冠心病患者血清miR-146a、miR-155水平及与冠脉狭窄程度的关系

司大妞，乔雯雯，袁玲霞

冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病，CHD）是临床常见的心血管疾病，其发生与冠状动脉（冠脉）粥样硬化导致的血管腔狭窄或阻塞有关。近年来，CHD发病率呈上升趋势，严重威胁人类健康，若不及时救治，可导致猝死，早期发现CHD患者至关重要。其诊断的“金标准”为冠脉造影检查，可有效评估冠脉狭窄程度，但冠脉造影为有创检查，费用相对较高且有并发症，部分患者不易接受[1,2]。因此，寻找一项简单、易行的血清指标初步评估冠脉狭窄程度具有重要意义。微小RNA-146a（miR-146a）和微小RNA-155（miR-155）是目前心血管疾病研究较多的微小RNA（miRNA）家族中的成员，均参与血管生成、心肌重塑等生物学过程[3,4]。有研究报道[5]，miR-146a和miR-155在高脂诱导的内皮细胞炎症中起重要作用。因此，本研究通过测定CHD患者血清miR-146a、miR-155水平，分析两者与冠脉狭窄程度的关系，以期为早期筛查及防治CHD提供帮助，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2019年1月～2020年12月于我院心血管内科住院的220例确诊或疑似CHD患者作为受试对象。入选标准：①自愿接受冠脉造影检查；②肝、肾及肺功能正常；③临床资料完善；④患者或家属签署《知情同意书》。排除标准：①对造影剂或碘过敏患者；②合并严重心力衰竭或心律失常患者；③伴有自身免疫疾病患者；④伴有发热现象；⑤存在精神异常者。根据造影结果将220例患者分为对照组（未见冠脉狭窄或狭窄＜50%）94例和CHD组（冠脉至少有一支血管管腔直径狭窄≥50%）126例。CHD组中稳定型心绞痛40例，不稳定型心绞痛47例，急性心肌梗死39例。本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 收集临床资料收集患者性别、年龄、糖尿病史、高血压史、吸烟史（连续或累积吸烟至少6个月）、体质指数（BMI）等资料，以及相关血脂指标：总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。

1.2.2 冠脉狭窄程度的评估采用Gensini评分法评估冠脉狭窄程度[6]：①冠脉狭窄程度评分：将狭窄≤25%、25%～50%、50%～75%、75%～90%、90%～99%及完全闭塞，分别记为1、2、4、8、16及32分。②冠脉病变部位确定权重系数：第2对角支、后侧支均×0.5；第1对角支、钝缘支、左前降支远段、左室后降支、后侧支、右冠脉全段、回旋支远段、后降支、心尖支均×1；左前降支中段×1.5；回旋支近段、左前降支近段×2.5；左主干×5。每一分支Gensini积分以狭窄程度评分×病变部位系数表示，各分支Gensini积分之和即为患者病变程度的总积分。依据造影结果分为单支病变组（n=39）、双支病变组（n=44）、三支病变组（n=43）；并根据Gensini积分三分位数分为低Gensini积分组（≤20分，n=38）、中Gensini积分组（20～55分，n=46）、高Gensini积分组（＞55分，n=42）。

1.2.3 血清miR-146a、miR-155水平测定于患者入院次日清晨采肘静脉血3 ml，3000 r/min离心10 min，分离血清，置于-80 ℃低温环境中待测。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定血清miR-146a、miR-155水平。血清总RNA提取按照Trizol试剂盒（购自上海名劲生物科技有限公司）说明书进行，根据PrimeScriptTM RT试剂盒（购自上海善然生物科技有限公司）中方法合成cDNA链。内参为U6，引物序列均由上海英骏生物技术有限公司合成，见表1。扩增条件为 95 ℃、10 min，95 ℃、15 s，60 ℃、60 s，共40个循环。重复3次，结束后用2-△△Ct计算血清miR-146a、miR-155相对表达量。

表1 引物序列

1.3 统计学方法利用SPSS 20.0对数据进行处理。计量资料均符合正态分布和方差齐性检验，采用均数±标准差（±s）表示，两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，总体有差异进一步通过t检验进行两两比较。计数资料采用百分率（%）表示，组间比较行χ2检验。采用Pearson检验分析CHD患者血清miR-146a、miR-155水平与Gensini积分的相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床资料比较两组患者性别、年龄、糖尿病史、高血压史、吸烟史、BMI、TC及LDL-C相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）；而与TG、HDL-C相比，差异均有统计学意义（P＜0.05），表2。

表2 两组患者临床资料比较

2.2 两组患者血清miR-146a、miR-155水平比较CHD组患者血清miR-146a水平明显高于对照组（P＜0.05），血清miR-155水平显著低于对照组（P＜0.05），表3。

表3 两组患者血清miR-146a、miR-155水平比较

2.3 CHD组患者不同病变支数血清miR-146a、miR-155水平及Gensini积分比较CHD组患者不同病变支数血清miR-146a、miR-155水平及Gensini积分相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。三支病变组、双支病变组血清miR-146a水平和Gensini积分均显著高于单支病变组（P＜0.05），三支病变组血清miR-146a水平和Gensini积分均明显高于双支病变组（P＜0.05）；三支病变组、双支病变组血清miR-155水平均明显低于单支病变组（P＜0.05），三支病变组血清miR-155水平均显著低于双支病变组（P＜0.05），表4。

表4 CHD组患者不同病变支数血清miR-146a、miR-155水平及Gensini积分比较

2.4 CHD组患者不同Gensini积分组血清miR-146a、miR-155水平比较CHD组患者不同Gensini积分组血清miR-146a、miR-155水平相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。与低Gensini积分组相比，高、中Gensini积分组血清miR-146a水平显著升高（P＜0.05），血清miR-155水平明显降低（P＜0.05）；与中Gensini积分组相比，高Gensini积分组血清miR-146a水平明显升高（P＜0.05），血清miR-155水平显著降低（P＜0.05），表5。

表5 CHD组患者不同Gensini积分组血清miR-146a、miR-155水平比较

2.5 CHD组患者血清miR-146a、miR-155水平与Gensini积分的相关性CHD组患者血清miR-146a水平与Gensini积分呈正相关（r=0.634，P＜0.05），miR-155水平与Gensini积分呈负相关（r=-0.646，P＜0.05），图1。

图1 CHD组患者血清miR-146a、miR-155水平与Gensini积分的相关性

3 讨论

冠心病（CHD）的发生、发展均与冠脉病变支数和狭窄程度密切相关，主要表现为突感心前区疼痛，临床病死率较高，冠脉造影是其确诊的“金标准”，但部分疑似冠心病患者因身体原因不愿接受检查，初步评估冠脉狭窄情况尤为重要。相关研究报道[7,8]，血清miR-146a、miR-155水平变化与冠脉粥样硬化形成有关，有望成为评估冠脉狭窄程度的有效指标。

miRNA是一种不编码蛋白质单链RNA，通过抑制靶基因功能发挥其转录后调控作用，参与调控细胞生长分化、血管形成等多种生理及病理过程[9]。miR-146a是miRNA家族中重要成员之一，位于人染色体5q33，在人体心肌细胞、冠脉内皮细胞等心脏的多种细胞中均有表达[10]。研究发现miR-146a可通过调节相关炎症反应及血管形成，参与动脉粥样硬化的发生、发展[11]。Quan等[12]研究表明，CHD患者血浆miR-146a水平较健康对照组明显升高，其水平变化与冠脉粥样硬化严重程度有关，对CHD有一定预测价值。而miR-155是目前研究较广泛的miRNA，其在动脉粥样硬化过程中的炎症反应、细胞黏附等多个生理病理过程中均发挥着重要调节作用[13]。研究发现miR-155在斑块中的单核巨噬细胞、动脉硬化血管的内皮细胞中均有表达，通过调节不同靶基因参与动脉粥样硬化病变进展[14]。林美萍等[15]研究发现，CHD合并糖耐量减低患者血浆miR-155水平最低，其次为单纯CHD患者，对照组血浆miR-155水平最高。以上研究提示，血清miR-146a、miR-155水平可能与CHD患者冠脉狭窄程度有关。

本研究结果发现，CHD组患者血清miR-146a水平远高于对照组，血清miR-155水平远低于对照组，与Quan、林美萍等[12,15]研究结果基本一致，提示血清miR-146a水平升高、miR-155水平降低可能参与CHD发生。进一步研究发现，CHD三支病变组患者血清miR-146a水平和Gensini积分最高、其次为双支病变组患者、单支病变组患者血清miR-146a水平和Gensini积分最低，而单支病变组患者血清miR-155水平最高、其次为双支病变组患者、三支病变组患者血清miR-155水平最低，提示血清miR-146a、miR-155水平变化和Gensini积分高低可能与CHD患者冠脉病变支数有关，考虑可能与多支病变致多处血管内皮损伤有关。本研究还发现，CHD组患者不同Gensini积分组血清miR-146a水平高低依次为高Gensini积分组、中Gensini积分组、低Gensini积分组，血清miR-155水平高低依次为低Gensini积分组、中Gensini积分组、高Gensini积分组，提示CHD患者血清miR-146a、miR-155水平变化可能与冠脉狭窄程度和病变部位有关。此外，Pearson检验分析发现，CHD组患者血清miR-146a水平与Gensini积分呈正相关，miR-155水平与Gensini积分呈负相关，提示Gensini积分越高，血清miR-146a水平越高，血清miR-155水平越低，两者可能共同参与CHD的发生及发展。

综上所述，CHD患者血清miR-146a水平升高、miR-155水平降低，两者水平变化与冠脉病变支数和Gensini积分有关，可作为评估冠脉狭窄程度的潜在标志物为早期筛查和诊断CHD提供参考依据。本研究未分析CHD患者不同类型血清中miR-146a及miR-155水平，应扩大样本量进行后续研究。