急性呼吸道腺病毒感染患儿混合感染临床特征分析

蒋福亮 潘万贵 林毅辉

急性呼吸道感染属于鼻腔、咽、喉部位急性炎症反应的总称，现已发现的病毒感染中以腺病毒、鼻病毒、流感病毒、冠状病毒等为主[1-3]。目前根据该病病原学检测研究结果显示，急性呼吸道腺病毒（acute respiratory adenovirus，ADV）感染是婴幼儿急性呼吸道感染中最为常见的一种，主要引发发热、咳嗽、呼吸困难等症状，严重者可因呼吸衰竭进而死亡[4]。考虑到该病具有发作急、进展快等特点，因此，临床针对该病的早期发现尤为重要，应及时明确病原体种类，进而有利于临床医师给予对症处理。国内外对ADV感染的流行病学研究得到广泛重视，但有关该病混合感染及单一感染的临床特征比较尚无文献支持，因此，本研究旨在探究ADV感染患儿混合感染的临床特征，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年1-9月于泉州市妇幼保健院·儿童医院接受治疗的63例ADV感染患儿的临床资料。（1）纳入标准：①符合文献[5]《诸福棠实用儿科学（第7版）》中有关ADV感染诊断标准；②年龄≤12岁；③鼻咽拭子实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）测试其腺病毒为阳性或血清样本测试其腺病毒-lgM抗体阳性。（2）排除标准：①肝、肾功能异常；②病历记录不清楚；③标本不合格。根据其病原体检出情况分为混合感染组及单一感染组。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 按照文献[6]《临床护理实践指南（2011版）》中关于呼吸道咽拭子标本的采集步骤进行操作。操作步骤：用压舌板轻压舌部，迅速用棉签擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物，避免咽拭子触及其他部位；将拭子头浸入采样液中（含有阻止细菌和真菌生长的抗生素缓冲液），在采样液中压拭子头部数次，弃去尾部，旋紧管盖，以防干燥。将采集好的样本注明编号、样本类型、采集时间。样本提取前，将采集管（外螺旋扣、耐-80 ℃冻存）旋涡震荡1 min后混合均匀，再进行核酸提取，样本采集后应及时检测，2 ℃～8 ℃保存3 d内完成检测。

1.2.2 试剂准备 从试剂盒中取出qRT-PCR反应液、qRT-PCR酶混合液、管-引物探针，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离心。试剂使用份数N=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照，配置反应体系，加入离心管中，充分振荡混匀后瞬间离心，按20 μl分装至PCR反应管中，并转移至样本处理区。

1.2.3 样本处理 待测样本按照核酸提取试剂盒说明书进行操作核酸提取，并在上述准备好的PCR反应管中分别加入待测样本核酸、阳性对照和阴性对照各5 μl，终体积为25 μl/管，盖紧管盖，瞬时离心。

1.2.4 PCR扩增检测 将PCR管置ABI-7500荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司）扩增检测，设置其逆转录温度为50 ℃，时间10 min，循环数为1 cycle，而预变性及变性温度均设置为95 ℃，预变性时间控制为5 min，循环数为1 cycle，变性时间10 s，循环数为40 cycles，退火/延伸/检测荧光温度设置为55 ℃，时间40 s，循环数为40 cycle。

1.2.5 结果分析 根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值及Threshold的Value值（Start值建议设在3～15、End值建议设在5～20，同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面察看结果，利用受试者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线确定本试剂盒病原体临界Ct值均为35。

1.3 观察指标

比较两组患儿临床症状、流行病学、住院时间及转归情况，并重点分析混合感染组患儿辅助检查（病原学检查、实验室检查、胸部影像学检查）情况。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 分组结果

63例ADV感染患儿鼻咽拭子实时荧光PCR检测中单一感染组12例，单一感染率为19.05%，均为腺病毒感染，而混合感染组51例，混合感染率为80.95%。

2.2 两组临床症状比较

临床症状分析显示，混合感染组临床症状主要表现为咳嗽（100%）、发热（82.35%）及咳痰（72.55%），而单一感染组主要表现为咳嗽（100%）、发热（100%）及咳痰（50.00%），两组各项症状比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1（续）

2.3 两组流行病学比较

混合感染组，男29例（56.86%），女22例（43.14%），男女比例为1.32∶1；好发年龄段为0～4岁（70.59%）；临床诊断为重症肺炎有24例（47.06%），肺炎27例（52.94%）；发病主要集中于4～9月（84.31%）。单一感染组男6例（50.00%），女6例（50.00%），男女比例为1∶1；好发年龄段为0～4岁（66.67%）；临床诊断为重症肺炎有5例（41.67%），肺炎6例（50.00%），急性胃肠炎1例（8.33%）；发病主要集中于4～6月（91.67%）。两组性别、年龄、临床诊断比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；两组发病季节分布情况比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 两组流行病学比较[例（%）]

表2（续）

2.4 两组转归及住院时间比较

所有患儿均痊愈出院，无死亡病例。混合感染组住院时间为5～46 d，平均（34.59±4.28）d，单一感染组住院时间为3～22 d，平均（17.42±3.25）d。混合感染组住院时间长于单一感染组，差异有统计学意义（t=13.010，P=0.000）。

3 讨论

近年来，急性呼吸道感染发病率逐年上升，现已成为我国儿童主要威胁疾病之一。研究调查显示，90%以上的上呼吸道感染患儿属于病毒感染，而在已知的病毒感染病例中，腺病毒占主要部分，较易在局部暴发流行，因此，针对该病的临床特征及流行病学研究对临床诊疗具有显著意义[7-8]。本研究将ADV感染患儿分为混合感染组及单一感染组，旨在通过分析其混合感染发病率及临床特征，提高对该病的认知，以便临床针对性给予处理措施。以往研究显示，ADV感染在不同季节不同年龄其发病率存在显著差异[9-10]，而本研究通过分析患儿性别、年龄、临床诊断及发病季节，发现两组患儿性别比例均接近1∶1，提示该病患病率与性别无明显关系，与以往研究报道的男性易感结果不同[11]。可能是因为本研究样本量过少，需进一步研究。而两组患儿好发年龄段为0～4岁，与王和平等[12-14]研究结果一致。可能是因为该年龄段的儿童免疫系统发育未完善，较易受到外界细菌及病毒感染，其抵抗力较低，且考虑到ADV感染具有交叉感染的特点，该年龄段儿童大部分集中在幼儿园，给病毒感染创造一定的优越环境，因此较易暴发流行，且单一感染后较易为二次感染做基础，以致混合感染。本研究通过对ADV感染患儿的病种分析，结果显示两组患儿临床诊断主要以重症肺炎及肺炎为主，其中单一组患儿可能是因为腺病毒主要引起下呼吸道感染，以肺炎及支气管炎为主，而扁桃体炎等上呼吸道感染率较低。肺炎是小儿常见的感染性疾病之一，而随着近年来抗生素的广泛使用，细菌性肺炎发病率逐渐降低，而病毒感染及支原体所致的肺炎发生率呈现显著升高的趋势，其中腺病毒及呼吸道合胞病毒感染占主要。研究结果还显示单一感染患儿主要在4～6月发病，而混合感染主要于4～9月发病，两者发病时间分布差异具有统计学意义（P<0.05），可能与单一感染患儿样本量少有关，其发病主要为春、夏季，与以往研究得出的秋冬季结果不一致[15]。可能是因为本研究观察时间较短，未涉及全年，且不同地区其季节气候不同，但ADV活性确与气候存在密切关系。研究中将混合感染患儿作为研究重点，发现混合感染以腺病毒混合肺炎链球菌及肺炎支原体为主，与其临床症状对应，具体原因尚不明确，而患儿在ADV感染的基础上伴有不同种类不同数量的其他病毒感染，表明不同病毒之间存在一定的亲和性，可能是因为患儿机体遭受第1种病毒感染后，其呼吸道黏膜结构发生改变，为其他病毒的侵入打下基础，进而导致混合感染，增加临床治疗困难度[16-17]。因此，可通过发放健康知识宣传手册提高患儿家属认知度，进而预防性辨别临床症状，尽早入院治疗，以避免出现多种病毒感染的情况。另外单一感染患儿住院时间明显短于混合感染（P<0.05），证实混合感染患儿随着病情发展以致多重感染，在治疗方面难度系数更高，因此住院时间相对延长，应做好防备。

综上所述，ADV患儿混合感染的主要表现为咳嗽、发热及咳痰，男女比例为1.32∶1，好发年龄段为0～4岁，主要以腺病毒混合肺炎链球菌及肺炎支原体为主。