血培养直接药敏试验对血流感染性疾病的临床应用价值研究

刘少娟 彭湘明 巫楚媚 赖艳榕 邓露露 刘瀚榆

[摘要]目的探討血培养直接药敏试验对血流感染性疾病的临床应用价值。方法选取血培养阳性标本55例，运用 K-B 法进行直接药敏试验和标准药敏试验，统计血培养革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌7 h 和16 h 直接药敏试验结果的标准符合率并进行比较。结果血培养革兰阳性球菌7 h 和16 h 的直接药敏试验结果的标准符合率分别为78.261%和84.950%;血培养革兰阴性杆菌7 h 和16 h 的直接药敏试验结果的标准符合率分别为81.066%和91.912%。经统计学处理，直接药敏试验结果两个时间段之间差异有统计学意义，血培养革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌16 h 药敏试验结果的标准符合率均高于7 h 药敏试验结果的标准符合率（ P <0.05）。结论血培养直接药敏试验耗时短，操作简便，培养16 h 的结果标准符合率较高，临床医生可参考血培养直接药敏结果为早期血流感染患者选取合适的抗生素治疗。

[关键词]血培养;直接药敏试验;标准药敏试验;纸片扩散法;菌液浓度

[中图分类号] R446.1  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2022）09-0142-05

Study on the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases

LIU 1Shaojuan    PENG  Xiangming   WU  Chumei（ 2）   LAI 1Yanrong    DENG  Lulu（ 1）   LIU 1Hanyu

1. Department of Clinical Laboratory， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangdong， Guangzhou 510220， China;2. Foshan Nanhai District Fifth People's Hospital， Guangdong， Foshan 528231， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases. Methods A total of 55 blood culture positive samples were selected for direct drug susceptibility testing and standard drug susceptibility testing by the K-B method. The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram- positive cocci and gram-negative bacilli were counted and compared. Results The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci were 78.261% and 84.950%， respectively; the standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-negative bacilli were 81.066% and 91.912%， respectively. Upon statistical processing， there was a statistically significant difference between the two periods in the results of direct drug susceptibility testing. The standard coincidence rate of 16-hour drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci and gram-negative bacilli was higher than that of 7-hour drug susceptibility testing results （P <0.05）. Conclusion The direct drug susceptibility testing of blood cultures is less time- consuming and easy to operate. The standard coincidence rate of the results for the 16-hour culture is relatively high. Clinicians can refer to the direct drug susceptibility testing results of blood cultures to select appropriate antibiotic therapy for patients with early blood stream infection.

[Key words] Blood culture; Direct drug susceptibility testing; Standard drug susceptibility testing; Disk diffusion method; Bacterial solution concentration

血流感染是极易引起机体中毒、感染及全身炎症反应的感染性疾病，起病急、病情凶险、病死率高[1-3]。对于严重的血流感染，早期明确病原菌并给予有效的抗菌药物治疗至关重要，可显著降低患者病死率[4-5]。按照传统的方法，血培养和药敏试验需要3～5 d 才得到结果以指导临床用药[6]。但是直接药敏试验用时较短，减少了细菌分离纯化的步骤，缩短报告时间。本研究是通过计算直接药敏试验的标准符合率，比较两个时间段标准符合率的差异，探讨能否运用直接药敏试验在较短的时间内得出准确的药敏结果，为临床提供用药参考依据。

1.1仪器与试剂

BACTEC FX 全自动血培养仪（美国 BD 公司），比浊仪（美国 BD 公司），血培养标准需氧瓶（美国 BD 公司，批号：9239513），厌氧瓶（美国 BD 公司，批号：9281699），血平板（江门凯林，批号：200320），营养琼脂培养基（杭州滨和，批号：210302），MH 平板（广州迪景，批号： MHP-200301D），药敏纸片（英国 OXOID，批号：青霉素3184404，利奈唑胺2490427，四环素3230868，氯霉素3247319，万古霉素3195888，哌拉西林/他唑巴坦3190129，替考拉宁2203197，利福平2942763，左氧氟沙星3195900，庆大霉素2972738，复方磺胺3270612，克林霉素2972599，红霉素2866326，头孢西丁3001688，头孢哌酮2422371，头孢呋辛3250444，头孢唑林3195880，美洛培南3207311，亚胺培南2993932，阿米卡星2968034，头孢吡肟3184467，头孢他啶2961052，环丙沙星3242763，氨苄西林2499343，氨曲南2897396）。

1.2操作方法

1.2.1镜检血培养瓶报阳之后，首先将血瓶颠倒摇匀，然后用注射器抽取血瓶血液滴一滴在有磨砂玻璃玻片上，固定烘干之后进行快速革兰染色，在显微镜下观察判断为革兰阳性球菌还是革兰阴性杆菌。

1.2.2直接药敏试验直接用1 ml 注射器抽取血培养仪报警阳性瓶中的血液4滴（约50μl）滴在 MH 平板上，用无菌棉签蘸取无菌生理盐水后，再将血液均匀涂布在 MH 药敏平板，用纸片分配器贴上相应的革兰阳性球菌或者革兰阴性杆菌药敏纸片，置35℃培养箱培养，在培养后的6～8 h 和16～18 h 分别量取抑菌环直径。

1.2.3标准药敏试验按照常规操作程序进行，用血平板先进行菌种的分离纯化，培养后选取单个菌落配制为0.5个麦氏浓度，用无菌棉签蘸取菌液后，均匀涂布在 MH 药敏平板上，并贴上相应的革兰阳性球菌或者革兰阴性杆菌药敏纸片，置35℃培养箱18～24 h 培养后量取抑菌环直径。

1.2.4药敏结果判断标准[7] 按美国临床实验室标准协会标准，①标准符合率（CA）：标准药敏和直接药敏结果一致;②严重错误（VME）：标准药敏耐药 R，直接药敏敏感 S;③重大错误（ME）：标准药敏敏感 S，直接药敏耐药 R;④一般错误（MIE）：标准药敏敏感 S 或耐药 R，直接药敏中度敏感 I，标准药敏中度敏感 I，直接药敏敏感 S 或耐药 R。

采用 SPSS 20.0统计学软件进行统计分析，计数资料用[n （%）]表示，采用χ2检验， P <0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1药敏试验中病原菌的种类

本实验菌株均来自临床患者，共55例，革兰阳性球菌23例，革兰阴性杆菌32例;其中革兰阳性球菌分别为金黄色葡萄球菌18例、凝固酶阴性葡萄球菌5例;革兰阴性杆菌分别为大肠埃希菌20例、肺炎克雷伯菌5例、铜绿假单胞菌7例。

2.2药敏结果标准符合率统计

血培养革兰阳性球菌7 h 和16 h 直接药敏试验结果标准符合率分别为78.261%、84.950%，差异有统计学意义（χ2=4.456， P <0.05），见表1～2，可认为16 h 的直接药敏试验结果标准符合率更高，结果更可靠;革兰阴性杆菌7 h 和16 h 药敏试验结果标准符合率分别为81.066%、91.912%，差异有统计学意义（χ2=27.380， P <0.001），见表3～4，可认为16 h 的直接药敏试验结果标准符合率更高，结果更可靠。

3讨论

血流感染，是一种威胁生命的全身性感染疾病，用药必须及时才能最大程度控制感染，所以，临床医生对血流感染往往首先考虑经验用药。但随着抗生素的不规范使用，细菌对抗菌药物的耐药性日趋严重，使感染性疾病的治疗受到巨大挑战[8-10]。为避免盲目使用抗生素，尽快有效控制感染，快速的直接藥敏试验的应用价值越来越多被研究。采用直接药敏试验能缩短患者住院时间，降低罹患难辨梭菌相关腹泻的风险、降低患者平均病死率与感染相关病死率[11]。直接药敏试验跟传统的标准药敏试验相比，减少了第一步的菌种分离纯化的步骤，但是由于血流感染多数情况下是单一菌种的感染，因此直接选用血培养瓶报警阳性后的血液进行 K-B 法药敏试验也是可取的。相关研究[12-14]显示，血培养直接药敏试验比传统的标准药敏试验耗时短，两种方法对抗菌药物的敏感性和耐药性方面无明显差距，本研究也认同此观点。本研究革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌16 h 的直接药敏试验结果比7 h 的结果标准符合率更高，结果更可靠，主要原因可能是培养时间的不足，传统的标准药敏试验都是过夜培养18～24 h，细菌有充分时间进行传代、与药物作用，而细菌只培养7 h 传代次数不足、细菌生长不好、与药物未能充分作用，因此很多药敏纸片的抑菌环直径显示不清晰，容易造成判读结果时的误差，出现较为严重的错误。

革兰阳性球菌的直接药敏试验中，培养7 h 和16 h，青霉素、利奈唑胺、四环素和氯霉素的标准符合率高达90%以上，但是也发现万古霉素、替考拉宁、头孢西丁和左氧氟沙星标准符合率不太高，可能由于药敏规则中万古霉素是培养24 h 才能判读结果，另外，学者普遍认为采用纸片扩散法对万古霉素的药物敏感性进行测定是不可靠的[15]，因为其对某些金黄色葡萄球菌对万古霉素是敏感还是中介无法区分，应该常规采用肉汤稀释法来提高万古霉素药物敏感度的准确性。头孢西丁跟万古霉素一样，某些葡萄球菌也必须培养24 h 才能判读抑菌环直径大小，培养时间短、药物未充分作用、菌种生长不好，可能是导致两个时间段药敏符合率偏低的主要原因。另外，革兰阳性球菌还需要注意 D 试验阳性的菌种，D 试验用于观察葡萄球菌对红霉素诱导克林霉素的耐药情况[16]。在本研究直接药敏试验中，发现有4例 D 试验阳性，说明进行直接药敏试验也可发现 D 试验阳性菌株，所以要特别注意红霉素和克林霉素的药敏结果，一旦发现 D 试验阳性，尽管红霉素和克林霉素药敏试验中抑菌环大小显示其为敏感，报告临床时均改为耐药。

革兰阴性杆菌的直接药敏试验中，培养16 h，美洛培南、复方新诺明、亚胺培南和庆大霉素的标准符合率高达100%，另外多种药物的标準符合率也高达90%以上;培养7 h，头孢呋辛、左氧氟沙星、复方新诺明、庆大霉素和氨苄西林的标准符合率也高达90%以上，某些药物7 h 和16 h 的标准符合率相差不是较大，分析原因可能因为革兰阴性杆菌的传代间隔时间较短，传代次数较多，在7 h 判读结果时已经出现明显的抑菌环直径，提高肉眼判读结果的准确性。但是还存在有个别药物的符合率相差甚远，如哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、头孢西丁和头孢他啶等药物，原因可能也与细菌生长周期和药物的相互作用有关。

综上所述，直接药敏试验比标准药敏试验耗时短，操作简便，革兰阴性杆菌16 h 的直接药敏试验结果在临床上具有较高的参考价值，革兰阳性球菌仍有几类药物（如利奈唑胺、四环素、氯霉素、庆大霉素、左氧氟沙星和复方磺胺等）符合率较高，临床医生可以直接药敏试验结果作为参考，及时给患者使用抗生素，降低患者病死率和避免抗生素的滥用造成细菌耐药性的变异。

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（收稿日期：2021-09-30）