消除脂血对临床生化检验常用指标干扰的方法比较

王天义

（大连康复疗养中心，辽宁 大连 116013）

在过去的20年里，检验医学的重点已经逐渐转移至分析前阶段，这是整个测试过程中最容易出错的阶段。因此应特别注意标本采集、运输、样品质量、储存和处理，以获得准确的检测结果[1]。目前已经发布了许多指南，包括由临床临床生化检验标准协会（CLSI）制定的指南，以帮助临床生化检验管理测试周期中提到的每个方面[2]。在实践中，内源性干扰可能是临床生化测试的重要错误来源[3]。其中脂血症是最常见的分析前干扰之一，可能是脂蛋白颗粒积聚引起的样品浑浊，会导致光吸收增加，影响使用分光光度法的测试。血脂还可能通过体积置换引起干扰，尤其影响电解质分析[4]。此外，脂血样本的其他可能问题包括样本不均匀性（破坏分析仪检测和移液器样本的方式）和血清蛋白电泳图谱的改变。虽然低水平的脂血症通常不会显著影响临床实验室检测，但严重脂血症的存在可能会影响分析。脂血虽然不像溶血和黄疸样本那样常见，但仍然会引起相当大的问题[5]。根据CLSI C56-A文件，真空超速离心是去除脂血的推荐方法，其他方法虽也被用于去除脂血的常规实践，如高速离心、PEG沉淀或乙醚处理等方法来消除脂血对常规生化项目的干扰，但各有优缺点[6]。鉴于此，本文以所在医院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康体检人员的血液样本为例，重点探究高速离心法和LipoClear脂质清除剂对临床生化检验中消除脂血对常用指标干扰的效果，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 人口统计 本次研究经所在医院的伦理委员会批准，征得研究对象本人及其家属的同意并签署《知情同意书》后方可进行。具体以所在医院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康体检人员的血液样本为例，随机分为对照组和观察组。对照组50例中，男性24例，女性26例；患者年龄24～37岁，平均年龄（31±2.45）岁；患者身高151～181 cm，平均身高（172±1.34）cm；患者平均体质量指数21.1 kg/m2；患者平均VO2max 41.2 mL/（min·kg）；平均最大心率192次/分。观察组50例中，男性27例，女性23例；患者年龄25～41岁，平均年龄（32±2.65）岁；患者身高152～183 cm，平均身高（173±1.54）cm；患者平均体质量指数22.2 kg/m2；患者平均VO2max 42.1 mL/（min·kg）；平均最大心率193次/分。所选患者均为身体健康体检人群，且排除怀孕期患者、精神疾病患者或其他不适宜参与研究的患者。两组统计学数据对比，P＞0.05，可进行对比研究。

1.1.2 试剂与器材 研究使用日立7600C全自动生化分析仪，各种常规生化试剂为四川迈克科技有限公司提供，cfas标准品、质控血清为美国郎道产品；Lipoclear脂质清除剂为StatSpin公司提供，30 mL装，批号11131；脂肪乳注射液为西安力邦制药有限公司提供，批号1l0817。TGl6-W微量高速离心机。

1.2 研究方法 本次研究主要检测包括K、Na、Cl、Ca、P、Urea、Cr、UA、TBIL、GLU、ALT、AST、GGT、LDH、AMY、TP、ALB和TG在内的18项临床常用生化检测项目。其中，对照组禁食8～12 h后，由护士和医疗技术人员使用无菌技术采集静脉血，样本在-20 °C下冷冻24 h。24 h后，解冻并通过滤纸过滤。过滤后，测定18项生化项目，再取血清0.5 mL于小型离心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混匀，形成中高浓度脂血，震荡混匀后静置5 min，采用6 000 r/min离心5 min，使用加样枪吸取表层凝固物下的清亮液体约0.3 mL，再次测定样本的上述项生化项目。其中，检测数据根据稀释倍数进行校正。

观察组禁食8～12 h后，由护士和医疗技术人员使用无菌技术采集静脉血，样本在-20 °C下冷冻24 h。24 h后，解冻并通过滤纸过滤。过滤后，测定18项生化项目，再取血清0.5 mL于小型离心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混匀，形成中高浓度脂血，震荡混匀后静置5 min，再按试剂说明书加入0.1 mL LipoClear试剂，震荡混匀后静置5 min，再次测定上述各生化项目。其中，检测数据根据稀释倍数进行校正。

1.3 统计学方法 使用梯形法计算AUC和dAUC TAG，使用SAS统计软件（Windows版本8.2，SAS Institute Inc）进行统计分析。数据表示为（±s），P＜0.05为差异有统计学意义，并根据公式计算两组样本处理前后生化检查结果的偏差。

2 结果

对照组中，经过干扰后样本生化检测结果中的P、TP和TG发生明显偏差，其余项目结果在偏差允许范围内，推测偏差是由随机误差引起，能够在一定程度上反映患者的血液生化水平；观察组中，经过干扰后样本生化检测结果均未发生偏差，能够有效地反映患者的血液生化水平。见表1。

表1 两组样本干扰前后各生化项目检测结果表对比（±s）

表1 两组样本干扰前后各生化项目检测结果表对比（±s）

3 讨论

众所周知，临床生化检测分析是评估人体内分泌功能的重要方法[7]。随着可以消除特定基因产物功能技术的出现，如RNA干扰或锌指核酸酶诱变，随着越来越多的小分子抑制剂的发展，临床生化检测比以往任何时候都更为重要，可以使用已有的生化方法为分泌途径提供可能性[8]。因此，临床生化检测分析对于全面剖析哺乳动物细胞分泌运输的机制非常重要。如生化检测中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）通常是识别肝细胞损伤存在的最有用的酶。ALT存在于许多组织中，但其最大活性是在肝脏中。该酶主要存在于细胞溶质中，在线粒体中也发现了同工酶（ALT2），并且主要存在于肝脏的门静脉区，其肝细胞浓度高达血清中的10 000倍[9-13]。ALT在糖异生和氨基酸代谢中起主要作用。血清活性升高的幅度与受影响的肝细胞数量成正比，其显著升高将反映不可逆的细胞损伤和坏死，而轻度升高可能主要表明膜起泡和可逆的细胞损伤。

在实践中，溶血、黄疸和脂血等都可能对生化检测结果的正确性造成影响，进而影响生化检测对患者真实情况的反映[14]。尤其是脂血，多种因素可导致样品脂血症。脂血症最常见的干扰原因是在采血前没有禁食。另一个主要原因是高三酰甘油血症，由原发性疾病（如Fredrickson Ⅰ、Ⅳ或Ⅴ型高脂血症）或继发原因引起。高三酰甘油血症的常见继发性原因包括糖尿病、酗酒、肾病、非酒精性脂肪肝、艾滋病毒感染和药物治疗。一些静脉输液通过含有脂质乳剂可直接引起脂血症，或者用于肠外营养。作为某些药物中毒的解毒剂（如局部麻醉剂），或作为水溶性差药物的稀释剂（如悬浮在Intralipid中的丙泊酚注射液），最近接受静脉内脂质乳剂治疗患者的血液采集可能会导致血脂异常高的样本。而在临床生化检测中，脂血造成光散射和吸收、体积消耗（水相减少）和物理化学干扰，因此务必要在血液样本中去除脂血，以便于确保生活检测结果的准确性[15-16]。

实际上，有多种方法可以评估实验室样本中的脂血症。最简单的是对试样进行目视检查；然而，这种类型的评估存在显著不准确性和个体差异[17]。血清或血浆中三酰甘油的测量也可以粗略评估脂血症的程度，但浑浊程度与三酰甘油浓度的相关性并不好，具有复杂的非线性关系。许多临床化学平台能够确定血脂指数，对于血脂指数的自动检测，患者样本在盐水或缓冲液中进行稀释，然后测量特定波长。如Roche Diagnostics cobas分析仪使用660/700 nm，Beckman Coulter化学分析仪使用660/800 nm。此外，真空超速离心、高速离心、PEG沉淀、乙醚处理等方法，都能够有效去除脂血。如使用离心分析仪（Cobas-Mira，Roche，Basel，Switzerland）通过酶比色法分析血样的TAG、FA、甘油和葡萄糖等。通过减去甘油值来校正TAG值。然而这些方法或操作复杂、或成本较高、或准确率较低，或多或少都存在着一定缺点，如脂血指数方面缺乏标准化，以及由于样品浑浊而不是由脂质积累引起的假阳性等[18]。

目前国外报道中，一种市售的非离子聚合物LipoClear®已广泛用于世界各地的临床生化检验，用于消除脂血对常规生化项目的干扰。根据制造商的声明，LipoClear®不能用于测定单克隆丙种球蛋白病免疫球蛋白、蛋白质、磷或电解质。由于制造商的数据可能与在临床生化检验获得的数据不同，正如Nikolac及其同事最近的一项研究所示，因此在临床生化检验环境中使用用于特定的临床生化检验。令人惊讶的是，对当前文献的回顾显示，只有少数研究评估了不同去脂方法对临床生化检验结果的影响。

鉴于此，本次研究重点在于评估和比较高速离心法和LipoClear脂质清除剂对临床生化检验中消除脂血对常用指标干扰的效果。本次研究采用受试者内设计，每个参与者都作为自己的对照。研究以随机顺序安排，并以至少1周的清除期分开。隔夜禁食8～12 h后，早上将特氟龙导管插入肘前静脉，并要求受试者在试验期间保持半卧位。结果显示，对照组中经过干扰后样本生化检测结果中的P、TP和TG发生明显偏差，其余项目结果在偏差允许范围内，推测偏差是由随机误差引起，能够在一定程度上反映患者的血液生化水平；观察组中，经过干扰后样本生化检测结果全未发生偏差，能够有效地反映患者的血液生化水平。

综上所述，本次研究在一定程度上表明LipoClear脂质清除剂对临床生化检验中消除脂血对常用指标干扰的效果更好，临床接受更高，且操作更为简单，值得临床推广。