RSD为1.38%，表明方法的重复性好。

2.1.7 稳定性试验

取枫香树茎样品，分别在 0、2、4、8、12、24 h 下进样测定分析。结果芦丁峰面积RSD为2.05%。表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.8 加样回收率试验

取已知含量的枫香树茎样品6份，每份约0.5 g，按约1:1的比例加入对照品，按“2.3”项下方法制备成溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算回收率。结果见表2，表明所建立的方法可行。

2.1.9 样品含量测定

按“2.2”项下方法制备枫香树根茎叶不同部位的供试品溶液，每批均平行制备3份，按“2.1”项下色谱条件对其进行含量测定，结果枫香树不同部位中芦丁的含量分别为：根0.0192 mg/g，茎0.0948 mg/g，叶中未检测出芦丁成分。

2.2 枫香树叶的生药学研究

2.2.1 原植物形态

为落叶乔木，多生长于山谷、山麓中，常与山毛榉科、樟科、榆科等树种混生。可达20-30 m的高度，胸径最大者可达1m。小枝干后灰色，被柔毛，略有皮孔；芽体卵形，长1.0 cm左右，鳞状苞片敷有树脂，干后会呈现棕黑色，并且伴有光泽，具体形态特征如图2所示。

图2 枫香树原植物

2.2.2 性状鉴定

叶薄革质，其容易破碎，完整的叶片呈阔卵形，掌状3裂，长大约在5-12 cm，宽大约在7-17 cm，两侧裂片平展；基部心形，边缘有细锯齿，干后灰绿色；下面有短柔毛，或变秃净仅在脉腋间有毛；常状脉3-5条，在叶下面明显突起；齿尖有腺状突；叶柄长大约7-11 cm，基部鞘状，具体见图3。

图3 枫香树叶药材图

2.2.3 显微特征

药材粉末灰绿色或淡棕色，非腺毛较多，单细胞，为厚壁非腺毛，细长；表皮细胞表面观成不规则形，细胞壁弯曲，主为平轴式，副卫细胞大多为四个；导管主要为螺纹导管；草酸钙方晶较小，分布不均；淀粉粒较小，单粒类球形，脐点明显，复粒2~3分粒组成，具体见图4。

图4 枫香树叶显微鉴定图

3 讨论

随着“健康中国”战略的实施，大健康产业已得到广泛认同和快速发展，中医药在大健康领域的作用越来越大，中药材种植生产的规模也在逐步扩大。但中药材在生产加工过程中，往往取单一部位入药，剩余部位被废弃，得不到科学合理的利用，既造成资源浪费，也严重污染环境[8]。近年来，随着中药被广泛用于脱贫攻坚和乡村振兴，为使中药资源利用最大化，很多学者对中药传统非药用部位化学成分、药理作用以及不同部位之间的药理活性评价、有效成分比较、活性成分制备等方面开展了深入研究，并取得了丰硕的成果，为中药非药用部位的潜在药用价值和资源开发奠定了基础。

枫香树不仅可以药用，在环保方面也极具价值，既可改善生长地的土地质量、防止水土过度流失、净化空气质量、保护生态环境，还因树叶鲜红极具观赏性，常在城市规划中被用以环境美化[9]。此外，枫香树作为传统中药，其全身是宝，均可药用，树脂能入药以解毒止痛、止血生肌，根、茎、叶及果实亦可入药以祛风除湿、通络活血，是极具开发意义和价值的中药。本研究一方面建立了HPLC法测定枫香树不同部位中芦丁含量并比较了含量差异，所建立的方法简便可行、准确灵敏。另一方面利用现代显微数码成相系统及其他影像资料，对枫香树叶的原植物形态、性状、粉末的显微特征进行了系统研究，研究结果清晰直观、真实的显示和反映了枫香树叶药材的原始形态、细胞特征，阐明了枫香树叶药材的鉴别要点，为后期枫香树叶药材的生药学研究、资源开发利用以及质量标准完善提供参考依据。