四种EB 病毒抗体联合检测在鼻咽癌筛查中的价值

邓日辉 刘丽燕 谢伟柯 刘明岭 张桂荣

鼻咽癌为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首，全球约80%的鼻咽癌发生在中国偏南地区和东南亚地区。EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）感染是鼻咽癌发生的重要致病因素，感染后机体可产生多种EBV 抗体如NA1-IgA、EA-IgA、VCA-IgA、Rta-IgG 等。由于鼻咽癌病变早期不易诊断，因此提高EBV 抗体诊断效能,对早期发现诊断鼻咽癌尤为重要。本研究拟检测鼻咽癌患者及健康人血清EBV 抗体，通过比较抗体单项检测与联合检测之间的诊断效能，评价EBV 抗体联合检测对鼻咽癌的筛查价值。

资料与方法

1 一般资料

选取2020 年3 月1 日～2021 年6 月31 日在我院确诊的205 例鼻咽癌患者及同期就诊的108 例健康体检人员血清进行EBV 抗体检测。鼻咽癌组为205 例经病理活检确诊的患者，临床分期根据鼻咽癌UICC/AJCC 第七版分期标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，分别代表从早期到晚期的鼻咽癌分期[1]；病理分类依据2003 年国际病理分型标准[2]。其中临床Ⅰ期75 例，Ⅱ期52 例，Ⅲ期48 例，Ⅳ期30 例，男性132例，女性73 例，平均年龄为（47±9.1）岁；健康对照组为108 例健康体检人群，男性72 例，女性36 例，平均年龄为（45±10.5）岁。各组性别与年龄比均无统计学意义（P＞0.05），资料具有可比性。同时排除严重感染、心肾功能障碍者。

2 实验方法

2.1 试剂

采用ELISA 试剂：EBV 试剂VCA-IgA（安图生物公司，货号：HB02546）、EA-IgA（安图生物公司，货号：HB02260）、IgGRta-IgG（同昕生物公司，货号：AU020752）、NA1-IgA（同昕生物公司，货号：AU 030308）。

2.2 仪器

实验所用Elx50 型洗板机、Elx800 型酶标仪均购自美国Biotek 公司。

2.3 检测方法

酶联免疫吸附实验检测EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA，所有操作严格按照试剂盒的说明书及仪器的操作规定进行操作，结果判定：检测样本吸光度值与校准品值相比较，比值≥1.1 判断为阳性[3]。

3 统计学分析

应用SPSS 20.0 进行数据统计分析，两种并联检测敏感度=敏感度甲+（1-敏感度甲）×敏感度乙，并联检测特异度=特异度甲×特异度乙；两种串联检测敏感度=敏感度甲×敏感度乙，串联检测特异度=特异度甲+（1-特异度甲）×特异度乙，更多项检测联合应用时，其并联检测、串联检测的敏感度和特异度按同理进行计算[4]。鼻咽癌组和健康对照组EBV 抗体阳性率的比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异具有统计学意义；诊断效能比较采用4 种EBV 抗体联合检测分别与其他检测组合进行比较，采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结果

1 鼻咽癌组血清EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 阳性 率分别 为70.73%、41.46%、44.39%、58.05%；对照组阳性率分别为12.96%、8.33%、7.41%、10.19%，鼻咽癌组抗体阳性率显著高于健康对照组（P＜0.01），见表1。其中，EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期的阳性率显著高于鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期的阳性率（P＜0.01），VCA-IgA在Ⅲ期和Ⅳ期阳性率显著高于鼻咽癌Ⅰ期的阳性率（P＜0.01）。鼻咽癌Ⅰ期VCA-IgA 阳性率显著高于EA-IgA、NA1-IgA（P＜0.05）和Rta-IgG（P＜0.01）；鼻咽癌Ⅱ期VCA-IgA 阳性率显著高于EA-IgA、NA1-IgA 和Rta-IgG（P＜0.01），见表2。

表1 两组血清EBV 抗体的阳性率比较（例，%)

表2 EBV 抗体阳性率与鼻咽癌临床分期的相关性比较（例，%)

2 VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 和NA1-IgA

四种抗体并联检测的灵敏度最高，显著高于EBV 抗体单项、任意2 种或3 种抗体并联检测（P＜0.05 或P＜0.01）；特异度显著低于单项检测及任意2种抗体（VCA-IgA 和NA1-IgA 联合检测除外）并联检测（P＜0.05 或P＜0.01）；4 种抗体联合检测阴性预测值显著高于单项抗体检测（P＜0.01），见表3。4 种抗体串联检测的特异度（99.99%）高于并联检测的特异度（66.35%）。见表4。

表3 四种EBV 抗体联合检测与EB 抗体单项、任意2 种或3 种抗体联合检测对鼻咽癌的诊断效能比较（例，%）

表4 四种EBV 抗体的并联检测与串联检测的灵敏度和特异度（例，%）

讨论

鼻咽癌为耳鼻喉科最常见的恶性肿瘤，约占上呼吸道癌的93%[5]，鼻咽癌原发部位较为隐蔽，早期无明显临床症状、恶性程度较高、严重威胁患者的生活质量[6]。大部分成年人感染过EBV，鼻咽部上皮细胞是EBV 长期潜伏增殖场所，机体免疫功能紊乱或下降时，潜伏在上皮组织细胞的EBV 会活化，激活免疫系统产生EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 等抗体[7-9]。

潜伏在细胞核内的EBV 一旦激活可导致相关疾病如鼻咽癌的发生[10，11]。筛查鼻咽癌的有血清学方法、病理检查、CT 扫描及鼻咽镜检查，目前最常用、便捷的筛查方法为EBV 抗体血清学检测。本研究采用ELISA 方法检测鼻咽癌患者血清EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 的阳性率分别为70.73%、41.46%、44.39%、58.05%，健康人阳性率仅为12.96%、8.33%、7.41%、10.19%，鼻咽癌患者4 种EBV 抗体阳性率均显著高于健康人群（P＜0.01），表明这4 种抗体是鼻咽癌筛查的有效指标。在比较鼻咽癌不同临床分期的抗体阳性率时，EAIgA、Rta-IgG、NA1-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期的阳性率显著高于鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期的阳性率（P＜0.01），VCA-IgA 在鼻咽癌Ⅲ期和Ⅳ期阳性率显著高于鼻咽癌Ⅰ期的阳性率（P＜0.01）。表明中晚期鼻咽癌患者血清EBV 抗体的阳性率更高。鼻咽癌Ⅰ期和Ⅱ期患者中，VCA-IgA 的阳性率显著高于EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA（P＜0.05 或P＜0.01）。说明VCA-IgA 可作为鼻咽癌早期筛查的灵敏指标；EA-IgA 和Rta-IgG 对鼻咽癌的灵敏度较低，可能与EA-IgA 抗体在患者血清含量少及放射治疗导致Rta-IgG 水平下降有关[12，13]。

诊断疾病时常采用多项诊断试验检查同一对象，以提升诊断的灵敏度或特异度，这种方式称为联合试验。根据联合的形式，分为串联与并联。并联试验指患者同时接受多项检查时，有阳性结果就会进行后续的诊断。这种方法提高了检测灵敏度，使漏诊率下降，但导致特异度降低。串联试验指做几项试验，全部试验结果均为阳性者才定为阳性。这样提高了检测特异度，却降低了灵敏度[1]。实际工作中我们需权衡诊断试验的目的、费用、复杂程度等多个因素选择适合的试验方式。有研究表明EBV 抗体VCA-IgA 联合NA1-IgA 或EA-IgA 联合检测能提高鼻咽癌的检测效能，是目前常见的联合检测方式，有利于鼻咽癌的早期筛查[12，13]。VCA-IgA、EAIgA、Rta-IgG、NA1-IgA 联合检测的阴性预测值显著高于EBV 抗体单项检测（P＜0.01）。这4 种抗体并联检测时，灵敏度高达96.00%，显著高于单项抗体、任意2 种或3 种EBV 抗体并联检测（P＜0.05 或P＜0.01）；4 种抗体并联检测特异度较差，显著低于单项检测及任意2 种抗体（VCA-IgA 和NA1-IgA 联合检测除外）并联检测（P＜0.05 或P＜0.01），当者4种抗体串联检测时，可提高联合检测的特异度特异度达99.99%。因此，在进行鼻咽癌筛查时，可采用4种抗体并联检测来提高检测灵敏度，降低漏诊率，同时采用4 种抗体串联检测来提高检测特异度，两种联合方式相互补充，提高鼻咽癌的筛查效能。

综上所述，VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 联合检测做到了EBV 抗体全覆盖，筛查更全面，弥补了单一指标检测的不足。鼻咽癌筛查时，可采用4 种抗体并联检测来提高鼻咽癌筛查的灵敏度，降低漏诊率；采用串联检测来提高特异性，为鼻咽癌的筛查提供更高可靠性。