中医药调控LncRNA防治类风湿关节炎的研究进展

吴丽丽 邱志伟 李莹莹 张宇轩 郑志煌 付长龙

【摘 要】 中药复方以及中药单体可调控类风湿关节炎相关长链非编码RNA（LncRNA）分子的表达水平，进而延缓类风湿关节炎疾病进程。基于中医药辨证论治，从祛风通络、温经散寒、健脾除湿、补益肝肾角度，探讨中药复方以及中药单体调节关联LncRNA治疗类风湿关节炎的分子作用机制，为中医药防治类风湿关节炎提供新的途径与方法。

【关键词】 类风湿关节炎;中医药;LncRNA;作用机制;研究进展;综述

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性关节滑膜炎症性疾病，常伴有炎症细胞的浸润、软骨和骨组织的破坏等[1-2]。随着社会老龄化的发展，RA患者越来越多，我国RA的发病率约为0.4%，总患病人数约达500万[3]。RA属中医学“痹证”范畴，《素问·痹论篇》有言：“风寒湿三气杂至，合而为痹也。其风气胜者为行痹，寒气胜者为痛痹，湿气胜者为着痹。”故中医药主要通过祛风通络、温经散寒、健脾除湿、补益肝肾等法治疗RA[4]。随着网络药理学和生物信息学的发展，现代中医主要通过中药复方和中药单体治疗疾病[5]。中药复方是指由一味以上的药物组成，在中医理论指导下，与“证”相结合，分为“君、臣、佐、使”，配伍力求药味精简、疗效显著的药方，近年多用药理学方法阐述复方作用的原理，但因成分复杂，研究难度颇大[6-7]。中药单体是从中药中提取的具有确切疗效的化合物，具有靶向清晰、目标精准、机制易明的特点[8-9]。

基因表达与调控网络的失调是RA形成的关键因素之一[10]。LncRNA是长度 ﹥200个核苷酸的非编码RNA，是近年来的热门研究点[11]。随着现代基因组学、生物信息学的发展及相关检测技术的逐渐成熟，大量研究表明，LncRNA可能在先天免疫系统以及炎症基因表达中发挥重要作用，使其成为治疗RA的重要靶点之一[12]。近年来中医药治疗RA逐渐得到认可，本文通过查阅国内外文献，从祛风通络、温经散寒、健脾除湿、补益肝肾角度，对近年来中药复方以及中药单体通过调控LncRNA治疗RA作用机制的研究进行综述，以期为现代中医药防治RA提供新途径。

1 祛风通络法

祛风通络法适用于风湿阻络型RA，“风痹”多是由于元气不充，或是疾病后造成体质虚弱、抵抗力下降，或是饥饿、疲劳，以致风邪入体且游行经络血脉，致疼痛部位游走不定，称“行痹”，同时患者经络不通，气血运行受阻[13]。研究表明苍膝通痹胶囊、雷公藤有效成分提取物、中药单体槲皮素可以通过调控LncRNA防治RA。

1.1 苍膝通痹胶囊 苍膝通痹胶囊由独活、威灵仙、苍术等9味中药组成，具有祛风止痛、活血通络、补益肝肾等功效，研究表明，其可靶向LncRNA HOTAIR介导调控p38MAPK信号通路，使关节软骨细胞p38、p-p38、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达下降[14]。p38MAPK信号通路是RA成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）炎症反应发生、发展的重要机制之一，可以被细胞因子如TNF-α、IL-1激活，活化后又可使促炎因子、MMPs和信号酶在关节滑膜中过表达，促进炎症反应发展[15]。因此，苍膝通痹胶囊可能通过调控LncRNA HOTAIR抑制关节滑膜炎症反应缓解RA症状。

1.2 雷公藤有效成分提取物 雷公藤为复方雷公藤酒的君药，配伍生川乌、生草乌、杜仲等，可祛风湿、通经络、舒筋活络、消肿止痛，用于风湿痹痛、关节疼痛等，常与其他药物合用，效力大且用途广[16]。雷公藤又名菜虫草、红药、水莽草等，具有祛风除湿、活血止痛之功效，是临床上最早的治疗RA有肯定疗效的药物之一[17]。雷公藤多苷片则是从雷公藤根部提取的总苷，由多种有效成分共同发挥抗炎与抑制免疫调节功效，疗效确切，适用于治疗RA，而雷公藤内酯醇是主要的活性成分[18]。

1.2.1 雷公藤多苷 ZHANG等[19]研究发现，通过雷公藤多苷治疗的胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠中的IgG a、IL-6和TNF-α水平顯著降低，改善CIA小鼠膝关节的组织结构，防止骨破坏，血清中ENST00000494760下降，miR-654-5p上升，C1QC下降。根据RNA表达谱、LncRNA-mRNA共表达网络和ceRNA网络，生物信息学分析预测ENST00000494760-miR-654-5p-C1QC轴是RA患者对雷公藤多苷片反应的候选生物标志物。

1.2.2 雷公藤内酯 LncRNA RP11-83J16.1可促进RA-FLS的增殖、侵袭和炎症反应[20]。PIAO等[21]研究证明，雷公藤内酯可抑制RA-FLS的活性，降低TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-3、MMP-9水平，失活LncRNA RP11-83J16.1、URI1信号和β-catenin信号，促进细胞凋亡;而LncRNA RP11-83J16.1过表达，逆转了雷公藤内酯的效果。WEN等[22]

研究发现，LncRNA ENST000006198在患者外周血单个核细胞、RA-FLS中的表达显著增加，且与红细胞沉降率（ESR）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）和DAS28水平呈正相关。ENS的过表达增加了Fas、Fasl、Caspase-3、Caspase-8和促凋亡因子Bax的表达。RA-FLS中，促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8，抗炎因子IL-4、IL-10显著降低，故ENS可能通过调节RA-FLS的凋亡和炎症反应参与RA的发生、发展。

1.2.3 （5R）-5-羟基雷公藤甲素 p53是一种肿瘤抑制基因，在细胞凋亡过程中具有重要调节作用[23]。（5R）-5-羟基雷公藤甲素（LLDT-8）是一种新型雷公藤内酯类衍生物，ZHOU等[24]通过微阵列分析，LLDT-8上调RA-FLS中LncRNA WAKMAR的表达，抑制miR-4478的表达并阻止miR-4478与靶基因EF1之间的相互作用，EF1激活p53转录，即miR-4478抑制EF1与p53，促进RA-FLS的肿瘤样表型。总之，LLDT-8通过LncRNA WAKMAR/miR-4478/EF1/p53轴抑制RA-FLS的增殖和侵袭。

1.3 槲皮素 槲皮素是一种黄酮类化合物，具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化和关节滑膜组织增殖抑制等，可用于治疗RA[25-26]。PAN等[27]

研究证明，槲皮素可以上调RA-FLS LncRNA MALAT1的表达，MALAT1可增强Caspase-3和Caspase-9的表达，以及抑制PI3K/AKT通路，以促进RA-FLS凋亡。

2 温经散寒法

温经散寒法适用于寒湿阻络型RA，“寒痹”是因为营气不足，或卫外之阳不固，或淋雨受寒吹风，以致寒邪入体，其症主要为遇寒疼痛更甚，称为“痛痹”[28-29]。目前研究发现，能够温经散寒、除湿止痛的中药复方乌头汤、黄芪总皂苷可以通过调控LncRNA缓解RA症状。

2.1 乌头汤 乌头汤始载于张仲景《金匮要略》，以川乌为君药，辅以麻黄、黄芪、白芍等，可温经散寒、除湿宣痹，是散寒除湿治法的代表药，临床上广泛用于治疗RA[30-31]。乌头汤通过刺激Ahr介导的转录以增加LncRNA LOC1019810的表达，LncRNA LOC1019810将HDAC1募集到组蛋白3蛋白上，使该蛋白去乙酰化，进一步抑制SHC1基因的表达，通过抑制SHC1的表达，IL-1β对软骨细胞的有害影响被减弱[32]。

2.2 黄芪总皂苷 黄芪最早记载于《马王堆帛书五十二病方》，具有益气固表、补气养血的功效，防己黄芪汤、黄芪续断酒都是治疗痹证的中医经典古方[33]。黄芪总皂苷是黄芪中的四大类化合物黄芪皂苷、异黄芪皂苷、乙酰基黄芪皂苷和大豆皂苷的统称，具有抗炎、抗应激、预防神经退行性疾病以及增强机体免疫力等药理作用，可用于治疗RA[34-35]。JIANG等[36]采用微阵列分析技术，得到MRAK01530、MRAK1368、MRAK003448和XR_006457共4个LncRNAs，可作为黄芪总皂苷治疗RA的潜在治疗靶点。

3 健脾除湿法

健脾除湿法适用于脾虚湿盛型RA，脾运化水液，内湿由脾而生，湿聚成痰，留于关节，导致经脉气血痹阻不通，不通则痛，故脾虚运化无源是RA发生的关键[37]。目前有研究证明，具有健脾化湿、通络除痹功效的中药复方新风胶囊可以通过调控相关LncRNA治疗RA。

复方制剂新风胶囊由黄芪、雷公藤、薏苡仁、蜈蚣配伍而成，是健脾化湿通络方的代表方之一，研究表明其能够显著改善RA关节症状，减少关节疼痛、关节肿胀、缓解晨僵等，对改善握力有较好的疗效，且不良反应少、安全性高[38-39]。WEN等[40]发现，RA患者口服新风胶囊治疗后，患者外周血单个核细胞中LncRNA MAPKAPK5-AS1表达升高，而ESR、CRP、RF、抗CCP抗体和脾虚湿盛证证候积分下降;在实验中用新风胶囊含药血清处理经构建的RA-FLS细胞后，MAPKAPK5-AS1 RNA表达升高，促炎因子IL-17表达升高且抑炎因子IL-4表达降低，同时，促凋亡蛋白Bax表达升高且抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低。该研究证实新风胶囊可以通过上调LncRNA MAPKAPK5-AS1，从而抑制RA细胞炎症反应和促进细胞凋亡，有效缓解RA症状。

4 补益肝肾法

补益肝肾法适用于肝肾两虚型RA，肾主藏精，肝主藏血，精血充养筋骨，肝肾虚损则筋骨失养，筋骨关节则为痹证病变部位[41]。研究表明，能够温经散寒、除湿止痛、补肝益肾、强筋壮骨的中药复方化瘀强肾通痹方以及可在肝肾阴虚中用以养血通络的紫草与丹参的提取物（紫草素、丹参酮ⅡA）可以通过调控LncRNA防治RA。

4.1 化瘀强肾通痹方 中药复方化瘀强肾通痹方以穿山龙、丹参为君药，另有黄芪、白芍、杜仲等药，有补肾强筋骨、祛风除湿、通痹温中之功效，在治疗RA方面有确切疗效[42]。WANG等[43]利用基因芯片技术，通过微阵列分析发现RA患者LncRNA uc.477上调，干扰pri-miR-19b的加工，使其产生成熟型，从而发挥促炎作用。中药复方化瘀强肾通痹方可以下调RA-FLS和CIA小鼠模型中LncRNA uc.477水平，从而减轻LncRNA uc.477对pri-miR-19b的抑制，使miR-19b表达升高，抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A和IL-3的释放，减轻RA症状。

4.2 紫草素 紫草具有清热解毒、透疹消斑之效，主治麻疹、丹毒、痈肿疮毒等[44]。紫草素是从紫草根部提取的一类萘醌类色素，是紫草的主要免疫活性成分，实验证明紫草素具有免疫调节、抗炎、镇痛、改善软骨和骨组织结构的功能[45]。YANG等[46]研究发现，紫草素可显著增强小鼠RA-FLS中LncRNA NR04118和SOCS3表达，并且抑制IL-6、IL-8和MMPs的分泌和表达。干扰LncRNA NR04118的表达可以逆转紫草素对SOCS3、IL-6、IL-8和MMPs表达水平的调节。总之，紫草素通过LncRNA NR04118抑制RA-FLS的炎症反应。

4.3 丹参酮ⅡA 丹参最早记载于《神农本草经》，其根部入药，有活血祛斑、安神宁心的作用[47]。丹参酮ⅡA是从丹参中提取的一种脂溶性二萜类化合物，可抑制滑膜炎症反应和关节软骨的损失，减轻或延缓RA的进展[48]。LI等[49]用丹参酮ⅡA处理RA-FLS后，LncRNA GAS5表达显著上调，RA-FLS活性降低，凋亡率上升;而敲除GAS5基因会使RA-FLS细胞中Caspase-3和Caspase-9表達下调，同时激活PI3K/AKT信号通路，提示丹参酮ⅡA通过上调LncRNA GAS5，增强Caspase-3和Caspase-9的表达，抑制PI3K/AKT信号通路，促进RA-FLS的凋亡。

5 小结与展望

目前，关于LncRNA的研究仍在萌芽阶段，LncRNA可通过多通路调控细胞的增殖、转移、分化、凋亡、炎症反应、氧化反应等生物学过程。近年来中医药治疗RA的疗效逐渐得到认可，而LncRNA与RA滑膜细胞的增殖和凋亡、持续炎症反应、骨与软骨的破坏密切相关，研究中医药介导LncRNA调控人体各种细胞反应防治RA的具体机制，可达到靶向治疗的效果。而进一步研究针对性强的治疗RA的LncRNA生物标志物，具有重要价值和意义。但是目前大多为动物实验研究，缺乏严谨的大样本随机对照研究，应进行相应临床试验，并对中药药理活性筛选，提纯有效成分或有效成分群，或进一步优化结构以提高药效，为临床用药与诊治RA提供新的方向。

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收稿日期：2022-01-28;修回日期：2022-03-06