狭叶崖爬藤对大鼠实验性急性心肌梗死的保护作用

吉杨丹，易艾晶，程 骅，王升匀，唐慧敏，李双苗，王 恒

(黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558013)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是常见的心血管疾病，2002～2016年急性心肌梗死(AMI)死亡率总体仍呈上升态势，从2005年开始，AMI死亡率呈现快速上升趋势，农村地区AMI死亡率从2012年开始明显升高，2013年和2016年大幅超过城市平均水平。2016年AMI死亡率城市为58.69/10万，农村为74.72/10万[1]。狭叶崖爬藤(又名五爪金龙)为葡萄科植物崖爬藤的全株，具有活血通筋、散瘀消肿、跌打损伤功效[2]。现代药理学研究发现狭叶崖爬藤有抗炎镇痛和较强的抑菌作用，对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，对类风湿关节炎具有很好的治疗效果[3-6]。但用于治疗AMI的实验研究尚未见到报道。本研究以狭叶崖爬藤干预，复制大鼠急性心肌梗死模型，评价其对血流动力学的影响及心肌梗死相关指标的作用，为狭叶崖爬藤的研发提供理论根据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与试剂 狭叶崖爬藤采自贵州省三都县打渔乡，经黔南民族医专药学系魏学军教授鉴定为葡萄科植物崖爬藤(TetrastigmahyPoglaucumPlanch)的全株，按文献方法制备提取液(按生药量计算)[3]。CK-MB、LDH 试剂盒( 南京建成生物工程研究所，批号：20191230)。

1.1.2 动物 55只健康清洁级14～16周龄SD种大鼠，雄性，体重300～350 g，由贵州医科大学实验动物中心(北校区)提供[实验动物生产许可证号：SCXK(黔)2018-0001，实验动物使用许可证号：SYXK(黔)2018-0001]。实验前置于室温18～22℃，相对湿度65%，光照周期12 h，适应性喂养3 d。

1.1.3 仪器 BL-422i型信息化集成化型号采集与处理系统，成都泰盟软件有限公司；HX-300型动物呼吸机，浙江龙湾医疗器械厂；680型酶标仪，上海伯乐生命医学产品有限公司；TDL-4ZB型台式低速离心机，湖南星科科学仪器厂；全自动生化分析仪，美国Thermo Fisher。

1.2 方法

1.2.1 造模及给药 SD大鼠按体质量随机分为4组：假手术组(生理盐水20 ml/kg)10只、模型组(生理盐水20 ml/kg)15只、狭叶崖爬藤高剂量组(100 mg/kg)15只、 狭叶崖爬藤低剂量组(50 mg/kg)15只。灌胃容积为20 ml/kg。 每天灌胃1次，连续7 d。末次给药后1 h，参照文献方法复制AMI大鼠动物模型[7]。心电图Ⅱ导联出现J点抬高，持续30 min以上即为模型成功[8]。假手术组大鼠冠脉穿线但未结扎。手术结束后，每组保证8只以上大鼠存活。

1.2.2 血流动力学分析 游离右颈总动脉约1.5～2.0 cm，插入Pe-50心导管(连接BL-422i型信息化集成化型号采集与处理系统)。记录波形及血流动力学指标：开胸之前记录1次，实验结束再记录1次左室内压最大下降速率(-dP/dtmax)、左室内压最大上升速率(+dP/ dtmax)[9]。对应为手术及手术后血流动力学指标。

1.2.3 J点位移 每只大鼠测至少6个连续的波形，取其平均值。

1.2.4 血清制备 各组大鼠在术后监测血流动力学指标以后，通过股动脉取血。3 000 r/ min离心10 min，取血清，按照试剂盒说明书进行操作，全自动生化分析仪检测血清中CK-MB 、LDH水平。

1.2.5 大鼠心肌组织病理形态学观察 颈总动脉取血后解剖大鼠，取左心室缺血区心肌组织，以4%多聚甲醛溶液固定，HE染色，在光学显微镜下进行观察。

1.3 统计学分析 采用SPSS25.0软件进行统计学分析，计量数据以表示，两组间比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 狭叶崖爬藤对大鼠急性心肌梗死J点位移及血流动力学的影响 手术后，模型组与假手术组比较，J点位移显著增加(P<0.01)。与模型组比较，高剂量组和低剂量组显著抑制心电图J点位移的增加(P<0.01或P<0.05)。提示狭叶崖爬藤对AMI有保护作用，结果见表1。手术前各组+dP/dtmax和-dP/dtmax数值均未见显著差异。手术后，模型组与假手术组比较，+dP/dtmax和-dP/dtmax数值均显著降低(P<0.01)。与模型组比较，高剂量组能显著升高+dP/dtmax和-dP/dtmax(P<0.05或P<0.01)。低剂量组对上述指标有改善趋势。结果见表2。

表1 狭叶崖爬藤对实验性急性心肌梗死J点的影响

表2 狭叶崖爬藤对大鼠实验性急性心肌梗死+dP/dtmax、-dt/dtmax的影响

2.2 狭叶崖爬藤对大鼠急性心肌梗死血清CK-MB、LDH的影响 与正常组相比，模型组大鼠血清 CK-MB、LDH明显升高(P<0.01) ; 与模型组比较，高剂量组和低剂量组大鼠血清 CK-MB显著降低(P<0.01或P<0.05) ，高剂量组大鼠血清LDH显著降低(P<0.05) 。结果见表3。

表3 狭叶崖爬藤对实验性急性心肌梗死血清CK-MB和LDH活力的影响

2.3 对大鼠冠脉结扎诱发急性心肌梗死心肌组织病理组织学的影响 心肌标本镜下观察：假手术组心肌纤维排列整齐；模型组心肌纤维肿胀，排列紊乱，心肌间质出现大量水肿，甚至可见血管扩张；高剂量组心肌纤维排列较整齐，呈现轻度水肿；低剂量组心肌纤维排列较紊乱，心肌心肌间质出现水肿及血管扩张。结果见图1。

假手术组 模型组

3 讨论

心血管系统疾病是全球范围内危及人类生命和健康的头号杀手，尤其心肌梗死是当今世界威胁人类最严重的疾病之一。因此有效预防与治疗心肌梗死成为当前医务工作者的当务之急。本实验通过检测到J点位移证实了建立大鼠急性心肌梗死动物模型的成功[10]，狭叶崖爬藤能够显著减少J点位移。 血流动力学指标是评价心功能作用的关键指标，其中-dP/dtmax、+dP/dtmax二者可以反应心肌舒张和收缩的速率[11]。本实验结果显示，冠脉结扎后，模型组-dP/dtmax和+dP/dtmax显著降低。提示其心脏舒张和收缩功能出现紊乱，模型大鼠心功能障碍，建立模型成功。狭叶崖爬藤能显著改善实验性急性心肌梗死血流动力学指标的紊乱，能改善心肌梗死心功能。心肌酶谱已经成为临床最常用的辅助诊断心肌梗死的一种方法[12]。本实验结果表明狭叶崖爬藤对心肌梗死后CK-MB与LDH活力具有显著的抑制作用。心肌缺血时间过长会引起心肌梗死，此时绝大部分心肌坏死，心肌间质充血、水肿并伴大量炎症细胞浸润[13]。本实验通过HE染色证实狭叶崖爬藤能够显著的抑制心肌损伤。

上述验证了狭叶崖爬藤对实验性AMI大鼠具有保护作用，可能与狭叶崖爬藤改善血流动力学相关，其作用机制有待于深入研究。