公英翘芦散对靶动物奶牛的安全性试验

潘康锁，侯佳琪，辛怡霖，唐 熙，李青云，张 欣，祁会彩，代德华，李引乾*

(1.陕西省农业检验检测中心，陕西西安 710016；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨陵 712100；3.西安市农业综合执法支队未央大队，陕西西安 710016；4.陕西省动物卫生与屠宰管理站，陕西西安 710016)

靶动物安全性试验是新药研究中至关重要的内容之一，旨在了解动物对受试药物推荐剂量及多倍剂量使用下其临床反应、生理生化指标、病理变化等特征变化，为受试药物临床使用过程中可能出现的不良反应及注意事项提供科学依据。公英翘芦散由蒲公英、连翘、黄芩、当归等12味中药组成，具有清热解毒、消痈下乳、通经活血之功效，临床上常用于奶牛乳房炎的治疗。为进一步评价公英翘芦散在临床使用中的安全性，本试验参照农业部《兽药研究技术指导原则汇编》和《中华人民共和国农业部公告第442号》[1-2]，对治疗奶牛乳房炎的公英翘芦散进行奶牛的靶动物安全性试验，对受试动物给予推荐剂量的1、3、5倍剂量的药物，连续7 d[3]，观察动物给药后14 d内的临床反应及生理生化指标变化，以考察公英翘芦散使用于靶动物奶牛的安全性及安全剂量范围，为进一步临床试验给药方案的制定提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 健康成年奶牛40头，由眉县首善晓峰奶牛场提供。试验期间常规饲养。

1.1.2 试验药品 公英翘芦散，内蒙古华天制药有限公司，批号：191201。

1.1.3 主要试剂 尿素氮(BUN)试剂盒(批号：191201)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(批号：191020)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(批号：191101)、肌酐(SCr)测定试剂盒(批号：190901)、总蛋白(TP)测定试剂盒(批号：191201)、白蛋白(ALB)测定试剂盒(批号：191101)，中生北控生物科技股份有限公司产品。

1.1.4 主要仪器 MTN-81全自动血细胞分析仪，长春曼特诺医疗器械公司产品；BS-210S型电子分析天平，德国赛多利斯Sartorius股份公司产品；QL-901漩涡振荡器，其林贝尔仪器制造公司产品；1-15K低温高速离心机，德国Sigma公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验动物的分组与处理 将试验奶牛分为3个试验组(试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组)和对照组，每组10头。试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组每头奶牛每次分别经胃管灌服“公英翘芦散” 300、900、1 500 g，1日1次，连用7 d。对照组灌服饮用水600 mL，1日1次，连用7 d。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 奶牛生理指标测定 于给药前和给药后对试验动物的精神、食欲及粪尿情况进行观察。粪尿观察主要包括排粪排尿动作、次数及粪尿颜色、气味、黏稠度等异常情况。同时，测量给药前及给药后试验奶牛的呼吸频率、心率及体温。

1.2.2.2 血液学指标检测 试验前试验组和对照组采空白抗凝血各1次；给药后7 d、14 d各采抗凝血1次。用全自动血细胞分析仪检测血液学指标。检测指标主要有：红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)及血红蛋白(HGB)。

1.2.2.3 血液生化指标检测 试验前试验组和对照组采空白血各1次；分别于给药后7 d、14 d采非抗凝血，4 000 r/min在4 ℃条件下离心30 min分离，取未溶血的血清作为测定样本，用于血液生化指标的测定。检测指标主要有：血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)。

2 结果

2.1 公英翘芦散对奶牛生理指标的影响

连续给药14 d后，试验组奶牛未出现精神异常、食欲废止、呕吐、便秘或腹泻等异常反应，排粪排尿次数、排泄物颜色、气味、黏稠度等均正常。由表1可知，各对照组奶牛的呼吸频率、心率、体温在试验前后均未出现明显变化，各组与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。

表1 公英翘芦散对奶牛呼吸频率、心率、体温的影响

2.2 公英翘芦散对奶牛血液学指标的影响

连续给药14 d后，7 d、14 d各组奶牛血液学指标检测结果见表2。由表2可知，各组的血液学指标参数无明显变化，同时间比较，对照组与试验组间的红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)含量差异均不显著(P>0.05)。结果表明，公英翘芦散对受试奶牛的血液学指标无不良影响

表2 公英翘芦散对奶牛血液学指标的影响

2.3 公英翘芦散对奶牛血液生化指标的影响

由表3可知，连续给药14 d后，奶牛血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)活性与给药前相比均无显著变化(P>0.05)，试验组与对照组相比较，各血液生化指标活性差异不显著(P>0.05)。表明公英翘芦散对靶动物的肝、肾功能及物质代谢无不良影响。

表3 公英翘芦散对奶牛血液生化指标的影响

3 讨论

近年来，随着抗生素长期使用不当带来的耐药性、菌群失调、不良反应、药物残留等问题的叠出及一系列限制抗生素使用的政策出台，中兽药以其副作用少、药性温和、来源广泛、不易产生耐药性及残留问题而得到广泛关注。此外，中兽药还具有抗病毒、抗菌抑菌、抗应激、抗氧化、调节免疫力等多种优势[4]，具有良好的发展前景。公英翘芦散是由蒲公英、连翘、黄芩等12味中药组成，其中，蒲公英味甘，平，无毒，《本草纲目》中记载其可化热毒，消恶肿，研究发现，蒲公英具有抑菌、抗氧化、抗炎[5]等多种药理作用，且安全性较高，制成药物的副作用小[6]。张城达等[7]研究表明，3.8 g/kg复方蒲公英制剂对幼龄大鼠无明显毒性，安全性良好。连翘味苦，性微寒，主寒热、主治痈肿、恶疮，具有良好的抗炎作用[8-10]，连翘果实水提物对大鼠的急性毒性和基因毒性的研究表明，连翘对其均是安全的，可证明连翘作为药物开发的安全性[11]。黄芩具有清热燥湿、泻火解毒的功效[12]，临床上常用于治疗各类炎症相关性疾病，研究表明，单次口服黄芪水提取物2 000 mg/kg的剂量范围内，小鼠无任何临床体征及病理异常，证明其有一定的安全性，可用作临床治疗[13]。

靶动物安全性试验是确定药物能否投入临床使用的重要指标之一，同时，可为临床制定用药方案提供重要依据。本研究结合前期试验，设置1、3、5倍推荐剂量组及对照组，连续7 d给药，评价公英翘芦散对靶动物奶牛的安全性。在奶牛灌服公英翘芦散后，经对奶牛神经意识、行为、饮食、排粪等进行观察并对奶牛体温、呼吸频率、心率进行测定，奶牛无异常临床表现，健康状况良好，用药前后体温、呼吸频率、心率均无显著性变化(P>0.05)，表明公英翘芦散对奶牛临床体征无不良影响。而血液学参数是反应动物机体是否健康的重要指标，若红细胞(RBC)、白细胞(WBC)等出现数量或形态变化，则提示药物存在毒性，血红蛋白(HGB)含量可指示血液运输氧气的能力，该些指标在正常范围内，可表明动物机体机能处于正常状态，本试验中，给药7 d与14 d后血常规指标均在正常参考值范围内，与用药前指标对比无显著性差异(P>0.05)，表明公英翘芦散在推荐剂量的5倍剂量内，对奶牛的血常规指标无不良影响。血液生化指标中，血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)是评价肝脏功能的重要标志，尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)是评价肾脏功能的重要指标，若出现异常，可反映机体肝脏、肾脏及总体代谢功能的异常[14]。本试验中，用药后靶动物奶牛血液生化指标变化均处于参考值正常范围内，与用药前血液生化指标对比无显著性差异(P>0.05)，表明公英翘芦散对奶牛的肝、肾功能及机体物质代谢能力无不良影响。说明公英翘芦散的安全性高，可用于奶牛乳房炎的治疗。