老年急性心肌梗死患者血清miRNA-34a和miRNA-126表达与心肌损伤和心功能的相关性

赵月妍 蒋海杰 刘艳 孔晓梅 刘李平 (大连医科大学附属第二医院心内科，辽宁 大连 116022)

急性心肌梗死具有发病迅速、病情进展快等特点，严重威胁患者生命安全〔1,2〕。心电图检查常用于检查心肌梗死，但30%左右患者无典型的胸痛表现，仅在发作时心电图才可检出典型的心肌梗死特征性ST段改变〔3,4〕。因此，寻找及时有效的诊断急性心肌梗死指标尤为关键。微小RNA(miRNA)是长度为18～22 nt的一类非表面RNA，在蛋白翻译和靶基因过程中发挥显著作用。近年来研究发现，miRNA与心血管疾病发生、发展具有明显相关性〔5,6〕。本文探讨老年急性心肌梗死患者血清miRNA-34a和miRNA-126表达与心肌损伤和心功能相关性，旨在为诊断和治疗急性心肌梗死提供指导。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择大连医科大学附属第二医院于2019年3月至2021年3月收治老年急性心肌梗死患者63例作为急性心肌梗死组，纳入标准：①符合《急性心肌梗死诊断和治疗指南》〔7〕中急性心肌梗死诊断标准；②年龄≥65岁。排除标准：①合并其他心血管疾病者；②合并肝肾功能严重异常者；③精神疾病者。急性心肌梗死组男35例，女28例；年龄65～78岁，平均(71.28±4.53)岁；体重指数18～27 kg/m2，平均(22.73±1.95)kg/m2。另选择医院同期健康体检者50例作为对照组，男26例，女24例；年龄65～79岁，平均(71.41±4.98)岁；体重指数18～26 kg/m2，平均(22.26±1.89)kg/m2。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组均临床资料完整且签订知情同意书。

1.2方法

1.2.1血清miRNA-34a和miRNA-126表达测定 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定miRNA-34a和miRNA-126表达，具体方法：采集受试者5 ml空腹外周静脉血，离心10 min，3 000 r/min，半径10 cm，收集患者血清，采用Trizol试剂盒提取血清中总RNA，测定RNA纯度和浓度，取1 μg逆转录，生成cDNA。采用SYBR绿色染料法定量检测，依据逆转录试剂盒使用说明书逆转录cDNA，内参基因选择U6，检测血清miRNA-34a和miRNA-126表达。取cDNA进行qRT-PCR，反应条件：95℃预变性5 min，95℃ 15 s、56℃复性20 s，72℃延伸45 s，共完成32个循环，每个样品设置3个复孔。引物序列由上海生工生物工程有限公司合成。采用2-△△Ct法计算miRNA-34a和miRNA-126 mRNA相对表达量。

1.2.2心肌酶测定 采集受试者5 ml空腹外周静脉血，以10 cm半径、3 000 r/min转速，离心10 min，收集血清，采用AU5800型全自动生化分析仪测定心肌肌钙蛋白(cTn)I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌酸激酶(CK)水平。

1.2.3心功能测定 采用彩色多普勒超声检测仪测定左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室射血分数(LVEF)。

1.3统计学方法 采用SPSS25.0软件行χ2检验、t检验。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-34a和miRNA-126对急性心肌梗死诊断价值；采用Pearson分析血清miRNA-34a和miRNA-126与心肌酶和心功能相关性。

2 结 果

2.1两组血清miRNA-34a和miRNA-126相对表达量比较 急性心肌梗死组血清miRNA-34a和miRNA-126相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组血清miRNA-34a和miRNA-126相对 表达量比较

2.2两组心肌酶指标比较 急性心肌梗死组血清cTnI、CK-MB和CK水平显著高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组心肌酶指标比较

2.3两组心功能比较 急性心肌梗死组LVEDD和LVESD显著高于对照组，而LVEF显著低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组心功能比较

2.4血清miRNA-34a和miRNA-126与心肌酶和心功能相关性 miRNA-34a与cTnI(r=0.673)、CK-MB(r=0.748)、CK(r=0.659)、LVEDD(r=0.725)和LVESD(r=0.796)呈线性正相关，而与LVEF(r=-0.829)呈线性负相关(均P<0.05)；miRNA-126与cTnI(r=0.709)、CK-MB(r=0.762)、CK(r=0.718)、LVEDD(r=0.654)和LVESD(r=0.823)呈线性正相关，而与LVEF(r=-0.793)呈线性负相关(均P<0.05)。

2.5血清miRNA-34a和miRNA-126对急性心肌梗死诊断价值 经ROC曲线分析，miRNA-34a对急性心肌梗死诊断灵敏度为73.68%(28/38)，特异度为64.00%(16/25)；miRNA-126对急性心肌梗死诊断灵敏度为72.09%(31/43)，特异度为65.00%(13/20)。见图1。

图1 ROC曲线分析血清miRNA-34a和 miRNA-126对急性心肌梗死诊断价值

3 讨 论

急性心肌梗死发病原因主要是由于冠状动脉内粥样斑块破裂及血栓形成，从而造成冠状动脉阻塞，产生局部心肌缺血性坏死和损伤，可表现为胸骨后压榨性疼痛，甚至可伴心律失常、心力衰竭或休克，伴随心电图改变及心肌酶显著增高〔8～11〕。心肌酶通常包括cTnI、CK及CK-MB。当心肌细胞膜通透性增强或缺血坏死时心肌酶进入血液内，故而测定心肌酶有助于心肌损伤诊断〔12，13〕。CK-MB是急性心肌梗死诊断的金标准，且是心肌酶谱的核心，但由于CK-MB半衰期较大，对一些临床症状不明显者，可能会由于错过最佳诊断期而耽误治疗〔14〕。cTnI具有调节横纹肌与心肌的收缩作用，仅存在于心室肌与心房中。外周血血液中cTnI在生理状态下含量极少，当出现心肌受损，则会导致大量cTnI释放入血，在心肌梗死血液中明显增高，在检测心肌损伤中具有较高特异性。本研究表明老年急性心肌梗死患者存在心肌损伤。

miRNA是广泛存在于真核细胞且进化高度保守的一类非编码小分子RNA，主要通过诱导序列特异性靶RNA降解或抑制RNA翻译来调控分化、凋亡及增殖等细胞生物学变化。miRNA对人体各类组织、细胞的生物学行为具有重要调控作用。miRNA在冠心病基本病理特征如动脉粥样硬化的发生、发展中扮演重要角色〔15〕。miRNA在心脏组织的失衡表达可能是心脏功能和形态改变的原因之一〔16〕。miRNA-34a在动脉粥样硬化斑块动脉中高表达，且可作为心力衰竭和心源性死亡的一项预测指标。有研究报道显示〔17〕，miRNA-34a在老年冠心病患者中高表达，认为其可能参与了冠心病的发病机制，且可作为反映冠心病病情严重程度的血清学指标。miRNA-126能够减少新生血管，使血管壁功能和形态发生改变，还能够通过上调血管内皮生长因子表达促进动脉粥样硬化形成与发展〔18〕。miRNA-126具有抑制血管炎性反应和维持血管结构的作用，且与再灌注损伤严重程度相关〔19〕。谭顺林〔20〕研究报道显示，慢性心力衰竭患者血清miRNA-126表达高于健康体检者，且心功能Ⅳ级血清miRNA-126表达高于Ⅱ级和Ⅲ级，Ⅲ级高于Ⅱ级，可见血清miRNA-126表达与心功能相关。本研究表明老年急性心肌梗死患者血清miRNA-34a和miRNA-126明显升高；血清miRNA-34a和miRNA-126对老年急性心肌梗死患者具有良好的灵敏度和特异度。

综上所述，老年急性心肌梗死患者血清miRNA-34a和miRNA-126高表达，具有良好诊断效能，且与心肌损伤和心功能密切相关。