复合微生态制剂对新西兰兔生长及免疫性能的影响

程菊芬，张立，周卫东*，卢明文，潘洪联

(1.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江灯塔种猪有限公司，浙江 杭州 311107；3.浙江艾杰斯生物科技有限公司，浙江 杭州 310051)

幼兔在断奶后面临饲养环境改变、母源抗体降低、肠黏膜发育不完善、消化酶分泌不足等不利因素，容易发生以腹泻为主的消化系统疾病，危害其生长发育，甚至死亡，严重影响养殖效益[1]。在全面“禁抗”后，具有保健、促生长功效的微生态添加剂已展现出良好的“替抗”效果与应用前景[2-3]。将酵母菌、酵母培养产物添加于饲料中，能明显提升肉兔消化道健康水平与免疫机能。酵母菌体蛋白是动物不可或缺的营养成分，可改善肠道营养平衡性能，提高生产性能[4-5]。芽孢杆菌在动物肠道内增殖成为优势菌群，可抑制病源菌的繁殖；芽孢杆菌产生的多种消化酶、维生素、氨基酸及生长刺激因子能直接达到促生长和提高饲料利用效率的目的。无论是单一还是多个菌种的芽孢杆菌，在疾病预防、促生长方面均有较多的研究报道[6-9]。

微生态制剂作为肉兔饲料添加剂的研究与应用，以单一或复合型芽孢杆菌制剂报道最多。有关酵母菌的研究多集中在酵母培养产物、兔肠道分离活酵母的应用试验。外源性酿酒酵母可促进消化，价格低廉，但与枯草芽孢杆菌组合的研究未见报道。本研究以酿酒酵母+枯草芽孢杆菌组合微生态制剂为试验材料，通过饲养试验，评价不同剂量的微生态制剂对断奶新西兰幼兔的生长性能、肠道健康的影响，旨在为开发此类微生态高效组合添加剂提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

复合微生态制剂由浙江艾杰斯生物科技有限公司提供，含酿酒酵母(活细胞数≥0.2亿·g-1)和枯草芽孢杆菌(杆菌数≥0.1亿·g-1)，载体为蒙脱石。

1.2 试验动物分组与管理

选取30日龄断奶、健康、体重基本一致的新西兰肉兔96只，公母各半，作为饲养试验兔。随机选取公母兔各12只为1个组，共4个组，即试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和空白对照组。每只试验兔在不锈钢笼内独立饲养，标注编号。试验在半封闭式兔舍进行，全程饲喂颗粒饲料，自由采食、饮水。

1.3 试验设计和日粮配制

采用单因素饲养试验设计。每组24只兔，每只兔为1个重复。对照组投喂基础日粮，其组成为玉米20%、麦麸15%、豆粕12%、苜蓿草粉30%、麦芽根17%、石粉1.5%、食盐0.5%、复合预混料4.0%(复合预混料为每千克基础饲料提供VA7 500 IU、VD33 000 IU、VE15 IU、铜3.0 mg、铁80 mg、锰50 mg、锌60 mg、赖氨酸1.20 g)，主要营养指标为消化能10.86%、粗蛋白质17.65%、粗纤维15.05%、粗脂肪3.75%、钙1.86%、总磷0.65%、赖氨酸0.88%。

试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮的基础上依次添加0.10%、0.15%、0.20%的复合微生态制剂，各组日粮均制成颗粒料。试验设预试期5 d，正式试验期30 d。

1.4 指标测试

增重、采食量。在正式试验开始和结束时，分别对兔子逐一空腹称重，记录试验期内每只兔子的实际采食量，计算日增重、日采食量与全程料重比。

腹泻、死亡数。每日观察并记录发病和死亡情况。腹泻判定规则为每天早上定时观察1次，粪便明显变稀的个体记录为腹泻1次，试验结束时，统计每组总腹泻次数。

免疫指标。饲养试验结束时，每组选择12只试验兔(公母各6只)，空腹采心脏血4 mL，待血液自然析出血清，分装后保存于-20 ℃冰箱，用于分析免疫球蛋白指标；血清IgA、IgG、IgM的测定采用ELISA双抗体夹心法。

1.5 统计分析

数据分析采用SPSS 22.0统计软件，数据以平均值±标准差表示；采用卡方检验进行计数指标值比较。组间差异显著性检验采用单因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD法多重比较(P<0.05)。

2 结果与分析

2.1 复合微生态制剂对新西兰肉兔生长性能影响

由表1可见，各组试验初始体重一致，组间无差异；期末试验组体重均高于对照组，其中，试验Ⅲ组最高，显著高于其他处理，试验Ⅰ、Ⅱ组高于对照，但差异不显著。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的日增重分别比对照组提高5.9%、3.8%、14.2%，差异显著性同末重。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组料重比分别比对照组下降3.5%、3.7%、7.2%，处理间差异不显著。综上可知，3个剂量的微生态制剂均能提高肉兔日增重、降低料重比，以0.2%微生态制处理最为显著。

表1 复合微生态制剂对新西兰肉兔生产性能的影响

2.2 复合微生态制剂对新西兰肉兔腹泻和死亡的影响

由表2可知，试验组的个体腹泻发生率均显著低于对照组，且试验Ⅲ组显著低于Ⅰ和Ⅱ组，而试验Ⅰ和Ⅱ组间无显著差异。试验组的死亡数均低于对照组，其中，Ⅲ组全程无死亡，Ⅰ、Ⅱ组死亡数均低于对照组，但与对照组差异显著。结果表明，添加复合微生态后，幼兔死亡数下降趋势较为明显，3个添加量均明显降低了幼兔的腹泻发生率，其中高剂量组防腹泻率效果最好，发生率比对照组低8.4百分点。

表2 复合微生态制剂对新西兰肉兔腹泻和死亡的影响

2.3 复合微生态制剂对新西兰肉兔免疫球蛋白指标的影响

由表3可知，各试验组血清IgG、IgA、IgM均较对照组有提高。其中，血清IgG值的各组间存在显著差异，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别较对照组提高12.8%、14.4%、25.9%，Ⅲ组显著高于Ⅰ和Ⅱ组；血清IgA值组间存在显著差异，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别较对照组提高17.1%、8.6%、22.9%，Ⅲ组显著高于Ⅱ组；血清IgM值组间存在显著差异，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别较对照组提高34.2%、28.9%、50.0%，Ⅲ组显著高于Ⅰ和Ⅱ组。

表3 试验兔血清免疫指标

3 讨论

3.1 复合微生态制剂对新西兰肉兔生长性能、肠道健康的影响

研究表明，日粮中添加0.2%酵母培养物，能显著提高獭兔平均日增重，降低料重比，提高主要营养物质的表观消化率[4]。由酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等组成的微生态制剂，活菌总数为0.67亿·g-1的日粮，试验组家兔的3周增重较对照组提高63%[10]。日粮中添加贝莱斯芽孢杆菌1.0亿·g-1，30 d试验期可使35日龄幼兔的日增重提高12.6%，饲料转化效率提高13.1%；添加芽孢杆菌使试验兔肠道有益菌数量增加，其中酵母菌数量增加2.2倍[5]。有学者分离出兔肠道中的芽孢杆菌、酵母菌等制成内源性微生物制剂，当活菌用量为3.2亿·g-1试验日粮时，试验兔期末体重明显增加，料肉比下降，促生长效果明显优于商品型菌制剂[6]。从上述文献可以得出，单一酵母培养物、活酵母、芽孢杆菌及酵母+芽孢杆菌复合菌均能有效改善幼兔的生长性能和饲料转化率，这与本次试验研究结果一致。

本试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验日粮中活菌含量(2/3酿酒酵母+1/3枯草芽孢杆菌)分别为0.30亿、0.45亿、0.60亿·g-1，低、中剂量组改善生长性能的趋势较明显，而以高剂量组的效果最优。但也有报道指出，枯草芽孢杆菌饲料添加量在200亿～600亿·g-1时能提高日增重，400亿·g-1时则显著降低料重比[7]。不同试验中，起作用的添加量间差异巨大，可能与试验菌种来源不同及菌制剂的生产工艺差别有关。

幼兔腹泻发生率与增重、饲料转化效率间呈强负相关性。幼兔消化道功能尚未发育完善，对饲料消化、吸收能力不足，而枯草芽孢杆菌、酵母能产生多种消化酶，有利于维护肠道健康[6-7]。其次，益生菌在肠道中定殖，成为优势菌群，有利于稳定小肠pH值与肠黏膜形态，从而大幅降低引起腹泻的大肠埃希氏菌等致病菌数量[8-9]。本试验中，试验组的死亡数均低于对照组，添加益生菌显著降低试验组幼兔的腹泻频次，与文献[3,6,10]得出的结果一致。由此推测，枯草芽孢杆菌、酵母组合通过减少腹泻发生率从而实现日增重与饲料转化率的提升。

3.2 复合微生态制剂对新西兰肉兔血清免疫指标的影响

血清免疫球蛋白在体液免疫过程中发挥重要作用。在所有血清型免疫球蛋白中，通常IgG含量最高，在抗菌、抗病毒中发挥着重要作用。但动物免疫系统始终处于动态调节过程，该系统的总体机能状态不稳定，当免疫系统受到一些病原微生物感染后，才引起免疫指标的变化。王卫正等[4]报道，酵母培养物可不同程度提高试验獭兔的血清IgG、IgA、IgM浓度及免疫器官重，但添加剂量与抗体提升幅度并不完全一致。薛云等[7]报道，加入枯草芽孢杆菌制剂后，试验兔血清IgA、IgG显著高于对照组，胸腺重随之增高。任永清等[8]报道，添加复合芽孢杆菌能显著提高试验肉兔血清IgM、肠黏膜分泌型IgA含量。饲喂芽孢杆菌0.06亿·g-1日粮，第4周起血清IgA、IgG显著高于对照组。饲喂0.1亿·g-1组兔在5周起血清IgM显著增加，其规律与生长性能结果相似[11]。多数文献得到脾脏、胸腺等免疫器官指数与血清免疫球蛋白浓度间具有较高的一致性。本试验中，IgG、IgA、IgM浓度有不同程度的提高，由此推测，酵母+芽孢杆菌分泌出某些活性物质，刺激免疫系统的快速成熟并提高机体免疫功能，是幼兔快速提升的重要原因。

4 小结

日粮中添加0.10%～0.20%的酵母+枯草芽孢杆菌复合微生态制剂，能提高断奶幼兔的生长速度、饲料转化率，降低死亡数量与腹泻发生率，显著提高血清中IgG、IgA、IgM等动物免疫力指标值。微生态制剂的功效随着添加量增加而增强，本试验条件下，以0.2%的酵母+枯草芽孢杆菌复合微生态制剂效果最优。