全自动化学发光分析仪检测孕酮和人绒毛膜促性腺激素的性能验证

黄晓楠，刘玉林

（遂宁市中心医院检验科，四川 遂宁 629000）

孕酮（PROG）和人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）是目前临床应用最广泛的激素检测项目，在妇产科等科室得到广泛的应用。其检测方法不断变迁，从放射免疫测定法到酶联免疫测定法再到化学发光免疫测定法。雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪采用了化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）定量测定人血清的激素水平。依据ISO 15189:2012《医学实验室质量和能力认可准则》[1]和《医疗机构临床实验室管理办法》[2]，雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪在用于检测项目前，须对其性能进行验证，确保其能够满足临床需求，保证检验质量。本研究参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）颁布的EP 系列文件及CNAS-GL037《临床化学定量检验程序性性能验证指南》[3]对i2000SR 全自动化学发光免疫分析仪上检测的PROG 和β-hCG 的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围进行验证和评价，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2021 年4 月1 日-30 日到遂宁市中心医院进行健康体检人员的外观正常的新鲜血清，-20 ℃保存备用。

1.2 仪器与试剂 雅培i2000SR 全自动化学发光免疫分析仪；孕酮测定试剂盒（批号21450UI01）；人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒（批号19561UI01）。

1.3 校准品 美国雅培公司的原装校准品：孕酮校准品（批号20003UI01）；人绒毛膜促性腺激素校准品（批号20306UI01）。

1.4 质控品 美国伯乐公司的免疫分析质控品：水平1（批号40381），水平2（批号40382）；卫生部临床检验中心2021 年第一次内分泌室间质量评价质控品5 份（样本编号202111、202112、202113、202114、202115）。

1.5 方法

1.5.1 精密度验证 选取2 个不同浓度的样本，其中1 个样本被测浓度水平在医学决定水平左右或参考区间左右，每天测定1 次，每次重复测定4 次，连续测定5 d，分别计算总均值、批内标准差及实验室内标准差（中间）；根据厂家要求的标准差、有效自由度及C 值计算得到验证值（V），如测量的批内标准差、实验室内标准差（中间）小于或等于验证值，则验证合格。

1.5.2 正确度验证 参考CLSI EP15-A2 文件[4]，用20个血清标本（高中低值，包含医学决定水平）或5 个室间质评样本与通过ISO15189 认证的检验机构进行比对试验。≥80%的标本偏移＜1/2 总允许误差（TEA），其中包含医学决定水平，则认为正确度验证通过。

1.5.3 线性范围的验证 参考CLSI EP6-A 文件[5]，选择高值样本（浓度接近厂家说明书标示的高限值）和低值样本进行验证。将高值样本按0、0.2、0.4、0.6、0.8、1 稀释度稀释，每个浓度测定2 次。做线性回归分析，得出实测值与理论值的线性关系Y＝aX+b，计算相关系数（R2），得到的线性范围并与厂家声称的进行比较。

1.5.4 临床可报告范围的验证 选取已知浓度在分析测量范围内的高值样本1 份（接近测量范围上限），用厂家推荐的稀释液按照厂家推荐的稀释倍数对该样本进行稀释，之后将样本及稀释样本重复测定2 次，计算平均值。以样品原倍结果平均值作为理论浓度，将样品进行稀释后得出的结果的均值为还原浓度,再计算还原浓度与理论浓度的偏差，偏差小于或等于该项目TEA 时的最大稀释倍数则为该项目的最大稀释倍数。可报告范围高限则采用线性区间高限与最大稀释倍数的乘积，低限采用线性范围低限。

1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0 和Excel 2018 对数据进行处理和分析。计量资料以（）表示，行t检验；计数资料以（%）表示，行X2检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度结果 PROG 和β-hCG 的批内标准差和实验室内标准差均小于验证值，验证通过，见表1。

表1 PROG 和β-hCG 的精密度结果

2.2 正确度结果 PROG 和β-hCG 偏倚均小于1/2 TEA，验证通过，见表2、表3。

表2 β-hCG 正确度结果

2.3 线性范围结果 验证项目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范围内，R2＞0.99，且测定的线性范围在厂家声称的范围内，验证通过，图1、表4、表5、图2。

图2 PROG 线性回归

表4 β-hCG 线性范围验证

表5 PROG 线性范围验证

图1 β-hCG 线性回归

2.4 临床可报告范围 PROG 的临床可报告范围是0.1～389.3 nmol/L，β-hCG 的临床可报告范围是2.46～206 597.1 mIU/ml，见表6。

表6 PROG 和β-hCG 的临床可报告范围

3 讨论

依据ISO15189 相关要求，参考美国临床实验室标准协会（CLSI）的系列文件和标准建立性能验证方案[5-7]，检测仪器在应用于临床前需要对其检测的检验项目进行性能验证，以保证其质量并满足临床需求。验证内容包括但不局限于精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围等。雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪采用微粒子化学发光原理定量检测标本，与传统方法相比检测速度快、灵敏度高、操作简单、故障率低[8]等特点，检测血清标志物的性能验证已有相关报道[9-12]，结果均符合厂家声明。但厂家给出的性能验证及指标参数仅代表厂家的实验指标，本实验室的检测环境，如温湿度，实验用水及仪器状态等与厂家并非完全一致，故使用前须进行性能验证[13]。

精密度是重复测定值之间的一致性，是检测系统的基本分析性能指标之一，可反映检测系统的随机误差[14，15]。本研究显示，雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪检测PROG 和β-hCG 的批内CV 和批间CV 均低于验证值，符合厂家声明，满足临床需求，说明该仪器检测的重复性好。有研究证实[16]，雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪性能稳定。正确度是大批检验结果的均值与真值的一致程度，正确度验证是与通过了ISO15189 的临床试验进行比较。本研究选用自留标本和卫生部质控样本进行测定，结果偏倚均小于12.5%，符合厂家声明，与杨佳[17]的结论一致。线性范围指测定值与稀释倍数呈线性关系的范围，采用线性稀释回收法[9]，保证样本的检测结果在线性范围内准确可靠。本次试验结果显示，验证项目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范围内，R2＞0.99，且测定的线性范围在厂家声称的范围内，说明实测值与理论值具有良好的相关性，结果符合要求。黄学强等[18]也证明β-hCG 结果在线性范围内可靠。本次验证通过稀释的方法对临床可报告范围进行测定，结果显示PROG 的临床可报告范围为0.1～389.3 nmol/L；另外，β-hCG 的临床可报告范围在2.46～206 597.1 mIU/ml，与曾令恒等[19]报道的2.6～199000 mIU/ml 基本一致，证明雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪的检测能力符合要求。

综上所述，雅培i2000SR 全自动化学发光分析仪检测PROG 和β-hCG 的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围符合ISO15189 要求并与厂家声明一致，可满足临床需求。