复方杨树花口服液体内抗炎效果的研究

郭金梅，魏淑英，李得鑫，高录军

(1.潍坊市农业农村局，山东潍坊 261000；2.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061；3.山东华农生物制药有限公司，山东潍坊 262000)

炎症是机体对感染、组织损伤及伤害性刺激等做出的保护性反应[1]。表现为红、肿、热、痛及功能障碍，在一定范围内可提高机体抵抗力，但持续炎症反应会对机体造成损伤，攻击自身组织，影响动物机体的健康[2]，炎症反应也是一些疾病的发病基础[3]。复方杨树花口服液在杨树花口服液的基础上进行复方改良，以期解决动物体肠道炎症问题。因此，试验通过预先使用复方杨树花口服液，对小鼠耳肿胀、足趾肿胀和血清中TNF-α，IL-1，IL-6分泌量的影响，以探究复方杨树花口服液的体内抗炎效果。为进一步开发复方杨树花口服液的药理作用提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 试验药品 复方杨树花口服浓度1 g/ml(生产批号：20200402)，由潍坊富言中药研发有限公司提供；阿司匹林片(生产批号：A100601)，购自山西云鹏制药有限公司。

1.2 试验动物 昆明小鼠120只，雄性，体重(30±2 g)，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司(动物许可证号SCXK(京)2020-0002)。

1.3 主要试剂 二甲苯(生产批号：20190325)，购自南京试剂公司；LPS(生产批号：084M4159V)，购自Sigma公司型号L2880；TNF-α(生产批号：P131773)，IL-1(生产批号：338392)，IL-6(生产批号：333552)ELISA试剂盒，购自RD公司。

1.4 主要仪器 打孔器，购自河南智科弘润环保科技有限公司；分析天平，购自赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；高速离心机，购自上海安亭科学仪器厂，CKX41光学显微镜，购自Olympus公司，全波长酶标仪购，自Bio-Tek公司。

1.5 试验设计及分组

1.5.1 小鼠耳廓肿胀试验 取雄性小鼠40只，随机分为5组，8只/组，分别是空白对照组(生理盐水：6 mL/kg)，阳性对照组(阿斯匹林:200 mg/kg)和给药组(高剂量组(12 mL/kg)、中剂量组(6 mL/kg)、低剂量组(3 mL/kg))，每天灌胃给药1次，连续给药7 d。末次给药45 min后，左耳涂抹二甲苯20 μL/只，右耳对照，40 min后脱颈椎处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用打孔器(8 mm/直径)分别在左右耳同一部位打下圆耳片，称重，每只鼠左右耳片重量之差值作为耳肿胀度，计算各组肿胀率。

1.5.2 小鼠足趾肿胀率试验 取雄性小鼠40只，试验分组与给药同1.5.1。末次给药45 min后，右后足足跖中部皮下注射0.1 mL 1%鸡蛋清致炎。于致炎前和致炎后30 min，60 min，120 min按容积法测定每鼠右后肢正常足容积，计算足跖肿胀率及足肿胀抑制率。

1.5.3 体内炎症因子的检测 取雄性小鼠40只，随机分为5组，8只/组，分别是空白对照组，阳性对照组(LPS:15 mg/kg)和给药组高剂量组(12 mL/kg)、中剂量组(6 mL/kg)、低剂量组(3 mL/kg)，每天灌胃给药1次，连续给药7 d。末次给药6 h后，除空白对照组外，各组均以15 mg/kg剂量的LPS进行腹腔注射，空白对照组腹腔注射等量生理盐水。各组于腹腔注射LPS 12 h后，摘眼球采血，分离血清。ELISA测定小鼠血清中TNF-α，IL-1，IL-6 含量。

2 结果与分析

2.1 对小鼠耳廓肿胀度的影响 由表1可知，与空白组相比，阿司匹林组与高、中、低剂量复方杨树花口服液组均能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀(P<0.01)，且高剂量复方杨树花口服液与阿司匹林效果相似(P>0.05)。

表1 复方杨树花口服液对小鼠耳肿胀度的影响

2.2 对足趾肿胀度的影响 由表2可知，与空白对照组相比，复方杨树花口服液三个剂量组在30 min、60 min、120 min均能显著抑制1%蛋清引起的小鼠足趾肿胀(P<0.01或P<0.05)。并且在60 min～120 min小鼠足趾肿胀度达到峰值。高、中剂量复方杨树花口服液能达到阿司匹林相似效果(P>0.05)，但高剂量效果更好。

表2 复方杨树花口服液对小鼠足趾不同时间段肿胀度的影响

2.3 对小鼠血清炎症因子的影响 由表3可知，与空白对照组相比，LPS能极显著性提高小鼠血清中TNF-α，IL-1β，IL-6的分泌量(P<0.01)，提前使用高剂量的复方杨树花口服液能极显著性抑制TNF-α，IL-1β，IL-6的异常分泌，与空白对照组差异不显著(P>0.05)，提前使用低剂量的复方杨树花口服液能显著抑制TNF-α，IL-1β，IL-6的异常分泌(P<0.01)，但与空白对照组相比差异仍然显著(P<0.01)。

表3 复方杨树花口服液对小鼠血清中TNF-α，IL-1β，IL-6分泌量的影响

3 讨论与结论

复方杨树花口服液由苍术、陈皮、厚朴、黄连、黄柏、柴胡、栀子、杨树花组成，主要功效燥湿解毒、芳香醒脾。试验采用二甲苯耳廓涂抹、蛋清足部注射、LPS腹腔注射的方法建立小鼠炎症模型，以阿司匹林作为西药对照，观察复方杨树花口服液的抗炎作用。用二甲苯进行耳肿胀实验，可增加毛细血管的通透性，使渗入组织的液体增多，小鼠耳朵会出现红肿[4]。耳廓肿胀度试验结果表明，阿司匹林能有效预防二甲苯引起的耳廓炎症反应，与王飞等研究相同[5]。12 mL/kg的复方杨树花口服液也可预防炎症反应的发生，但随着药物浓度的降低效果变差。异体蛋白致肿法是制备急性炎症模型的常用方法[6]，异体蛋白进入机体后可在短时间内引起组织的急性炎症反应，发生炎症的部位明显肿胀、体积增大，产生红、肿、热、痛等致炎症状[7]。足趾肿胀度试验结果表明，注射0.1 mL 1%蛋清后，在60 min～120 min内小鼠足趾肿胀度达到峰值，30 min时，阿司匹林与各剂量复方杨树花口服液均能起到良好抗炎作用，但60 min～120 min时，阿司匹林与低剂量复方杨树花口服液效果下降，说明阿司匹林在60 min后体内药物浓度降低，复方杨树花口服液抗足趾肿胀度需灌胃6 mL/kg以上。

小鼠腹腔注射LPS建立的小鼠炎症模型具有方便、稳定的特点而被广泛应用，LPS能引起小鼠巨噬细胞分泌大量的炎症因子到血清中[8]。TNF-α是一种肿瘤坏死因子，能诱导多种炎症因子产生，使细胞凋亡，其表达量的多少可以直接反映炎症的严重程度[9]。IL-6和IL-1β也是炎症反应的重要指标，过多的表达会引起一系列的炎性损伤[10]。有研究发现对脂多糖诱导的急性炎症小鼠模型都有明显的保护效应的药物，多数能明显抑制小鼠血清和肝脏中炎症因子释放，使急性炎症得到有效逆转[11]。因此，抑制血清炎症因子释放和脏器巨噬细胞活化是发挥抗炎作用的重要指标[12]。血清炎症因子试验发现复方杨树花口服液能显著性降低LPS诱导的炎症小鼠血清内TNF-α，IL-1，IL-6 含量(P<0.01 orP<0.05)，可见，复方杨树花口服液对LPS诱导的小鼠炎症模型有保护效应，但浓度越低，效果越差。

综上所述，试验初步证实复方杨树花具有抗炎的效果，但其分子机制尚不清楚，需要进一步探究。