不同临床特征甲状腺乳头状癌患者BRAFV 600E基因突变情况及其中央区颈部淋巴结转移的影响因素

徐 坤 党 静 张晓敏

兰州大学第二医院老年病科，甘肃兰州 730030

甲状腺癌是属内分泌恶性肿瘤的一种，近年来发病率呈逐年上升趋势。甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺癌常见类型，发病率可占所有病理类型的80%～90%。虽大部分PTC 恶性程度较低、预后良好，但仍存在约10%的患者存在转移及复发，且伴有较高的侵袭性。相关研究显示，PTC 中BRAFV600E 基因突变是其常见类型，并认为BRAFV600E 基因突变与肿瘤的发生、 发展及预后中存在较高的相关性，是引发PTC 的重要遗传学改变。鉴于此，本研究选择兰州大学第二医院老年病科收治的PTC 患者80 例，分析PTCBRAFV600E 基因突变与中央区颈部淋巴结转移的相关性，以为手术方案制定等提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年6月至2021年12月兰州大学第二医院老年病科收治的PTC 患者80 例为研究对象，其中男13 例，女67 例；年龄22～73 岁，平均（47.58±3.61）岁；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期62 例，Ⅲ～Ⅳ期18 例。本研获医院伦理委员会批准（批号：2019-A11）。纳入标准：均经病理学检查明确诊断；可耐受手术治疗；于手术治疗的同时给予预防性中央区淋巴结清扫；病历资料齐全；患者及家属均对本次研究知情同意。排除标准：合并其他头颈部恶性肿瘤；术前行放、化疗治疗；术前颈部淋巴结检查见肿大淋巴结，或发生肿大的淋巴结外形规则，出现沙粒体样细小钙化、周边强化等征象；伴有其他器官远端转移；凝血及造血功能异常；精神疾病，无法配合完成本次研究者。

1.2 方法

①DNA 提取：取PTC 石蜡存档的包埋组织，若为合并多发癌灶患者，则选择最大肿瘤组织，将其制备成5 张8 m 厚度的连续切片，分别于第一张及最后一张进行HE 染色，并由病理科医师再次明确第一张和最后一张，观察两张玻片中是否存在PTC 相关组织，对照HE 染色切片，刮取中间三张连续切片相应的癌组织区域，确保每张切片中肿瘤细胞含量超过50%。②DNA 突变基因检测：应用FFPE 样品DNA 分离试剂盒，提取病变组织的DNA，按照试剂盒说明书相关要求，在分光光度计下测定DNA 浓度及纯度，并将DNA 浓度调整至100 ng/L。对提取好的DNA 行PCR。PCR 反应条件如下：于95℃环境下预变性5 min，95℃变性45 s，56℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35 个循环，最后72℃延伸10 min。BRAF 突变主要表现为V600E 突变，且突变位点单一，应用real-time PCR 法进行检测，观察BRAF 是否发生基因突变，该检测结果由系统直接呈现，无需检测人员进行分析。

1.3 观察指标及评价标准

①分析不同临床病理特征PTC 患者的BRAFV600E基因突变情况；②分析PTC 中央区颈部淋巴结转移的单因素；③分析中央区颈部淋巴结转移的多因素。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 不同PTC 临床病理特征的BRAFV600E 基因突变情况

依据是否发生BRAFV600E 基因突变将患者分为阳性组（n=38）和阴性组（n=42）。阳性组肿瘤大小大于阴性组，多灶性肿瘤、包膜外侵、中央区颈部淋巴结转移、单侧淋巴结转移发生率均高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 不同PTC 临床病理特征的BRAFV600E 基因突变情况（例）

2.2 PTC 中央区颈部淋巴结转移的单因素分析

依据中央区颈部淋巴结是否转移分为转移组（n=20）及无转移组（n=9）。转移组肿瘤大小大于无转移组，双侧肿瘤、多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAFV600E 基因突变率均高于无转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 PTC 中央区颈部淋巴结转移的单因素分析（例）

2.3 PTC 中央区颈部淋巴结转移的多因素分析

多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAFV600E 基因突变是PTC 中央区颈部淋巴结转移的独立危险因素（P＜0.05）（表3～4）。

表3 影响PTC 中央区颈部淋巴结转移的因素赋值情况

表4 PTC 中央区颈部淋巴结转移的多因素分析

3 讨论

PTC 现已成为高发的恶性肿瘤，女性发病率高于男性。目前，对于甲状腺癌的发病机制及病因等暂无明确定义，从肿瘤的发生及发展来看，其中经历多步骤、多阶段、多因素、多基因变异等复杂的生物学演变过程。对病灶组织进行显微镜观察可见其下存在纤维瘢痕组织，排列拥挤、形态欠规则、乳头中心可见同心圆结构的砂粒体等，部分患者病灶形态特征欠清晰，尤其是滤泡状排列的病例，在临床鉴别诊断中需与甲状腺肿相鉴别。

BRAFV600E 为抑癌基因的一种，其作用原理在于通过p53 的作用达到促进细胞周期抑制因子p21 的进一步表达，并可通过其他途径快速且准确定位并修复损伤的DNA，以达阻止损伤细胞进入循环系统。另BRAFV600E 的表达位置可随细胞周期的变化而变化，并可减弱抑癌作用，进而诱发甲状腺癌。相比于BRAFV600E 基因突变阴性患者而言，阳性的PTC 具有更强的侵袭性，发生中央区颈部淋巴结转移几率更高。本研究结果显示，阳性组肿瘤大小大于阴性组，多灶性肿瘤、包膜外侵、中央区淋巴结转移、单侧淋巴结转移数均高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05）；转移组肿瘤大小大于无转移组，双侧肿瘤、多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAF 基因转移发生率均高于无转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）；肿瘤大小、多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAFV600E 基因突变是PTC中央区颈部淋巴结转移的独立危险因素（P＜0.05），究其原因可知BRAFV600E 基因突变与PTC 的病理类型存在明显相关性，且肿瘤大小、多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAFV600E 基因突变均可作为预测淋巴结转移的重要因素，在手术方案制定时需准确评估患者病情，在保护好甲状旁腺及喉返神经的情况下，需做好预防性颈部淋巴结清扫，以改善患者预后。

综上所述，PTC 肿瘤大小、多灶性肿瘤、包膜侵犯、BRAFV600E 基因突变均可有效预测中央区颈部淋巴结是否发生转移，且PTC 患者伴有BRAFV600E 基因突变几率较高，这与患者病理特征间存在相关，可将其用于手术方案的制定。