胃癌组织中MOGAT3表达及临床意义*

姚秀芳，孙慧华，吴建华，高雪梅，张 曙，王 燕

（1如东县人民医院病理科，江苏 226400；2南通大学附属医院病理科）

胃癌是起源于胃上皮的恶性肿瘤，是全球最为常见的恶性肿瘤之一，大部分新发病例在发展中国家，尤其在亚洲东部，主要集中在中国[1]。我国胃癌发病率、死亡率高居所有肿瘤第二位，仅次于肺癌[2]。胃癌发生与多种因素密切相关，如饮食习惯、幽门螺杆菌感染等，脂肪消化吸收代谢功能异常与胃癌发生也有一定关系[3]。单酰基甘油酰基转移酶3（MOGAT3）是一种完整的膜酶，具有很强的二酰甘油酰基转移酶（DGAT）活性，并可以催化裂解将单酞基甘油（MAG）转化为三酞基甘油（TAG）所需的两个反应[4]。胃癌作为消化道肿瘤与营养代谢密切相关，有研究显示胃癌组织中MOGAT3表达上调[3]。本研究根据GEPIA、Oncomine数据库信息分析MOGAT3 mRNA在胃癌组织中的表达，同时检测135例胃癌术后组织标本，分析MOGAT3蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 GEPIA、Oncomine数 据 库 GEPIA数 据 库（http://gepia.cancer-pku.cn/）和Oncomine数据库（https://www.oncomine.org/）是目前应用较广的生物信息学分析数据库，GEPIA数据库整合TCGA癌症和GTEx正常组织两大数据，通过分析9 736个肿瘤和8 587个正常样本的RNA测序数据，揭示癌症亚型、驱动基因、等位基因、差异表达或致癌因素等，对深入挖掘癌症新型靶点和标记物作用巨大。Oncomine是目前最大的癌基因芯片数据库和整合数据平台，共收集715个基因表达数据集、86 733个癌组织和正常组织数据，癌症突变谱、基因表达及临床信息齐全，整合了GEO、TCGA和已发表文献来源的RNA和DNA-seq数据。通过Oncomine数据库可以分析差异表达和共表达，挖掘癌症基因信息。本研究利用这两大数据库分析MOGAT3 mRNA在胃癌组织中的表达情况。

1.2 胃癌组织来源 随机选取2011年1月—2012年12月如东县人民医院病理科保存的135例胃癌患者手术切除组织的蜡块标本，其中男性97例，女性38例，年龄≤60岁30例，＞60岁105例。随访截至2018年6月，均有完整的临床资料和随访记录，术前未行抗肿瘤治疗。

1.3 组织芯片联合免疫组化检测MOGAT3蛋白表达 取石蜡包埋标本的核心组织，直径约2 mm，排列于新的石蜡块中，切片（厚度4μm），然后脱蜡、水化、抗原修复（约20 min），参照试剂盒说明书，采用免疫组化Envision法检测MOGAT3蛋白。所用一抗为兔抗人MOGAT3抗体（试剂号:NBP1-84299，Novus），1:200稀释。结果判读:由两位经验丰富的病理诊断医师双盲判读，高倍镜下（400×）计数400个细胞，根据染色强度和阳性细胞百分率评分。强度评分标准:无着色0分，黄色（弱阳性）1分，浅棕色（中阳性）2分，棕褐色（强阳性）3分；阳性细胞评分标准:阳性细胞≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分。最终以两者乘积作为标准，0～5分为阴性，≥6分为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0及Graphpad统计学软件对数据进行分析和作图。计量资料以±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差（one-way ANOVA）分析；计数资料以频数和率表示，组间比较采用Pearsonχ2检验；绘制Kaplan-Meier生存曲线，预后分析采用COX回归模型和log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 根据GEPIA、Oncomine数据库信息分析胃癌中MOGAT3 mRNA表达情况 GEPIA数据库分析显示，胃癌组织（n=408）中MOGAT3 mRNA表达高于癌旁正常胃组织（n=211），差异有统计学意义（P＜0.01）（图1A）；Oncomine数据库分析结果也显示，胃癌组织中MOGAT3 mRNA表达高于癌旁正常胃组织，差异有统计学意义（P=0.007）（图1B）。

图1 胃癌组织中MOGAT3 mRNA表达水平增高

2.2 胃癌标本中MOGAT3蛋白表达情况 组织芯片结合免疫组化检测显示，MOGAT3蛋白定位于胃癌细胞胞浆，胃癌组织MOGAT3蛋白表达率为80.0%（108/135），显著高于癌旁组织的表达率31.9%（43/135），差异具有统计学意义（χ2=49.704，P＜0.001）。见图2。

图2 胃癌组织中MOGAT3蛋白表达水平增高

2.3 MOGAT3蛋白表达与临床病理特征的关系 MOGAT3蛋白阳性表达与患者TNM分期、浸润程度、淋巴结转移及术前血CEA水平显著相关（P＜0.05），而与患者性别、年龄、组织类型、分化程度、远处转移及Laurn分型无关（P＞0.05）。见表1。

表1 MOGAT3蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系 例

续表1 MOGAT3蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系 例

2.4 MOGAT3蛋白表达与胃癌预后的关系 Kaplan-Meier生存曲线分析显示，MOGAT3蛋白阳性患者总生存率显著低于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（图3A）。COX回归单因素分析显示，MOGAT3蛋白表达、TNM分期、浸润程度、淋巴结转移、远处转移及术前CEA水平与胃癌患者的预后具有相关性（P＜0.05），而与性别、年龄、组织类型、分化程度及Laurn分型无关（P＞0.05）。多因素分析显示MOGAT3蛋白高表达、TNM高分期、淋巴结转移是胃癌患者预后的独立危险因素。见表2，图3B、3C。

表2 COX回归分析影响胃癌患者预后因素

图3 胃癌患者Kaplan-Meier生存曲线

3 讨 论

胃癌发病与饮食、感染及遗传等因素有关。过多食用腌制食品、高盐、吸烟增加罹患胃癌的风险。幽门螺杆菌及EB病毒感染是胃癌重要致癌因素[5]。胃癌有家族聚集倾向，25%常染色体显性遗传性弥漫性胃癌易感家族存在E-cadherin突变[6]。近年来胃癌治疗不断发展，新的化疗药物和分子靶向药物，如奥沙利铂、赫赛汀等，给中、晚期胃癌患者带来希望，但由于药物毒副作用大，敏感性不佳等原因，患者总体预后较差，5年生存率低[7]。

有学者提出癌症是代谢异常性疾病，诸多研究探索对肿瘤发生发展起关键作用的特定生化代谢途径[8]。脂质具有多种重要的生物学功能，脂质谱系变化及脂代谢异常在癌症发生发展过程中扮演十分重要的作用[9]。随着脂质组学分析在癌症研究中的重要进展，脂代谢异常与癌症关系的研究日益受到关注[10]。MOGAT1基因参与甘油二酯（DG）和甘油三酯（TG）合成，主要表达在胃、肾和脂肪，肠道几乎无表达，而MOGAT2和MOGAT3则在小肠中高表达[11]，有研究显示，在人胃癌中与脂肪消化及吸收代谢通路有关的关键基因中有9个基因表达显著上调（MOGAT3、FABP2、FABP1、APOA4、NPC1L1、PLA2G2A、ABCG5、PLA2G4A、PLA2G12B），2个基因显著下调（LIPF、PLA2G1B）[3]。

本研究通过生物信息学技术分析显示，胃癌组织中MOGAT3 mRNA表达高于癌旁正常胃组织，差异有统计学意义（P＜0.01）。利用组织芯片技术联合免疫组化检测胃癌组织中MOGAT3蛋白表达水平，显示胃癌组织中MOGAT3蛋白表达率为80.0%，显著高于癌旁组织的表达率31.9%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。MOGAT3蛋白阳性表达与患者TNM分期、浸润程度、淋巴结转移及术前血CEA水平显著相关（P＜0.05）。生存曲线分析发现，MOGAT3蛋白阳性患者总生存率显著低于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。COX回归分析显示，MOGAT3蛋白高表达、TNM高分期、淋巴结转移是胃癌患者预后的独立危险因素。提示MOGAT3蛋白可能促进胃癌的发生发展，有助于预测胃癌患者的预后，有望成为胃癌治疗的新靶点。