奥扎格雷钠对癫痫小鼠应激、神经损伤程度和神经功能重建相关因子及凝血指标的影响

张亚琼，姬冬林

(1.榆林市中医医院药学部，陕西 榆林 719051；2.榆林市第五医院药学部，陕西 榆林 719053)

癫痫是由于大脑内兴奋性及抑制性神经元失衡引起的反复发作的神经功能紊乱综合征，具有发作性、短暂性、重复性、刻板性等特点[1]。我国约有900多万人患有癫痫[2]，可表现为全身肌肉强直收缩，头部倾斜，上肢屈直，下肢伸直，舌咬伤，头晕、恐惧、胸闷、心悸、感觉异常、精神障碍、恶心及胃部不适等，也可出现不同程度的意识障碍、思维异常、精神运动障碍、情绪异常、脑电波形改变等[3]。流行病学观察显示，癫痫整体发病率约为0.12%～0.65%[4]，其中61.1%～95.5%的患者为全面性发作，发病年龄主要为20岁以下[5]。奥扎格雷钠是一种高效选择性血栓素合成酶抑制剂[6]，可显著降低人体中血栓素A2的表达水平，促进前列环素的合成，抑制血小板聚集，改善神经递质异常引起的神经功能损伤，促进癫痫患者的神经功能恢复，改善患者血液流变学指标，降低血黏度，促进神经细胞的再生[7-8]。本研究就奥扎格雷钠对癫痫小鼠应激、神经损伤程度和神经功能重建相关因子及凝血指标的影响进行研究，报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 60只健康成年雄性昆明小鼠，SPF级，购于西安微元生物医药研究所有限公司，许可证号：SYXK(陕)2020-006。所有小鼠在湿度为40.60%，温度为(24±1)℃、12 h昼/夜的条件下饲养，自由饮水，适应性饲养1周。

1.2 实验方法

1.2.1 药物与试剂：奥扎格雷钠(批号：H20059344)；盐酸匹罗卡品(批号：290K1391)；硫酸阿托品注射液(批号：H42021498)；0.9%氯化钠注射液(批号：H33020484)。

1.2.2 造模与分组：本研究共纳入60只小鼠作为研究对象，采用随机分配原则将其分为正常组、模型组、奥扎格雷钠组，每组20只。将模型组及奥扎格雷钠组注射药物诱发癫痫。腹腔注射盐酸阿托品(17 mg/kg)及盐酸匹罗卡品(180 mg/kg)。采用Racine实验动物癫痫发作标准对研究对象进行行为学观察[9]。对于4级发作以下的小鼠进行首剂1/3加注,每次间隔15 min，若连续追加注射2次仍未出现4级以上发作的小鼠，视为造模失败。癫痫持续状态30 min后给予地西泮以终止癫痫发作。研究小鼠的药物用量参考《现代医学实验动物学》[10]。正常组：生理盐水20 ml/kg灌胃2周；模型组：药物致痫后生理盐水20 ml/kg灌胃2周；奥扎格雷钠组：奥扎格雷钠20 mg/kg灌胃2周。

1.2.3 检测指标：采集小鼠静脉血5 ml，以r=8 cm，3000 r/min离心10 min，采用酶联免疫吸附试剂盒测定应激指标：去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、皮质醇(Cortisol,Cor)；神经损伤指标：神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific eno1ase，NSE)、星形胶质源性蛋白(S100B)、泛素羧基末端水解酶 L1(UCH-L1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)；神经功能重建指标：脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)水平；采用全自动凝血仪检测各项凝血功能指标水平：活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)。

2 结 果

2.1 三组应激激素表达水平比较 与正常组相比，模型组NE、Cor表达水平明显升高(均P<0.05)；与模型组相比，奥扎格雷钠组NE、Cor表达水平明显降低(均P<0.05)，见表1。

表1 三组应激激素表达水平比较

2.2 三组神经功能损伤程度相关因子水平比较 与正常组比较，模型组NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平明显升高(均P<0.05)；与模型组比较，奥扎格雷钠组NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平明显降低(均P<0.05)，见表2。

表2 三组神经功能损伤程度相关因子水平比较

2.3 三组神经功能重建相关因子水平比较 与正常组相比，模型组BDNF、NGF水平明显降低(均P<0.05)；与模型组相比，奥扎格雷钠组神经功能重建的细胞因子BDNF、NGF的含量明显升高(均P<0.05)，见表3。

2.4 三组凝血功能指标水平比较 与正常组比较，模型组凝血指标PT、TT、APTT明显降低，FIB明显升高(均P<0.05)，呈现相对高凝状态。与模型组相比，奥扎格雷钠组凝血指标PT、TT、APTT明显升高，FIB明显降低(均P<0.05)，呈现相对低凝状态，见表4。

表4 三组凝血功能指标水平比较

3 讨 论

癫痫是多种原因导致的脑部神经元异常放电的临床综合征，是世界范围内最常见的神经系统疾病之一[11]。癫痫的发病，不仅会引起患者身体的不适，也对其生活、情绪、工作等造成显著影响[12]。癫痫的发病机制较为复杂，可能与中枢神经系统兴奋性、抑制性神经元的比例失衡有关[13]，也可能与细胞因子的激活、离子通道异常、遗传、免疫、内分泌等密切相关[14]。癫痫患者一旦发病，需长期用药，病程较长，因此早期诊断、早期治疗就显得尤为重要[15]。癫痫发病期间，可表现为头晕、头痛、恶心、呕吐、意识丧失、肢体抽动、尿便失禁、舌咬伤等，长期发作可引起不同程度的认知功能障碍，严重影响生活质量。

奥扎格雷钠可抑制血栓素的生成，提高前列环素的表达，减少血小板的聚集，缓解血管痉挛，促进脑组织微循环及能量代谢，挽救受损的大脑神经元，提高红细胞变形能力，降低全血黏度，改善组织耗氧能力。既往研究发现[16]，奥扎格雷钠对于脑梗死神经功能损伤及重建具有重要作用，而在癫痫患者中的作用尚未见报道。丁大鹏[17]研究发现奥扎格雷钠有钠可保护脑梗死患者的神经功能，疏通脑血管，减轻氧化应激反应。陈开民等[18]研究发现奥扎格雷钠可有效改善急性脑梗死患者的神经缺损症状，降低神经元损伤标志物的表达，减轻机体氧化应激反应，改善预后。李琳峰等[19]研究发现奥扎格雷钠可能通过调节Rho/Rho-kinase信号通路相关因子，促进脑梗死大鼠神经功能恢复。

本研究中，模型组NE、Cor水平较对照组明显升高，提示癫痫可引起机体应激反应，而奥扎格雷钠组NE、Cor水平较模型组明显降低，提示奥扎格雷钠可能通过调节氧自由基平衡，抑制局部脂质过氧化反应，减少脑细胞损伤，缓解癫痫小鼠的应激反应[20]。模型组NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平较对照组明显升高，提示癫痫小鼠神经损伤相关指标明显升高，即癫痫可引起不同程度的神经损伤；奥扎格雷钠组NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平较模型组明显降低，提示奥扎格雷钠可明显改善癫痫小鼠的神经损伤；模型组BDNF、NGF水平较对照组明显降低，提示癫痫可引起小鼠神经功能重建能力降低，而奥扎格雷钠组BDNF、NGF的含量较模型组明显升高，提示奥扎格雷钠可能通过抑制血栓素A1，促进前列环素的生成，扩张微血管，改善脑组织微循环，促进癫痫发作引起的神经元的损伤修复，从而改善神经功能缺损症状；模型组较对照组呈现相对高凝状态，提示癫痫可引起小鼠凝血功能亢进，从而引起血栓等症状，而奥扎格雷钠组较模型组凝血功能呈现相对低凝，提示奥扎格雷钠可能通过抑制血小板聚集，有效改善癫痫小鼠的凝血功能，防止出凝血障碍等症状的出现。

当然，本研究存在一定局限性：①本研究样本量较小，所得结果可能存在一定的偏倚；②未对奥扎格雷钠的有效剂量进行梯度研究，未获得奥扎格雷钠的最佳有效剂量；③未进行临床试验，故暂且不能应用于临床的治疗。未来期待临床与基础相结合，以及更加全面、详细的研究，为癫痫患者的诊治带来新的参考。

综上所述，奥扎格雷钠可有效减轻癫痫小鼠应激反应、缓解神经损伤症状，加强神经功能重建， 改善凝血指标。