正交试验优选多花黄精酒制工艺*

林 漫，刘雅璇，李海刚，胡晒平，吴 柱△

（1.长沙医学院药学院，湖南 长沙 410219； 2.湖南师范大学药学院，湖南 长沙 410081）

多花黄精Polygonatum cyrtonemaHua 为百合科黄精属植物［1］，收载于2020年版《中国药典（一部）》，其主要化学成分为多糖、甾体皂苷、生物碱和黄酮等［2］，具有补气养阴、健脾、益肾、润肺、降血糖、调血脂、抗衰老等功效［3］。生黄精食之有麻舌感，并对咽喉部有刺激作用，不能直接药用，临床应用其炮制品。炮制后，其部分化学成分发生氧化与分解，咽喉刺激性成分含量减少，药效随之增强［4−5］。《本草纲目》记载，黄精“单服九蒸九曝食之，驻颜断谷……补诸虚，止寒热，填精髓”［6］。多花黄精的炮制，按炮制方法分主要有蒸制、炖制，按炮制辅料分主要有酒制、蜜制、黑豆制及多辅料制［7−9］。黄精酒制后，可助其药势，使其滋而不腻，同时增强补脾、润肺、益肾功效［10］。目前，鲜有对黄精酒制工艺的研究。本研究中采用正交试验法优选多花黄精的酒制工艺，为其规范化炮制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AL240 型电子天平（梅特勒−托利多仪器＜上海＞有限公司）；HG −4 型热风循环烘箱（中南制药机械厂）；754型紫外−可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；YRE −52C 型旋转蒸发器（巩义市予华仪器有限责任公司）；AS 型系列超声波清洗机（天津奥特赛斯仪器有限公司）。

1.2 试药

D−无水葡萄糖对照品（国药集团化学试剂有限公司，批号20180506，含量＞99%）；黄酒（绍兴女儿红酿酒有限公司，批号20180125）；蒽酮（国药集团化学试剂有限公司，批号20190305），其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。多花黄精药材（湖南银鸿农业发展有限公司，批号20191202），产自湖南安化，经湖南中医药大学药学院潘清平教授鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 酒黄精制备

采用“九蒸九烘”炮制工艺。取净多花黄精100 g、黄酒20 g，精密称定，将多花黄精与黄酒2 g 拌匀，并焖润至黄酒吸尽，置蒸笼中，密闭，隔水加热，一定时间后取出烘干，重复焖、蒸、烘8 次，第9 次将剩余黄酒及回收的黄精汁液一起拌入，重复焖、蒸、烘，切2～4 mm 厚片，烘干，得酒黄精炮制品。

2.2 浸出物测定

采用2020年版《中国药典（四部）》（通则2201）醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，以稀乙醇为溶剂［11］。

2.3 多糖含量测定

2.3.1 检测波长选择

取对照品溶液适量，进行全光谱扫描，结果多糖在582 nm 波长处的吸光度（OD）值最大，故选择检测波长582 nm。

2.3.2 溶液制备

取于105 ℃干燥至恒重的D−无水葡萄糖对照品16.5 mg，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加水溶解并定容，摇匀，即得每1 mL 含0.33 mgD−无水葡萄糖的对照品溶液。取于60 ℃干燥至恒重的酒制黄精细粉0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，水浴回流1 h，趁热滤过；残渣用热的80%乙醇溶液洗3 次，每次10 mL。残渣和滤纸置烧瓶，加水150 mL，水浴回流1 h，趁热滤过；烧瓶和残渣用热水洗涤4次，每次10 mL，滤过，合并滤液，冷却后置250 mL容量瓶中，加水定容，摇匀［12］，即得供试品溶液。

2.3.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL，置10 mL 具塞试管中，分别加水至2.0 mL，摇匀，在冰水浴中缓慢加入0.2%蒽酮−硫酸溶液定容，摇匀，冷却。在沸水浴中放置10 min，取出，立即放入冰水浴中冷却10 min，取出，以0.2%蒽酮−硫酸溶液作为空白对照。采用紫外−可见分光光度法测定582 nm 波长处的OD值［13］。以OD值（Y）为纵坐标、葡萄糖的质量浓度（X，mg/ mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y= 2.258 6X+ 0.010 9（R2= 0.999 8，n=6）。结果表明，葡萄糖质量浓度在3.30～19.80 μg/mL范围内与OD值线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液1.0 mL，置10 mL具塞试管中，按线性关系考察项下方法在1 d内重复测定6次，以及连续5 d同一时间测定，得日内精密度和日间精密度。结果日内精密度的RSD为0.44%（n=6），日间精密度的RSD为1.02%（n= 5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL试管中，按线性关系考察项下方法，从“加水至2.0 mL”开始，在室温下分别于0，20，40，60，80 和100 min 时测定OD值。结果的RSD为0.99%（n= 6），表明供试品溶液在室温下放置100 min内基本稳定。

重复性试验：精确称取同一批样品粉末，共6份，按2.3.2 项下方法制备供试品溶液，按线性关系考察项下方法测定OD值。结果的RSD为3.11%（n= 6），表明方法重复性好。

加样回收试验：取已知含量样品适量，精密称定，共6 份，分别精密加入D−无水葡萄糖对照品适量，按2.3.2 项下方法制备供试品溶液，按线性关系考察项下方法测定OD值，计算加样回收率。结果平均加样回收率为97.45%，RSD为3.12%（n=6）。

2.4 黄精性状评分及综合评分方法

参照2020年版《中国药典（一部）》黄精性状项下规定［11］，黑色有光泽计40分，棕黑色有光泽计30分，棕色略有光泽计20 分，黄色无光泽计10 分；味甜无刺激性计20分，微甜无刺激性计15分，微甜有刺激性计10分；质柔软计40分，质较柔软计30分，质稍软计20分，质较硬计10分。满分100分，统计总分。综合评分=30 ×（多糖含量÷5.61）+ 30 ×（醇浸物含量÷75.28）+ 40 ×（性状评分÷100）。

2.5 单因素试验

蒸制时间：取药材样品100 g，共5份，按2.1项下酒黄精制备工艺操作，保持干燥温度100 ℃、干燥时间2 h不变，分别蒸制0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 h，考察蒸制时间对酒黄精综合评分的影响。结果见图1 A。可见，蒸制时间为1.5或2.0 h时，综合评分较高。

干燥温度：保持蒸制时间、干燥时间均为2 h 不变，干燥温度分别为40，60，80，100，120 ℃，考察干燥温度对酒黄精综合评分的影响。结果见图1 B。可见，干燥温度为40 ℃或80 ℃时，综合评分较高。

A.蒸制时间 B.干燥温度 C.干燥时间图1 不同因素对综合评分的影响A.Steaming time B.Drying temperature C.Drying timeFig.1 Influence of different factors on the comprehensive score

干燥时间：保持蒸制时间2 h、干燥温度100 ℃不变，干燥时间分别为1，2，3，4，5 h，考察干燥时间对酒黄精综合评分的影响。结果见图1 C。可见，干燥时间为2 h或3 h时，综合评分较高。

2.6 正交试验

根据单因素试验考察结果，以蒸制时间（A）、干燥温度（B）及干燥时间（C）为考察因素，以酒黄精的多糖含量、醇浸物含量和性状评分的综合评分为评价指标，进行L9（34）正交试验设计。因素与水平见表1，试验结果见表2 和表3。由表3 可知，“九蒸九烘”酒制工艺影响因素的影响强度为A ＞B ＞C，且仅因素A对多花黄精酒制工艺有显著影响（P＜0.05）。结合生产实际，确定最佳工艺为A2B3C1，即每次酒蒸制1.5 h，80 ℃下干燥2 h。

表1 因素与水平Tab.1 Factors and their levels

表2 L9（34）正交试验设计与结果Tab.2 Design and results of the L9（34）orthogonal test

表3 方差分析结果Tab.3 Results of ANOVA

2.7 验证试验

分别称取3 份药材样品适量，按最佳工艺进行酒制，进行综合评分。结果分别为98.14 分、96.54 分、97.33分，平均97.34分（n=3），表明该方法稳定、可靠，合理可行。

3 讨论

多花黄精通过酒制，减少多糖含量的同时增加了单糖含量，有效成分更易释放，从而提高其药效，同时部分化学成分发生氧化与分解，减少了咽喉刺激性成分，更有利于临床应用。本研究中采用综合评分法评价酒黄精的质量，选取的外观性状指标可较直观鉴别传统饮片质量，同时结合化学指标定量，从而可更全面地对多花黄精质量进行判断。

本研究结果显示，各因素对炮制效果影响强度最大的为蒸制时间，且仅该指标对结果有显著影响，并结合生产实际筛选出最佳酒制方案。验证试验结果表明，该酒制工艺稳定，酒黄精质量较高，可为规范多花黄精酒制工艺提供参考。