季节因素对山羊超数排卵效果的影响

王成丽，邓少锋，田其真，曹 斌，桑乐乐，张振英，高淑焕，王乐雯，王 楠，宋宇皓，孙 昀，袁玉国*

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300；2.扬州大学兽医学院，江苏扬州 225009）

随着我国畜牧行业的蓬勃发展，畜牧业在我国经济活动中占据着举足轻重的地位。自改革开放以来，我国畜牧业生产取得了快速发展和进步（孟凡东，2012）。近几年，人们对牛、羊等畜产品的需求不断增长，牛、羊的养殖数量也大幅增加。总体看，我国牛、羊品种存在诸多缺陷，如生长较缓慢、畜产品产量低等，因此，引进国外优良品种改善我国牛羊品种已成为一种趋势（李福俊，2002）。而胚胎移植可最大限度的发挥国外引进的优秀母畜在品种改良和育种中的作用，同时又是体外受精、转基因、克隆等胚胎工程的基础性环节，因此，胚胎移植在近些年成为研究热点，不断改进和完善胚胎移植的各个环节，并推广应用于实际生产中（杨炜峰等，2002）。超数排卵作为胚胎移植技术中的基础性环节，可诱导大量卵泡成熟排卵，增加可移植的胚胎数量，在胚胎移植中起着至关重要的作用（吴延光等，2002）。

超数排卵技术作为胚胎移植、转基因、克隆等胚胎工程的基础环节，在实际生产实践中起至关重要的作用。在生产实践和研究中，超数排卵技术主要运用于引进外来优良母畜，发挥优良母畜的繁殖潜力（亓美玉，2004），让良种母畜卵巢上更多的卵泡成熟排卵，进而将胚胎移植到其他母畜子宫中发育，从而大幅度提高优良母畜可以获得的后代数目（张春等，2000）。另一方面，超排技术作为胚胎移植技术的基础，可以促进家畜的改良速度，加速遗传进展，改变家畜种群的遗传组成，防止出现因近亲繁殖而造成的种群退化问题。此外，对优良母畜或稀有哺乳动物进行有计划的胚胎保存，建立起“胚胎库”也具有重大的生物学意义（李俊杰等，2007）。

超数排卵技术是进行胚胎移植和克隆等其他生物工程技术的基础性环节，研究超数排卵技术和超数排卵效果影响因素具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 试验奶山羊由上海转基因研究中心实验牧场提供，年龄在2 ～4 岁，体重30 ～40 kg，发育正常、健康无疾病。均超排一次，没有进行重复超排。所有奶山羊均采用舍饲养殖，进行常规的饲养管理。

1.1.2 试验药品和器械 氯前列烯醇（PGF2α，上海市计划生育科学研究所兽药生产部，批号：060292200）；垂体促滤泡素（FSH，宁波激素制品有限公司，批号：20080509）；注射用促黄体素释放激素A2（LHRH-A2，宁波激素制品有限公司，批号：060416）；陆眠灵（吉林省华牧动物保健品有限公司，批号：060303）

手提式压力蒸汽灭菌锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；恒温水浴锅（北京市长风仪器仪表公司）；羊用手术架（自制）；常用手术器械（国产）；超净工作台（苏州市电压调节器厂）；检卵针（自制）；培养皿（Nunc 公司）；体视显微镜（北京泰克仪器有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组 试验奶山羊每5 头为1 组，作同期发情与超数排卵处理，进行常规的防疫和常规的饲养管理。试验分别在春秋冬3 个季节进行，试验时间从2014 年9 月到2015 年5 月。每个季节的试验奶山羊至少保证50 头以上，以减少因奶山羊个体差异而导致的试验误差。

1.2.2 同步发情和超排处理 每组奶山羊肌肉注射PG 0.1 mg/只，间隔9 ～12 d 进行第二次注射，剂量同第1 次。再间隔9 ～12 d 肌肉注射FSH，注射总剂量为300 IU，每间隔12 h 注射1 次，分6 次注射，剂量每24 h 递减1 次。在注射最后一针FSH 的同时，肌肉注射PG 1 mL/ 只，24 h 后注射LHRH 75 IU/ 只，各组奶山羊同期发情和超排方案相同。

表1 试验奶山羊超数排卵方案

1.2.3 手术回收卵母细胞 在试验奶山羊肌肉注射LHRH 后27 h 进行手术，回收卵母细胞。术前奶山羊停食24 h，停水12 h。肌肉注射静松灵进行全身麻醉，3 ～5 min 后奶山羊全身肌肉松弛，上手术架进行手术，回收卵母细胞。手术部位一般选在乳房前腹中线部位。用剃刀对手术部位刮毛后，用清水清洗局部，然后涂以4% 的碘酊，再用75% 的酒精脱碘，覆盖灭菌创巾。常规外科手术打开腹腔，术者将食指及中指伸入腹腔，将两侧子宫角连同该侧卵巢依次引至切口外，暴露子宫、输卵管、卵巢，用冲卵液将卵母细胞从输卵管内冲出，同时记录卵巢发育状况、排卵点、回收卵母细胞数量及卵母细胞的状态等。

1.2.4 术后护理 试验羊回收卵母细胞手术完成后，肌肉注射青霉素，术后当天给水及草料。

1.3 数据统计分析 本试验所得数据采用t 检验进行统计分析。

2 试验结果

2.1 不同季节山羊的超排效果 由表2 可知，在超排方法、奶山羊情况和激素等条件都相同的情况下，在非繁殖季节（春季）对奶山羊供体进行超排时，超排奶山羊的平均排卵点和平均获卵数都低于繁殖季节（秋季和冬季）的超排效果，两者差异显著（P ＜0.05）。而秋季和冬季两个繁殖季节之间的超排效果差异不显著（P ＞0.05）。

表2 季节对山羊超排效果的影响

2.2 上海地区不同季节的主要气候条件 由表3可知，上海一年四季的主要气候条件包括平均气温和平均日照时间等。这些季节性因素对山羊超排具有重要影响。

表3 上海地区不同季节主要气候条件

3 讨论

影响奶山羊超排效果的因素很多，包括动物因素、药物因素和其他环境因素等。试验表明，奶山羊是严格的季节性发情动物，季节因素对山羊超排效果具有显著影响，（周洪等，2007），而不同季节中平均气温和平均日照时间等季节气候因素不同，是导致季节因素对于山羊超排效果产生影响的最根本因素。

3.1 气温对山羊超排效果的影响 在影响山羊超排效果的众多季节性因素中，气温是主要因素之一。在奶山羊情况、超排方法和药物因素等条件都相同的情况下，奶山羊在繁殖季节（秋冬季）的超排效果显著高于非繁殖季节（春季）（P ＜0.05），原因之一是非繁殖季节的平均气温（15.3℃）显著高于繁殖季节的平均气温（12.8℃），气温高使奶山羊的卵巢处于休眠状态，对外源性促性腺激素的敏感性差，超排效果不明显（袁玉国等，2011）。并且气温越高，超排效果越不理想，这也是夏季奶山羊超排效果最差的原因。在一定温度范围内，较低的温度较有利于山羊的超排，但并不是温度越低超排效果越好，如果温度过低，会引起山羊冷应激，导致内分泌紊乱，对超排效果产生很大的负面影响。在本试验中，由于上海地区的冬季平均温度在山羊的适宜温度范围内，因此，冬季的超排效果并没有因气温低而受到影响。

3.2 日照时数对山羊超排效果的影响 日照时间也是影响奶山羊超排效果的主要季节性因素之一。奶山羊是短日照繁殖动物，母羊由长日照过渡到短日照后开始发情。这是由于光照能通过调节短日照繁殖动物体内褪黑激素的分泌而提高FSH 浓度，延长FSH 的作用时间，推迟FSH 峰的出现，促进卵泡发育，同时显著提高排卵时LH 浓度，促进排卵（Martemucci 等，1995）。从表2 和表3 可以看出，由夏季过渡到秋季，随着日照时数的减少，奶山羊的超排效果显著上升，但由冬季到春季，超排效果随着日照时数的增加而降低。

4 结论

春秋冬3 个季节，奶山羊超排的平均排卵点和平均获卵数分别为9.20 个、7.15 枚，10.58 个、9.48 枚和10.42 个、10.49 枚，春季平均排卵点和平均获卵数均显著低于秋冬季节，表明季节因素对奶山羊的超排效果具有显著影响。

我们通过对奶山羊分组进行同期发情与超数排卵处理，每个季节的试验奶山羊至少保证50 头以上，以减少因奶山羊个体差异而导致的试验误差，然后进行同步发情和超排处理，最后手术回收卵母细胞。再对数据进行分析，结果发现，主要气候条件包括平均气温和平均日照时间等。这些季节性因素的改变对不同季节山羊超排效果的差异具有重要意义。对日后研究山羊排卵的试验提供一些基本数据。