血清miR-29a、COX-2水平与老年晚期乳腺癌病人化疗预后的相关性

王绪娟 罗永鑫 李成强 王汝晋 向敏

晚期乳腺癌病人原发病灶体积较大，实施手术治疗通常难以完整切除，且病人癌细胞已出现广泛转移，因此多需对病人实施化疗治疗[1-2]。而老年病人身体状况较差，对化疗的敏感性及耐受性均较低，实施化疗后预后不良风险高[3]。探讨与老年乳腺癌病人化疗预后相关的指标，及早预测病人预后，并改进治疗方案尤为必要。研究指出，微小RNA(microRNA，miR)不仅可调控基因转录后表达，参与肿瘤细胞生成、增殖、转移等途径，还可抑制细胞凋亡，进而影响肿瘤的发生、进展及治疗获益[4]。其中miR-29a被证实在宫颈癌、肝癌病人癌组织中均呈异常表达，并与肿瘤细胞恶性生物学行为密切相关[5-6]。推测miR-29a也可能与乳腺癌病人治疗获益有关。环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)被证实与癌症病人化疗敏感性有一定关系[7]。推测COX-2也可能与乳腺癌病人化疗获益有关。本研究旨在探讨血清miR-29a、COX-2水平与老年晚期乳腺癌病人化疗预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析本院2018年1月至2020年1月接受TAC(紫杉醇+吡柔比星+环磷酰胺)方案化疗后并接受至少为期1个月随访的114例老年晚期乳腺癌病人临床资料，年龄60～84岁，平均(71.94±8.68)岁；发病部位：单侧47例，双侧67例；病灶直径：3～7 cm，平均(5.19±0.65)cm；组织学类型：浸润性导管癌88例，浸润性小叶癌18例，其他8例；组织学分化：高分化69例，中分化42例，低分化3例；分子亚型：Luminal A 37例，Luminal B/HER2+33例，Luminal B/HER2-23例，三阴性21例。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)符合乳腺癌诊断标准[8]；(2)经检查病人均已发生远处转移，失去手术治疗机会；(3)病人有乳房疼痛、乳房肿块、乳头溢液等症状；(4)病理学检查结果显示病人TNM分期[9]为Ⅳ期；(5)临床资料完整。排除标准：(1)合并2型糖尿病的病人；(2)有其他部位原发肿瘤的病人；(3)合并慢性或急性炎症性疾病的病人；(4)复发病人；(5)对化疗药物有过敏反应的病人；(6)化疗或随访期间病死、失访的病人。

1.3 方法

1.3.1 基线资料：设计基线资料调查表，查阅病人电子档案(录入时间为病人化疗前)，记录研究所需资料，包括年龄、发病部位、病灶直径、组织学类型、组织学分化、分子亚型、标准化摄入值(standardized uptake value，SUV)、血清肿瘤标志物水平、基质金属蛋白酶2(matrix metallo proteinases 2，MMP-2)、血清miR-29a及COX-2水平。采用美国罗氏公司提供的肿瘤标志物检测试剂盒检测病人糖类抗原125(CA125)、CA153水平，检测方法选用电化学发光免疫分析法。采用美国罗氏公司RNA提取试剂盒说明书提取RNA，取1μg RNA，采用美国罗氏公司反转录试剂盒进行反转录反应，反应条件为37℃ 60 min，95 ℃ 5 min，采用ABI 7500 Fast Star定量PCR仪检测血清miR-29a水平。采用美国罗氏公司酶联免疫吸附试剂盒检测MMP-2、COX-2水平。

1.3.2 化疗预后评估：病人均接受TAC(紫杉醇+吡柔比星+环磷酰胺)方案进行化疗治疗。以10 d为1疗程，21 d为1周期，治疗6个周期后至少随访1个月。参照实体瘤疗效评估标准[10]制定化疗效果评估标准，分为完全缓解(complete remission，CR)、部分缓解(partial response，PR)、稳定(stable disease，SD)和进展(progressive disease，PD)。其中PD病人为化疗预后不良(预后不良组)，CR+PR+SD为化疗预后良好(预后良好组)。

2 结果

表2 回归分析检验各主要指标与老年晚期乳腺癌病人化疗预后的关系

2.1 预后不良组与预后良好组基线资料比较 114例老年晚期乳腺癌病人中，有44例(38.60%)预后不良，有70例(61.40%)预后良好；预后不良组CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2水平均高于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)；2组年龄、发病部位、病灶直径、组织学类型、组织学分化、分子亚型、SUV比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 预后不良组与预后良好组基线资料比较

2.2 老年晚期乳腺癌病人化疗预后的影响因素分析 将初步基线资料比较结果显示差异有统计学意义的CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2纳入作为自变量，将老年晚期乳腺癌病人化疗预后作为因变量(1=预后不良，0=预后良好)纳入Logistic回归方程，结果显示，CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2表达上调与老年晚期乳腺癌病人化疗预后不良发生有关。见表2。

2.3 各主要指标对老年晚期乳腺癌病人化疗预后的预测价值 ROC曲线结果显示，CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2预测预后不良发生风险的AUC分别为0.830、0.855、0.816、0.842、0.815，阈值分别为34.500 U/mL、30.600 U/mL、107.500 ng/mL、0.750、52.200 ng/mL，见表3。

表3 各主要指标预测老年晚期乳腺癌病人化疗预后不良风险的ROC曲线结果

3 讨论

管秀雯等[11]研究指出，我国老年晚期乳腺癌病人的生存情况较差，中位总生存期较非老年病人明显缩短。而早期乳腺癌症状较为隐蔽，筛查难度较大，老年病人确诊时已进入晚期，癌细胞发生转移，治疗难度增大，行化疗治疗的获益较低，探讨病人预后尤为必要。

本研究结果显示，CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2表达上调与老年晚期乳腺癌病人化疗预后不良有关。CA125属于糖链抗原，正常人体中，由胚胎期体腔上皮发育而来的组织仅可产生少量CA125，当机体出现癌变时，恶变组织释放过量CA125，造成血清CA125水平上调[12]。因此CA125水平越高，癌变程度越严重，病人预后越差。CA153是乳腺癌的特异性标志物，研究证实，随着CA153水平升高，肿瘤病人治疗获益降低，预后不良风险升高[13]。MMP-2是近年来发现的与乳腺癌病人预后相关的指标，研究认为在MMP-2表达上调时，细胞外基质降解，血管通透性升高，肿瘤细胞更易进入血液循环，在靶器官中定植，进而增加病人预后不良风险[14]。

miR是一类单链非编码微小RNA，被证实可调控靶基因表达[15]。研究指出，miR-29a可负向调控第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)基因，即在miR-29a水平升高时，PTEN表达水平降低[16]。而PTEN编码基因是肿瘤抑制基因，可产生抑制细胞生长的蛋白，具有蛋白和脂质双重磷酸酶活性，可通过拮抗磷酸化酶(如酪氨酸激酶)活性，发挥抑制肿瘤细胞生长、增殖、侵袭的效果，减少血管生成及局部黏附，并可使IP3的第三位磷酸去磷酸化，间接抑制胰岛素诱导的磷酸肌醇-3激酶活性，进一步抑制肿瘤细胞生长[17]。miR-29a水平越高，乳腺癌细胞生长、侵袭能力越强，受抑制程度较轻，行化疗治疗时，肿瘤对化疗药物的耐受性较高，病人易出现预后不良。COX-2是COX的亚型，在正常生理状态下表达量极小，而在病理状态(如癌基因激活)下可过量分泌，通过促使前列腺素合成，增加肿瘤生长、增殖风险，提高血管渗透性，促使肿瘤发生转移[18]。COX-2还可通过上调原癌基因Bcl-2表达，提高肿瘤细胞的抗凋亡能力，通过产生催化产物前列腺素E2，抑制淋巴因子产生，减少T细胞和B细胞增殖，通过诱导免疫抑制酶3-双加氧酶表达，使病人机体免疫监视功能减弱，肿瘤细胞易发生免疫逃逸[19]。因此，COX-2水平升高时，癌细胞生长、增殖、转移风险增加，抗凋亡能力较强，病人行化疗的预后不良风险较高。

综上所述，CA125、CA153、MMP-2、miR-29a相对表达量、COX-2与老年晚期乳腺癌病人预后不良密切相关，可作为预后不良的预测因子。