长链非编码RNAFOXP 4-AS 1表达与肿瘤患者预后关系的Meta分析△

高晶晶，方雪，张晨阳，于志豪，李枭晗，韩松，张莹

沈阳医学院公共卫生学院流行病学教研室，沈阳 110034

近年来肿瘤的发病率和病死率均逐年上升，已成为世界范围内的主要公共卫生问题，同样也成为中国人死亡的主要原因[1]。虽然近年来肿瘤的诊断和治疗取得了很大的进展，但肿瘤患者的预后仍然很差，即使是相同部位、相同病理类型的肿瘤患者，其预后仍有较大差异。因此，探索肿瘤特异性生物标志物用于肿瘤预后判断显得尤为重要。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类长度超过200个核苷酸的转录RNA分子，不具有编码蛋白质的能力[2]。越来越多的证据表明，lncRNA表达失调与恶性肿瘤的病理特征、预后及各种生物学过程有关[3-5]，并且预示着lncRNA可能是肿瘤特异性的预后生物标志物和治疗靶点[6]。lncRNA FOXP4-AS1位于染色体6p21.1，编码588 bp的转录本[7]。以往的研究表明，lncRNA FOXP4-AS1与各种肿瘤的预后具有相关性，但由于研究方案及样本量的限制，lncRNA FOXP4-AS1对肿瘤预后的预测价值尚未确定。本研究对12项包含1506例肿瘤患者的研究进行Meta分析，旨在探讨lncRNA FOXP4-AS1表达与肿瘤患者预后的关系，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 检索策略

通过 PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、CNKI、万方数据库、维普数据库、中国生物医学文献数据库检索符合条件的出版文献，检索时间为建库至2022年1月20日。英文文献检索词为“Neoplasm”“Tumor”“Neoplasia”“Cancer”“FOXP4 antisense RNA 1”“long non-coding RNA FOXP4-AS1”“lncRNA FOXP4-AS1”“FOXP4-AS1 lncRNA”“prognosis”“prognostic”“outcome”“survival”“recurrence”。中文文献检索词为“肿瘤”“癌症”“长链非编码RNA FOXP4-AS1”“lncRNA FOXP4-AS1”“预后”“生存”。

1.2 文献纳入和排除标准

纳入标准：①观察性研究；②有关lncRNA FOXP4-AS1在恶性肿瘤中预后的关系；③报告总生存期（overall survival，OS）、无病生存期（diseasefree survival，DFS）或无复发生存期（relapse-free survival，RFS）。排除标准：①综述；②会议摘要；③重复出版物；④细胞实验；⑤动物实验；⑥数据不足的文献。

1.3 数据提取

数据提取由两名研究者独立完成，并根据预先设计的数据提取准则提取相关数据。如果出现分歧则与第3个研究者进行讨论或协商。研究资料包括第一作者姓名、发表年份、地理区域、样本量、肿瘤类型、RNA检测方法、生存分析类型、结局指标、风险比（hazard ratio，HR）及其95%置信区间（confidence interval，CI）。当所包含的文献只有生存曲线时，使用Engauge Digitizer软件及Tierney等[8]描述的方法提取生存信息。

1.4 文献质量评估

采用Newcastle-Ottawa量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）评价纳入文献的质量，包括研究人群选择、组间可比性和结果测量3个类别的8个条目。质量评估得分为0～9分，6分及以上表明文献质量较好。质量评估同样由两名研究者独立完成，通过讨论解决分歧。

1.5 数据分析

采用Review Manager 5.3软件和Stata SE 12.0（Stata，College Station，TX）软件进行Meta分析，应用HR及相应的95%CI评估lncRNA FOXP4-AS1与各种肿瘤预后的关系。采用χ2值和I2值评价各研究之间的异质性，当I2≤50%或P﹥0.05时，采用固定效应模型进行分析；当I2﹥50%或P≤0.05时，采用随机效应模型进行分析；采用漏斗图以及Egger检验验证发表偏倚，P﹤0.05时表明具有较明显的发表偏倚；采用敏感性分析评估检验结果的稳健性；此外，对OS进行亚组分析，以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检索结果

本研究初步检索文献66篇（中文文献12篇，英文文献54篇），经过剔重、阅读摘要、全文复筛等最终纳入文献12篇，共1506例肿瘤患者。（图1）

图1 文献检索及筛选流程图

2.2 纳入文献的基本情况及质量评价

纳入的12篇文献[9-20]均为英文文献，9项研究[10-12,15-20]的研究对象来自中国，2项研究[13-14]的研究对象来自美国，其余1项研究[9]未交代研究对象来源；这些研究的样本量最少为24例，最多为384例；9项研究[10-12,15-20]采用实时荧光定量聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测RNA表达情况，其余3项研究[9,13-14]未交代检测方法；10项研究[9-11,13-14,16-20]采用了中位数作为截断值，其余2项研究[12,15]没有详细介绍截断值；其中lncRNA FOXP4-AS1高表达患者736例，lncRNA FOXP4-AS1低表达患者770例；12项研究均采用了OS作为评估患者预后的指标，6项研究[9,11-13,16,18]采用了DFS作为评估患者预后的指标，1项研究[15]采用了RFS作为评估患者预后的指标；纳入的12篇文献NOS评分均≥6分，文献质量较好。（表1）

表1 纳入12篇文献的基本情况及质量评价

2.3 lncRNA FOXP 4-AS 1与肿瘤患者OS关系的Meta分析结果

12项研究报告了OS，因此均纳入分析。异质性检验结果显示，I2=87%，存在异质性，采用随机效应模型，结果显示，lncRNA FOXP4-AS1高表达患者的OS明显短于lncRNA FOXP4-AS1低表达患者，差异有统计学意义（HR=1.65，95%CI：1.26～2.16，P﹤0.01）（图2）；敏感性分析结果显示，逐个排除各项研究后结论未发生改变，说明Meta分析的结果是稳健的（图3）；应用Egger检验进行发表偏倚检测，结果显示P=0.0051，漏斗图的分布也显示了不对称性（图4），提示存在一定的发表偏倚。

图2 lncRNAFOXP 4-AS 1与肿瘤患者OS关系的森林图

图3 OS研究的敏感性分析

图4 OS研究的漏斗图

2.4 lncRNA FOXP 4-AS 1表达与肿瘤患者OS关系的亚组分析结果

为探索异质性来源，根据上述研究的样本量、肿瘤类型和分析类型对OS进行亚组分析。结果显示，不同样本量亚组中，样本量﹤100亚组（HR=1.78，95%CI：1.21～2.62，I2=89%）和样本量﹥100亚组（HR=1.49，95%CI：1.00～2.22，I2=85%）中lncRNA FOXP4-AS1表达均与OS有关（P﹤0.05）；不同肿瘤类型亚组中，消化系统肿瘤（HR=1.63，95%CI：1.06～2.51，I2=82%）和其他类型肿瘤（HR=1.68，95%CI：1.17～2.42，I2=91%）中lncRNA FOXP4-AS1表达均与OS有关（P﹤0.05）；不同分析类型的亚组中，多变量分析（HR=1.75，95%CI：1.35～2.26，I2=80%）和单变量分析（HR=1.65，95%CI：1.12～2.42，I2=86%）中lncRNA FOXP4-AS1表达均与OS有关（P﹤0.05）。（表2）

表2 肿瘤患者OS的亚组分析结果

2.5 lncRNA FOXP 4-AS 1与肿瘤患者DFS和RFS关系的Meta分析

6项研究[9,11-13,16,18]被纳入DFS的Meta分析中，结果显示，lncRNA FOXP4-AS1表达与DFS无关（HR=1.27，95%CI：0.83～1.94，P=0.27，I2=86%）；1项研究[15]被纳入RFS的Meta分析中，结果显示，lncRNA FOXP4-AS1高表达与较短的RFS有关（HR=2.67，95%CI：1.45～4.91，P﹤0.01）（图 5）。漏斗图的分布显示一定的不对称性（图6），说明本研究纳入的文献存在一定的发表偏倚，DFS研究的Egger检验结果也验证了这一结果（P=0.0379）。

图5 lncRNAFOXP 4-AS 1与肿瘤患者DFS和RFS关系的森林图

图6 DFS和RFS研究的漏斗图

3 讨论

通过阅读大量文献发现，lncRNA在各种肿瘤中发挥促癌基因或抑癌基因的作用[21-23]。lncRNA通过与DNA、RNA或蛋白质相互作用发挥分子支架、海绵或辅助活化剂的功能。许多lncRNA在肿瘤的发展过程中具有至关重要的作用，它们参与了肿瘤的增殖、侵袭和转移过程[24]。因此，鉴定肿瘤相关lncRNA对于了解其在肿瘤发生中的作用以及为肿瘤患者提供有希望的治疗靶点具有重要意义。

本研究发现，与lncRNA FOXP4-AS1低表达患者相比，lncRNA FOXP4-AS1高表达肿瘤患者的OS和RFS更短。lncRNA FOXP4-AS1表达与肿瘤患者的DFS无关（P﹥0.05），这可能是由于纳入研究数较少且纳入研究的结论不一致。本研究结果提示，lncRNA FOXP4-AS1高表达可能是影响肿瘤患者预后的不利因素，说明lncRNA FOXP4-AS1高表达可用于预测各种类型肿瘤的不良预后。OS的亚组分析也能够验证以上结论，根据分析类型进行亚组分析时，各亚组合并的I2均小于总体合并时的I2，提示纳入研究的不同分析类型可能是异质性较高的原因。其次，纳入的12项研究定义lncRNA FOXP4-AS1表达高低的标准不同，其中还有2项研究未对定义标准进行交代，这也有可能是造成本研究异质性较高的原因。此外，纳入研究的结论不一致、不同类型肿瘤预后有一定差异也可能是本研究异质性较高的原因。OS及DFS研究的漏斗图和Egger检验均提示存在一定的发表偏倚，这可能是由于纳入的阴性结果（lncRNA FOXP4-AS1的表达是肿瘤的保护因素）文献数较少或者是缺少相关中文文献。

虽然许多研究已经探索了lncRNA FOXP4-AS1的表达与人类肿瘤预后的关系，但lncRNA FOXP4-AS1的作用机制仍然不清楚。国内的一项研究发现，lncRNA FOXP4-AS1可以通过竞争性结合微小RNA（microRNA，miRNA）-298上调TMPO基因表达，从而促进尤文肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭过程[25]。国外的一项研究结果显示，lncRNA FOXP4-AS1可通过抑制miRNA-423-5p的表达，上调NACC1基因的表达，从而促进被套区细胞淋巴瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程[16]。到目前为止，只有少数研究探索了lncRNA FOXP4-AS1在肿瘤中的作用机制。此外，很少进行活体动物实验。因此，还需要进行更多的基础研究来阐明lncRNA FOXP4-AS1在肿瘤中的预后价值。

此外，本研究存在一定的局限性。首先，lncRNA FOXP4-AS1表达没有公认的临界值，这可能会影响研究结论在临床上的应用，本研究只是初步研究，lncRNA FOXP4-AS1在肿瘤中的确切作用仍有待随机对照试验的进一步证实。其次，部分文献没有直接提供HR值，本研究根据Tierney等[8]描述的生存曲线提取方法间接获得了几篇文章中OS的HR和相应的95%CI，结果可能受到一定的影响。

综上所述，lncRNA FOXP4-AS1高表达与肿瘤患者较短的OS和RFS有关，其可能成为肿瘤患者的预后标志物和潜在的治疗靶点。