膀胱尿路上皮癌中p140Cap和Ki-67的表达及其相关性

邓程恩

摘要：目的：探讨p140Cap和细胞核增殖相关抗原67（Ki-67）在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其相关性。方法：应用免疫组化SP法检测p140Cap、Ki-67在膀胱尿路上皮癌组织和膀胱癌癌旁组织中的表达。结果：膀胱尿路上皮癌组织中的p140Cap、Ki-67阳性表达率高于膀胱癌癌旁组织;膀胱尿路上皮癌组织中的p140Cap阳性表达与肿瘤病理分级无关;p140Cap和Ki-67在膀胱尿路上皮癌组织中的表达呈正相关。结论：p140Cap在膀胱癌组织中高表达，可能在膀胱癌的发展中发挥促癌作用，抑制凋亡;p140Cap和Ki-67可能在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中起重要作用，影响膀胱癌不良预后。

关键词：膀胱尿路上皮癌;p140Cap;细胞核增殖相关抗原67;免疫组织化学

【中图分类号】 R694 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）12--01

膀胱癌属世界九大恶性肿瘤之一。膀胱移行细胞癌（BTCC）具有多灶性、易复发性和较高死亡率的生物学特征[1]。研究多基因与膀胱移行细胞癌生物学行为的关系，不仅可以了解膀胱移行细胞癌发生发展过程中各基因及其所表达产物所发生的改变，还可通过了解各基因的作用及相互关系，为移行细胞癌发病机制的阐明提供一定的帮助。细胞核相关抗原67（Ki-67）是一种仅在增殖细胞中表达的蛋白，是检测细胞增殖活性的重要指标。p140Cap主要表达于大脑、睾丸以及富含上皮的组织，例如乳腺、大肠等。目前关于人类肿瘤组织中表达的报道较少，仅根据过往报道笼统认为，p140Cap的阴性表达率与肿瘤的恶性程度成负相关。现本研究应用免疫组化方法检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁组织中p140Cap和Ki-67表达，旨在探讨p140Cap和Ki-67蛋白表达的意义及相关性。

1研究方法：

1.1膀胱尿路上皮癌患者资料和组织准备

选取广西医科大学附肿瘤医院泌尿外科所收治的膀胱尿路上皮癌患者15例，标本均经病理证实为膀胱尿路上皮癌，提取患者的手术切除标本。入选病例均为男性，年龄47～77岁，平均63岁。15例标本病理分级按WHO标准分为：低级别6例，高级别9例。临床分期按UICC-TNM标准分为：Tis～T1期7例，T2～T4期8例。术后和活检时采集样本，从每例患者标本中可获得肿瘤组织和癌旁正常膀胱粘膜组织备用，取癌旁正常膀胱粘膜组织标本作对照。

1.2免疫组化检测p140Cap和Ki-67的表达

采用免疫组织化学方法检测15例膀胱尿路上皮癌者组织及癌旁正常组织中p140Cap和Ki-67的表达情况。

实验试剂：用于免疫组织化学染色的p140Cap一抗多克隆兔抗人SNAP25InteractingProteinAb抗体购自Novus，即用型快捷免疫组织化学MaxVision试剂盒，Ki-67鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，二抗和DAB显色试剂盒购于福州迈新生物技术公司。

1.3免疫组化结果判断：

Olympus（日本）BX53双目显微镜下观察，每张切片随机选取4个不同视野，分别计数阳性和阴性细胞。p140Cap阳性表达产物呈黄色颗粒状，表达较强时呈棕黄色，定位于细胞核中。光镜下半定量结果判断标准[2]：染色强度分数标准：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。同样物镜下阳性细胞数：≤10%为1分，11%—50%为2分，51%—75%为3分，≥75%为4分。两类分数乘积满3分为“+”;4分为“++”;5分以上为“+++”;“+、++、+++”为表达阳性;“++、+++”为表达强阳性。本研究P140Cap阳性表达率为（评分大于4分，++/+++），即高表达。Ki-67阳性表达定位于细胞核，阳性表达表现为棕黄色颗粒染色，以阳性表达率<20%为阴性，≥20%为阳性[3]。

1.4分析p140Cap和Ki-67蛋白的表达及相关性。

2.结果：

膀胱尿路上皮癌组织p140Cap阳性表达率（++/+++）为100%（15/15），癌旁正常组织阳性表达率为3/15（20%），癌组织阳性表达率高于癌旁正常组织;低级别和高级别尿路上皮癌组织均高表达p140Cap。在膀胱尿路上皮癌组织中p140Cap的表达未体现出与癌细胞恶性程度及浸润程度相關。Ki-67在膀胱尿路上皮癌组织中的阳性率12/15（80%），癌旁正常膀胱组织2/15（13.3%），癌组织Ki-67阳性表达率高于癌旁正常组织。高级别尿路上皮癌组织Ki-67呈高表达，低级别癌组织Ki-67呈低表达，Ki-67随癌细胞恶性程度及浸润程度增加有增强趋势。经分析，膀胱尿路上皮癌组织P140Cap、Ki-67表达阳性表达率均高于癌旁组织组织，两者表达成正相关。

3.讨论

膀胱癌作为泌尿系统三大常见的恶性肿瘤之一，可由吸烟、感染等多种因素所致。肿瘤分子标志物作为反映肿瘤存在于机体内具体情况的重要观察指标，在健康人体内可能本不存在，而在恶性肿瘤患者的机体内或肿瘤组织中，可以检测到较高含量，并根据含量多少反映肿瘤的恶性程度，用于判断肿瘤发生、发展情况时具有重要价值。

p140Cap主要表达于大脑、睾丸以及富含上皮的组织如乳腺和大肠等，目前的主要通路将E-钙粘蛋白固定在细胞膜上并抑制EGFR和Erk1/2信号传导，阻断癌细胞的分散和增殖，从而影响癌细胞的侵袭和生长[4]。在乳腺癌细胞中，p140Cap可能通过Src和Rac激活表达控制非依赖性生长，p140Cap高表达抑制体内肿瘤生长，p140Cap低表达增加体内肿瘤的形成。同时有学者[5]发现：p140Cap在乳腺癌中可作为肿瘤抑制剂，发挥负性调节作用。并且p140Cap在大部分结肠癌细胞中高表达，少部分大肠腺瘤表达，正常组织极少表达，在大肠癌发展的过程中发挥促进肠癌细胞生长、转移和侵袭，抑制凋亡的作用[6]。

Ki-67作为一种仅在细胞核内表达，与细胞分裂增殖相关的蛋白，是目前检测肿瘤细胞增殖活性的指标之一，并且其阳性表达可随肿瘤分化程度降低或临床分期增高而升高，同时Ki-67可能不仅与膀胱尿路上皮癌的发生发展有关，还与浸润、转移有关。本研究癌组织Ki-67阳性表达率高于癌旁正常组织，且随癌细胞恶性程度及浸润程度增加呈增强趋势，与之前研究相似，均证实了p140Cap、Ki-67和膀胱尿路上皮癌的相关性。

通过本研究，p140Cap表现为癌基因的特性，可能在膀胱癌的发展中发挥促癌作用，抑制凋亡，为预测膀胱癌预后的一个新的分子标志物。p140Cap、Ki-67两者表达成正相关，联合检测二者有助于膀胱尿路上皮癌发病机制的进一步研究。

参考文献：

[1]何小龙，朱海琴，高漓.经典Wnt/β-连环蛋白信号通路在膀胱癌发生与发展中的作用研究进展[J].广西医学.2016，38（06）：838-41.

[2]许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志，1996，6（4）：229—231.

[3]伍季，苟欣，李云祥.联合检测ΔNp63、Ki-67和VEGF与膀胱移行细胞癌预后的相关性研究〔J〕.重庆医学，2010;39（22）：3056-8.

[4]Sharma N， Repetto D， Aramu S， Grasso S， Russo I， Fiorentino A， et al. Identification of two regions in the p140Cap adaptor protein that retain the ability to suppress tumor cell properties[J]. American journal of cancer research. 2013，3（3）：290-301.

[5]童辉.p140Cap在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].中国当代医药，2018，25（29）：52-54.陆皓杰，曾平，黄水平.基因表达对膀胱癌生存结局的预测：稀疏与混合Cox模型的实证比较研究[J].中国卫生统计，2022，39（1）：25-30.DOI：10.3969/j.issn.1002-3674.2022.01.005.

[6]馬锋.p140Cap在结直肠癌增殖、侵袭和转移的作用[D].南方医科大学，2014.

基金项目：广西壮族自治区卫生健康委员会自筹经费项目（No.Z20191091）