SIRT1/p66Shc介导小檗碱对阿霉素诱导心肌毒性拮抗作用研究

武彦昭， 张兰， 武子笑， 单菊彤， 时萍， 刘妍， 杨菲， 熊晨

（1.河北医科大学第四医院耳鼻咽喉及头颈外科，河北石家庄 050011；2.承德医学院基础医学院，河北承德 067000；3.河北医科大学药理教研室，河北石家庄 050017）

蒽环类药物阿霉素（doxorubicin，DOX）是临床常用的抗恶性肿瘤的药物，具有抗瘤谱广、抗瘤活性强的特点，常被用来治疗急性白血病、淋巴瘤、骨肿瘤、乳腺癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤[1]。然而，DOX 在发挥抗肿瘤作用的同时，由于其对心肌组织的亲和力明显高于其他组织，使DOX 容易蓄积于心肌细胞中，对心肌产生毒副作用，最终导致扩张性心肌病和充血性心力衰竭，故限制了其在临床上的应用[2-4]。因此，迫切需要既预防DOX 诱导的心脏毒性，又不能以降低其抗肿瘤作用为代价的有效药物。

引起DOX 心脏毒性的病理生理机制是多方面的，其中，越来越多的证据表明，过量产生的活性氧簇（ROS）和氧化剂诱导的线粒体损伤是DOX心脏毒性作用的重要因素[2，5]。因此，使用抗氧化剂是保护心肌细胞免受DOX 诱导氧化损伤和心脏毒性的重要策略。尽管从理论上讲，针对氧化应激是合乎逻辑的，但当前大多数策略均无法取得满意的心肌保护效果[6-7]。这些研究结果提示其他机制可能涉及DOX 引起的心脏毒性。显然，DOX的心脏毒性并非归因于单一靶标，而是涉及多条蛋白信号途径。有研究发现，p66Shc 在DOX 引起的心肌细胞毒性机制中扮演着重要的角色[8]，但其基本机制尚未完全阐明。p66Shc 是一种新发现的细胞内关键介质，诱导氧化应激生成过量ROS，参与促进线粒体氧化应激信号诱导细胞凋亡[9-10]。有研究发现，p66Shc 基因敲除啮齿动物的寿命大约延长30%，且对氧化应激和氧化应激依赖性病理有显著的抵抗力[11-13]。亦有研究表明，在DOX诱导的心脏毒性中，p66Shc 的表达明显上调[9，14]。故选择性抑制p66Shc 通路是一种很有前途的对抗DOX 心脏毒性的方法。迄今为止，尚无p66Shc 蛋白的特异性药物抑制剂。沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）是一种氧化应激负调节因子，其功能与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的Ⅲ类组蛋白脱乙酰化酶（HDAC）相同[15-16]。已有研究表明，p66Shc 确是SIRT1 的靶标，其表达可以通过SIRT1 上调至少部分减少[17-18]，而SIRT1 基因的敲除增强了p66Shc的表达[19]。基于此，我们认为SIRT1介导的p66Shc 抑制可能参与了DOX 诱导的心脏毒性，但SIRT1/p66Shc 通路的确切作用仍然存在争议。

小檗碱（berberine，Ber）是一种异喹啉类生物碱，为中药黄连的主要成分，现被作为广谱抗菌素用于胃肠炎、细菌性痢疾等疾病的治疗。越来越多的临床试验研究表明，Ber对代谢症候群和心血管疾病具有很好的治疗作用[20-22]。研究发现，Ber 还有抗肿瘤和心脏保护的作用[23-24]。DOX 联合Ber应用不仅可增强DOX抗肿瘤作用[25]，还可降低DOX引起的急性心肌损伤[26]，但Ber保护心肌的确切机制目前仍不清楚。值得关注的是，研究报道Ber 可能通过激活SIRT1 信号通路在各种病理条件下产生保护作用[27-28]。然而，SIRT1 信号通路是否参与Ber在DOX诱导的心功能障碍中的保护作用及其机制尚不清楚。因此，本研究构建DOX 损伤AC16 心肌细胞模型，重点探讨Ber 能否通过抗氧化作用及线粒体保护作用从而保护心肌细胞对抗DOX 心肌毒性，明确SIRT1/p66Shc 通路是否参与DOX诱导的心肌细胞毒性，明确Ber的保护作用是否主要与SITT1/p66Shc 通路的调节有关，以期为深入阐明Ber 的心肌保护作用提供新的实验依据，现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 药物、试剂与仪器小檗碱、阿霉素（美国Sigma Aldrich 公司）。p66Shc、β-actin 和SIRT1 等抗体（美国圣克鲁斯生物技术公司）；锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）及Bax 抗体（美国Abcam 公司）；荧光染料Rh123、Rhod 2-AM 和EX527（美国Sigma Aldrich 公司）；其他化工产品购自天津北方天医化学试剂厂。SpectraMax 190 微量滴定读板器（美国Molecular Device 公司）；Lasersharp MRA2 激光共聚焦显微镜（美国Bio-Rad公司）。

1.2 细胞来源、培养与处理方法人心肌细胞系AC16来源于中国科学院（上海）。以DMEM 培养基（加入1.5 g/L碳酸氢钠、10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素），在37 ℃、5%CO2的加湿环境中培养。取80%融合生长、状态良好的对数生长期AC16 细胞，用胰酶消化制成单细胞悬液，以5 × 104个/mL 细胞密度接种于96 孔板中，每孔接种100 μL。预处理按如下步骤实施：①DOX对AC16 细胞的毒性作用：先用PBS 清洗2 次，换用无胎牛血清培养基，并加入不同浓度的DOX（0.1、0.5、1、5、10 μmol/L）作用24 h。②观察不同浓度Ber 对DOX 损伤心肌作用的影响：采用0.1、1、10 μmol/L 浓度的Ber处理AC16细胞24 h，再用1 μmol/L 的DOX 处理24 h，建立细胞损伤模型。③观察应用EX527预处理1 h对DOX损伤心肌作用的影响：在Ber 处理前1 h，用10 μmol/L EX527（SIRT 抑制剂）对细胞进行预处理，接着给予1 μmol/L DOX 作用24 h。对照组加入相同体积的相应溶剂。

1.3 四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力将细胞（1×105个/mL）接种于96孔培养板中，待细胞生长至80%融合后，按照上述“1.2”项进行分组处理。处理后，每孔加入10 μL MTT染料（5 mg/mL），继续培养4 h。然后将培养基丢弃，将150 μL二甲基亚砜（DMSO）加入到各孔中，摇床震荡15 min。待结晶物充分溶解后，使用微量滴定读板器于490 nm波长处测量吸光度（OD值）。空白对照组的细胞存活率视作100%，给药处理组的细胞存活率=给药处理组OD值/对照组OD值×100%。

1.4 细胞内ROS水平的测定取对数生长期80%～90%融合生成状态良好的AC16 细胞消化后配制成细胞悬液，点在圆形盖玻片上，每孔接种100 μL，37 ℃、5%CO2及饱和湿度下孵育4 h 后，每孔加入100 μL培养基，孵育过夜。加入1 μmol/L Ber处理30 min后分别加入1 μmol/L DOX和10 μmol/L EX527进行分组：对照组、DOX 组、Ber+DOX 组、Ber+DOX+EX527 组。置于培养箱中培养24 h。采用PBS 清洗2 次，将ROS 特异性荧光探针二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）稀释成1 μmol/L，染色30 min，激光共聚焦显微镜FITC 模式下检测细胞荧光强度。

1. 5蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞p66Shc、SIRT1、Mn-SOD、Bax的蛋白表达各实验组AC16细胞给予不同的处理因素后，先用预冷的PBS 洗2 遍，裂解取上清，采用二喹啉甲酸（BCA）法进行蛋白定量。从每个样品中分离出等量的蛋白质（50 μg），经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后，转移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。用5%脱脂奶粉（50 mm Tris-HCl，150 mm NaCl，0.1% Tween，pH 7.4）室温封闭1 h 后，分别加入p66Shc 抗体（1∶200 稀释）、SIRT1 抗体（1∶200 稀释），Mn-SOD 抗体（1∶1 000稀释）及Bax 抗体（1∶1 000 稀释），4 ℃过夜，采用TBST 洗3 次，10 min/次。然后加入相应二抗（1∶2 000 稀释），37 ℃孵育1 h，TBST 洗3 次，10 min/次。将PVDF 膜用电化学发光试剂（ECL）显色，暗室曝光到X 线片上，凝胶成像系统扫描分析结果。

1.6 线粒体膜电位（MMP）及线粒体内钙（[Ca2+]m）的测定当AC16细胞生长到约80%融合时，根据实验需要给予不同的条件培养基。用DOX和Ber处理结束后，用PBS 洗2 次，在含有100 μg/L Rh123的无血清培养基中37 ℃孵育30 min。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料，对细胞膜具有通透性，可选择性地富集在线粒体上。细胞处于存活状态时，Rh123通过细胞膜，积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时，线粒体膜的转运能力下降，电负性降低，细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失，荧光强度降低[8]。据此可检测MMP的变化以反映细胞的凋亡情况。激光共聚焦显微镜FITC模式下检测细胞荧光强度，通过图像分析系统进行定量分析。

用荧光染料Rhod 2-AM（分子探针）测定线粒体Ca2+浓度（[Ca2+]m）。将AC16 培养物转移至含有10 μmol/L Rhod-2 AM 的1 mL 新鲜DMEM 中，于4 ℃培养120 min，然后于37 ℃培养30 min。然后，将Rhod-2 AM 负载细胞置于共焦显微镜台上，通过510 nm 和570 nm 带通势垒滤光片对[Ca2+]m进行荧光分析，最后选择10 000 个细胞的中位荧光强度计算[Ca2+]m。

1.7 统计方法采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，所有数值均以均数±标准差（±s）表示，独立样本和2 组数据间的比较均采用双侧t检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ber对DOX降低心肌细胞存活率的影响为了检测不同浓度DOX和Ber处理后的细胞活性，采用MTT比色法测定细胞存活率。AC16细胞暴露于不同浓度（0.1、0.5、1、5、10 μmol/L）的DOX 12、24、48 h 后，结果显示，随着时间及浓度的增加，细胞存活率显著下降，至24 h 作用更为明显，一直持续到48 h。具体结果见表1。结果表明，DOX对AC16细胞具有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性。由于在24 h时DOX对AC16细胞已经产生了明显的抑制作用，考虑细胞生长代谢的影响，本研究将给药时间确定为24 h。进一步检测DOX 孵育24 h 使AC16 细胞存活率下降50%的浓度为1.07 μmol/L，故在后续实验中均用1 μmol/L 建立DOX AC16细胞损伤模型。

表1 阿霉素（DOX）对AC16细胞存活率的影响Table 1 Effect of DOX on the survival rate of AC16 cells （±s，%）

表1 阿霉素（DOX）对AC16细胞存活率的影响Table 1 Effect of DOX on the survival rate of AC16 cells （±s，%）

①P＜0.01，与对照组比较

组别对照组0.1 μmol/L DOX 0.5 μmol/LDOX 1 μmol/LDOX 5 μmol/L DOX 10 μmol/L DOX 48 h 0.45±0.09 0.32±0.07①0.30±0.04①0.27±0.05①0.19±0.03①0.12±0.04①12 h 0.51±0.06 0.48±0.05 0.43±0.08 0.40±0.06①0.39±0.03①0.34±0.05①24 h 0.38±0.07 0.41±0.04 0.38±0.01 0.26±0.02①0.23±0.01①0.18±0.05①

本研究利用心肌细胞AC16 作为模式细胞株，在用1 μmol/L DOX处理AC16心肌细胞前，应用不同浓度（0.1、1、10 μmol/L）的Ber 分别预处理24 h，并对细胞活性进行评价。结果显示：0.1、1、10 μmol/L Ber 对AC16 细胞存活率均无明显影响（P＞0.05），但0.1、1、10 μmol/L Ber 预处理皆能明显提高DOX 致AC16 细胞存活率的下调（P＜0.01），并且呈剂量依赖性。具体结果见表2。表明Ber可减轻DOX对AC16细胞的损伤。0.1、1 μmol/L Ber与DOX处理的细胞比较，细胞存活率分别提高了25%、41%，而高浓度的Ber（10 μmol/L）对细胞活力的提高无明显优势。因此，在后续实验中我们选择1 μmol/L剂量的Ber对抗DOX产生的毒性进行体外实验。

表2 小檗碱（Ber）对阿霉素（DOX）降低AC16细胞存活率的影响Table 2 Effect of Ber on the reduction of AC16 cell survival by DOX （±s）

表2 小檗碱（Ber）对阿霉素（DOX）降低AC16细胞存活率的影响Table 2 Effect of Ber on the reduction of AC16 cell survival by DOX （±s）

①P＜0.01，与对照组比较；②P＜0.05，③P＜0.01，与DOX组比较

细胞存活率/%0.41±0.07 0.40±0.09 0.39±0.09 0.42±0.08 0.24±0.05①0.28±0.03②0.36±0.05③0.38±0.06③组别对照组Ber 0.1 μmol/L组Ber 1 μmol/L组Ber 10 μmol/L组DOX 1 μmol/L组Ber 0.1 μmol/L+DOX 1 μmol/L组Ber 1 μmol/L+DOX 1 μmol/L组Ber 10 μmol/L+DOX 1 μmol/L组

2. 2 SIRT1参与Ber对DOX引起的心肌细胞内ROS水平升高的影响采用浓度为1 μmol/L 的Ber预处理AC16细胞24 h、继用1 μmol/L的DOX进行处理24 h 后，对心肌细胞ROS 水平进行定量评价。激光共聚焦结果显示，将对照组的ROS 水平设为100%，用1 μmol/L DOX处理24 h后，荧光比值为（218.7 ± 16.9）%，相比于对照组ROS 的水平出现显著性的升高（P＜0.01），提示DOX致心肌细胞氧自由基增多。而用1 μmol/L Ber 预处理24 h、继用1 μmol/L DOX 处理24 h 后，心肌细胞ROS 的水平降至（168.25 ± 11.44）%，相比于DOX 处理组出现显著性的降低（P＜0.01），提示Ber 预处理能够降低由DOX 引起的心肌细胞氧自由基增加的现象。然而，在细胞暴露于Ber+DOX 之前1 h 加入SIRT1 抑制剂EX527 可逆转Ber 降低ROS 的作用（P＜0.01）。具体结果见图1。

图1 小檗碱（Ber）对阿霉素（DOX）诱导后的AC16细胞内活性氧簇（ROS）含量升高的影响Figure 1 Effect of Ber on elevated ROS content in AC16 cells after DOX induction

2. 3 Ber干 预 对DOX致AC16心 肌 细胞SIRT1和p66Shc蛋白表达的影响为了验证p66Shc 下调和SIRT1激活与Ber干预的拮抗DOX心毒性有关的假说，我们测定了在Ber作用下的SIRT1和p66Shc蛋白表达变化。Western Blot 分析结果显示，1 μmol/L DOX 处理的AC16 细胞中p66Shc 蛋白表达明显增加（P＜0.01），而SIRT1 表达明显减少（P＜0.01）。与此相反，Ber 增强了SIRT1 的蛋白表达，但明显抑制了p66Shc 的蛋白表达。我们假设Ber 在DOX诱导的心脏毒性中的拮抗作用可能与SIRT1介导的p66Shc 表达抑制有关。为了进一步验证上述假说，我们在24 h 1 μmol/L DOX 处理前，用SIRT1抑制剂EX527 预处理AC16 细胞1 h，结果显示，与SIRT1 负性调节p66Shc 表达的观察结果一致。这进一步表明，与Ber + DOX 组比较，预先加用SIRT1抑制剂EX527预处理AC16细胞组中，Ber上调SIRT1 及下调p66Shc 表达的效应显著减弱（P＜0.01），提示Ber通过激活SIRT1参与调控p66Shc的表达。具体结果见图2。

图2 小檗碱（Ber）干预对阿霉素（DOX）诱导AC16心肌细胞SIRT1和p66Shc蛋白表达的影响Figure 2 Effect of Ber intervention on SIRT1 and p66Shc protein expression in AC16 cardiomyocytes induced by DOX

2.4 SIRT1激活对DOX诱导心肌细胞线粒体损伤的影响线粒体在维持Ca2+稳态中起着重要作用，是DOX 对心肌细胞毒性的靶细胞器。线粒体内外膜的电位差称为线粒体膜电位（MMP），MMP 是控制线粒体基质、细胞呼吸和ATP合成中Ca2+积累的重要参数。为明确DOX 对心肌细胞线粒体是否造成损伤，我们用DOX 作用于AC16 细胞，采用Rh123 染色法测定给药后24 h MMP 的变化情况。为了进一步研究SIRT1 对p66Shc 的抑制是否能够防止DOX诱导的线粒体损伤，Ber的保护作用是否参与了这一途径，本研究观察了给予1 μmol/L DOX 后心肌细胞内Rh123 荧光强度的相应变化。共聚焦图像结果（见图3-A）显示，1 μmol/L DOX处理AC16细胞24 h可使MMP明显降低，但1 μmol/L Ber 预处理1 h 能明显地减轻DOX 对线粒体的损伤作用，使MMP 升高（P＜0.01），减弱了DOX 诱导的Rh123荧光强度的降低。而EX725抑制了Ber对DOX 致线粒体损伤的修复作用。这些结果表明，Ber 阻止了DOX 诱导的MMP 的丢失，这可能与SIRT1 的激活有关。因线粒体Ca2+超载导致线粒体功能障碍，我们观察了Ber是否能够减弱由DOX治疗引起的[Ca2+]m水平的增加。采用Rhod2-AM 荧光探针法检测评价[Ca2+]m的处理特性，[Ca2+]m也有类似的结果，DOX组心肌细胞[Ca2+]m较对照组显著增加，而Ber 明显抑制DOX 诱导的[Ca2+]m的增加，如图3-B所示。相反，这些改变可以通过SIRT1抑制剂EX527逆转。结果表明，Ber治疗显著地阻止了DOX诱导的心肌细胞MMP和[Ca2+]m异常。

图3 小檗碱（Ber）对阿霉素（DOX）诱导后的AC16细胞线粒体损伤的影响Figure 3 Effect of Ber on mitochondrial damage in AC16 cells after DOX induction

2. 5 SIRT1抑制剂干预对Ber减轻DOX所致心肌细胞氧化损伤及凋亡的影响为进一步探讨SIRT1/p66Shc通路在Ber修复DOX所致心肌细胞损伤中的作用，利用心肌细胞AC16 观察了Ber 对心肌细胞氧化应激相关蛋白质（如超氧化物清除剂Mn-SOD）以及凋亡相关因子（如Bax）的影响。Western Blot 分析结果显示，与对照组比较，DOX处理后Mn-SOD 蛋白表达明显降低（P＜0.01），而Ber + DOX 处理后Mn-SOD 表达明显升高（P＜0.01）。表明Ber可能通过上调Mn-SOD蛋白表达而提高Mn-SOD的活性，提示Ber预处理能够降低心肌细胞氧化水平。用浓度为1 μmol/L的Ber预处理24 h 后，再用1 μmol/L 的DOX 进行处理24 h，对心肌细胞凋亡蛋白Bax 进行Western Blot 检测，结果显示，对照组心肌细胞凋亡蛋白Bax几乎不表达，表明心肌细胞内无明显细胞凋亡事件。用1 μmol/L DOX处理24 h后，心肌细胞凋亡蛋白Bax的表达水平出现显著升高，提示DOX 处理导致心肌细胞发生凋亡，细胞内凋亡相关通路被激活，凋亡蛋白大量表达。而在用1 μmol/L Ber 预处理24 h，再以1 μmol/L DOX处理24 h，心肌细胞凋亡蛋白Bax的表达水平出现明显的降低，提示Ber预处理能够减少心肌细胞凋亡。结果表明，Ber 预处理可抑制DOX诱导的AC16细胞氧化应激和凋亡。为了阐明Ber 的抗氧化和抗凋亡活性与SIRT1 的关系，以及SIRT1在Ber拮抗DOX诱导心脏毒性中所发挥的作用，本研究进一步观察了SIRT1 特异性抑制剂（EX527）是否对Ber 的保护作用有影响。结果发现，用特异性SIRT1 抑制剂EX725 对AC16 细胞进行预处理，可部分逆转Ber对DOX诱导的心脏毒性的拮抗作用，表现为EX527 预处理可消除Ber 对Mn-SOD 及Bax 表达的影响。结果表明，Ber 对DOX 诱导心脏毒性的拮抗作用可部分通过SIRT1的活化来发挥作用，进一步证实了Ber降低DOX诱导的心脏毒性的氧化损伤及凋亡的效应与SIRT1/p66Shc通路相关。具体结果见图4。

图4 SIRT1参与小檗碱（Ber）对阿霉素（DOX）诱导的AC16细胞氧化应激和凋亡的拮抗作用Figure 4 The protective effect of SIRT1 involved in Ber on oxidative stress and apoptosis of DOX-induced AC16 cells

3 讨论

阿霉素（DOX）致心脏毒性机制尚未完全了解，主要与氧自由基损伤、钙超载、线粒体损伤、细胞凋亡等有关[29-30]。由于DOX在临床肿瘤治疗中的重要作用，研究和寻找既能减轻其心脏毒性，又能保持其抗肿瘤活性的药物具有重要意义。值得关注的是，有研究表明DOX激活了p66Shc通路，导致蛋白质转移到线粒体部分，进一步产生局部氧化应激[8]，这可能有助于揭示DOX引起心脏毒性的新机制。故推测，p66Shc 下调可能阻碍DOX诱导的心脏毒性发展。

研究表明，在各种病理条件和疾病状态下，p66Shc 作为一种氧化应激传感器，通过其氧化还原酶活性和线粒体通透性转换孔的开放，转移到线粒体膜上，增加ROS 的生成，从而导致器官功能障碍[31]。本研究结果证实，p66Shc蛋白表达水平在DOX诱导的AC16心肌细胞损伤的模型中显著增高，这提示p66Shc 在DOX 引起的心脏毒性中起重要作用，有望成为治疗干预候选药物作用的靶点。而p66Shc 信号通路是一个复杂的过程，目前还没有特异的p66Shc 抑制剂。但越来越多的实验和基于种群的证据表明，SIRT1是一个Ⅲ类组蛋白脱乙酰酶，通过表观遗传染色质修饰负面调节p66Shc表达[18]。激活的SIRT1有助于细胞对氧化应激产生抵抗[32-34]。基于这些发现，我们假设p66Shc可能是SIRT1 在DOX 诱导的心脏毒性中的作用靶点。本研究中，Western Blot结果显示，DOX诱导后心肌SIRT1 蛋白表达明显降低，p66Shc 明显升高，Ber干预可逆转这一趋势。另外，体外实验进一步证明，EX527作为SIRT1的特异性抑制剂，可以减弱小檗碱（Ber）对AC16 细胞经DOX 处理后p66Shc 表达的抑制作用。与此同时，Ber 可改善DOX 引起线粒体Ca2+超负荷及导致线粒体膜去极化，且这种作用可被EX527 所逆转。总之，这些数据表明Ber介导的p66Shc抑制至少部分通过激活SIRT1 的表达发生，提示Ber 可能是一个潜在的SIRT1激活剂，并可能通过SIRT1上调来拮抗DOX诱导的心脏毒性。这一发现与文献研究[35]结果相一致，即SIRT1对多巴胺诱导的线粒体生物合成障碍和心肌细胞毒性具有阻抑作用。SIRT1对p66Shc表达的调节可能是由于SIRT1 降低乙酰化组蛋白H3与p66Shc 启动子区结合并抑制p66Shc 活性[33]。提示SIRT1/p66Shc 是预防DOX 心脏毒性的关键治疗靶点，SIRT1/p66Shc通路的激活参与了Ber抗DOX心脏毒性作用。虽然本研究结果表明Ber可以减轻DOX 引起的心肌细胞毒性，但是否同样在体内有效及其具体上下游信号通路仍不清楚，有待下一步深入的研究。

综上所述，Ber预处理可以减轻DOX引起的心肌氧化应激和线粒体功能障碍，从而发挥对DOX诱导的心脏毒性的治疗作用，其治疗机制与SIRT1介导的p66Shc 抑制有关，提示该途径是减轻DOX心肌毒性的一个新的潜在治疗靶点。