环状RNA TADA2A在胃癌组织中的表达及临床意义

余智涛 张 磊 温建燔

环状RNA为非编码RNA家族成员，其广泛存在于人体组织中，其表达具有组织特异性，是非编码RNA 领域的研究热点[1]。既往研究显示，环状RNA具有多种生物学功能，其可通过mRNA海绵作用，提升靶基因的表达[2]。本课题组前期应用芯片技术筛选发现，胃癌组织中环状RNA TADA2A呈低表达。因此，为进一步探讨环状RNA TADA2A与胃癌的关系，本研究对92例胃癌患者进行研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

选取2020年1月至2021年1月于我院接受手术治疗的胃癌患者92例纳入研究，入组患者均经病理证实为原发性胃癌且术前均未行放化疗。收集术后胃癌组织及癌旁组织(经病理证实为正常胃组织)作为样本，将新鲜组织样本经冷冻处理后置于-80℃冰箱待检。环状RNA TADA2A引物及内参GAPDH委托上海生工生物工程公司合成。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取 根据Trizol试剂盒(生产厂家：大连宝生物工程公司)说明书操作，取样本组织80 mg，超声匀浆后，经1‰DEPC水溶解后，提取样本中RNA的浓度、纯度，另取1 μl RNA检测RNA完整性。

1.2.2 逆转录反应 根据逆转录试剂盒(生产厂家：大连宝生物工程公司)说明书操作，反应体系(20 μl)：2 μl RNA样品、1 μl引物、1 μl逆转录酶、1 μl GAPDH反向引物、1 μl dNTP混合物(10 mM)、0.5 μl RNase抑制剂 、4 μl 5×RT 缓冲液、9.5 μl不含RNase的H2O。反应条件：42℃ 30 s，56℃ 15 min，85℃ 1 min，4℃ 5 min，产物置于-20℃保存。

1.2.3 PCR扩增 采用实时荧光定量PCR仪(生产厂家：西安天隆科技公司)，按照PCR试剂盒(生产厂家：广州锐博生物科技公司)说明书操作，反应体系(25 μl)：2 μl稀释的cDNA、12.5 μl SYBP Premix EX TaqTMⅡ、2 μl引物，加ddH2O水补至25 μl。反应条件：95℃ 1 min，95℃ 30 s，60℃ 1 min，42℃ 30 s，40个循环。

1.2.4 结果计算 采用2-△△CT方法计算，GAPDH为内参，取三个复孔均值，以 2-△△CT表示目的基因表达，环状RNA TADA2A的相对表达量=2-△△CT值(环状RNA TADA2A)-2-△△CT值(GAPDH)。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 组织中环状RNA TADA2A的相对表达量比较

环状RNA TADA2A在胃癌组织中相对表达量为(0.83±0.14)，明显低于癌旁组织(2.29±0.87)，两组比较差异显著(t=15.892，P<0.001)，见图1。

图1 组织中环状RNA TADA2A的相对表达量比较

2.2 环状RNA TADA2A的相对表达量与胃癌临床特征的关系

临床分期高、深层浸润、发生淋巴结转移、有脉管癌栓的胃癌组织中环状RNA TADA2A的相对表达量显著下降(P<0.05)，见表1。

表1 环状RNA TADA2A的相对表达量与胃癌临床特征的关系

2.3 环状RNA TADA2A诊断胃癌的ROC曲线分析

由ROC曲线可知，环状RNA TADA2A诊断胃癌的AUC为0.796(95%CI：0.683-0.925，P<0.05)，诊断特异度为80.21%，敏感度为88.43%，见图2。

图2 环状RNA TADA2A诊断胃癌的ROC曲线

3 讨论

临床研究显示，环状RNA的分子结构为封闭环状，它是特殊的内源性非编码RNA，存在于人体细胞中且具有多种生物学功能[3]。近年来，环状RNA与肿瘤的关系已成为临床研究的热点问题。陈炳合等[4]研究报道，胃癌组织中环状RNA cRAPGEF5表达下调，其可能参与胃癌的侵袭、增殖、转移。罗再等[5]研究发现，胃癌组织中环状RNA RUNX1呈高表达，且其表达与胃癌病理特征、患者预后有关。朱秋霞等[6]研究发现，肺腺癌组织中环状RNA TADA2A呈高表达，下调表达水平可抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移。另有学者研究报道，FAM107A在胃癌等多种癌症中呈低表达，TADA2A可能与FAM107A相互作用，共同参与细胞过程，发挥抑癌作用[7]。

本研究发现，与癌旁组织比较，胃癌组织中环状RNA TADA2A的相对表达量明显降低。结果提示，胃癌组织中环状RNA TADA2A呈低表达。既往研究显示，环状RNA TADA2A位于人17号染色体，其在大肠癌组织中表达下调，其可通过miR-374a-3p/KLF14轴抑制大肠癌的进展[8]。另有研究报道，乳腺癌组织中环状RNA TADA2A呈低表达，其可通过靶向miR-203a-3p/SOCS3轴抑制乳腺癌的进展和转移[9]。由以上研究可知，环状RNA TADA2A在肿瘤组织中呈异常表达，其与恶性肿瘤的的发生有关。

本研究表明，临床分期高、深层浸润、发生淋巴结转移、有脉管癌栓的胃癌组织中环状RNA TADA2A的相对表达量显著下降。通过ROC曲线分析，环状RNA TADA2A诊断胃癌的特异度、敏感度较高，结果提示，环状RNA TADA2A可能参与胃癌的发生进展过程，其可能成为胃癌临床诊断标记物。有研究显示，环状RNA TADA2A可通过调节CREB3表达、海绵化miR-203a-3p，进而促进骨肉瘤进展[10]。另有研究报道，环状RNA TADA2A可通过抑制成纤维细胞的增殖和活化来缓解特发性肺纤维化[11]。有学者发现，新型环状RNA TADA2A可通过海绵化miR-203促进卵巢癌的增殖和转移。李震等[12]研究发现，环状RNA TADA2A可通过促进结直肠癌细胞的凋亡，而抑制癌细胞增殖，其在结直肠癌中发挥抑癌作用。因此，我们推测环状RNA TADA2A在肿瘤组织发挥抑癌作用。

综上所述，环状RNA TADA2A在胃癌组织中呈低表达，其可能与胃癌的发生进展有关，但临床尚需进一步探讨其作用机制。