血清细胞骨架相关蛋白4与慢性肾脏病患者血管钙化的关系

卢 浩 章 磊 张小燕 徐永伟 周飞雪 刘小菊▲

1.浙江省丽水市中医院肾内科，浙江丽水 323000；2.浙江省丽水市中医院血透室，浙江丽水 323000；3.浙江省丽水市中医院心内科，浙江丽水 323000；4.浙江省丽水市中医院检验科，浙江丽水 323000

慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）是各种原因导致的慢性肾脏结构和功能障碍，已成为全球公共卫生问题[1]。与普通人群比较，CKD 患者患心血管疾病的风险显著增加，也是其死亡的主要原因[2]。研究表明，除家族史、高动脉压、高血脂、炎症等心血管疾病危险因素外，因严重高磷血症和微炎症状态等变化导致的血管钙化也是CKD 患者患心血管疾病的重要原因[3-4]。研究表明，分泌型蛋白Dickkopf-1 可拮抗Wnt/β-catenin 信号通路抑制血管钙化发生[5]。细胞骨架相关蛋白4（cytoskeleton-associated protein 4，CKAP4）是一种Ⅱ型跨膜蛋白，具有调节细胞增殖的作用，同时作为Dickkopf 家族蛋白受体，CKAP4 还能结合Dickkopf-1 增强细胞增殖[6]。作为Dickkopf-1 的受体，CKAP4 是否也参与CKD 血管钙化鲜见研究报道。本研究旨在分析CKD 患者血清CKAP4 水平变化，探讨其与血管钙化发生的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取浙江省丽水市中医院2019 年1 月至2021 年4 月收治的153 例CKD 患者，均符合《慢性肾脏病筛查诊断及防治指南》[7]诊断，其中男101 例，女52 例；年龄42～78 岁，平均（66.32±5.64）岁；体重指数（body mass index，BMI）18～27 kg/m2，平均（24.66±2.01）kg/m2；病程4～15 年，平均（9.79±2.12）年；估算的肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate，eGFR）13～87 ml/（1.73m2·min），平均（45.42±5.46）ml/（1.73m2·min）；CKD 分 期[7]：G1期53 例，G2期24 例，G3期32 例，G4期26 例，G5期18 例；原发疾病：高血压31 例，糖尿病46 例，慢性肾小球肾炎52 例，其他24 例。纳入标准：①年龄≥18 岁；②临床资料完整；③患者及家属均知情研究。排除标准：①近6 个月免疫抑制剂、激素使用史；②近6 个月骨折史；③近3 个月急性感染或急性心、脑血管疾病；④合并甲状腺及甲状旁腺疾病；⑤合并免疫、血液系统疾病；⑥恶性肿瘤。根据CT 血管成像检查是否血管钙化将其分为钙化组（52 例）和无钙化组（101 例）。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 基线资料收集 收集所有研究对象性别、年龄、BMI、病程、eGFR、CDK 分期数据。

1.2.2 生化指标测定 采集所有研究对象入院2 h 内静脉血，全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BS-280）测定血钙、血磷、甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）水平，酶联免疫吸附试验测定血清基质金属蛋白酶-2（matrix metallo proteinase-2，MMP-2）水平，试剂盒由上海梵态生物科技有限公司提供，货号：FT-P31744R。

1.2.3 血清CKAP4 水平测定 采集所有研究对象入院2 h 内静脉血，3000 r/min 离心20 min，半径8 cm，取上清，酶联免疫吸附试验测定血清CKAP4 水平，试剂盒由上海梵态生物科技有限公司提供，货号：FTP35636R。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0 对所得数据进行统计学分析，正态分布的计量资料采用均数±标准差（）表示，比较采用t 检验；偏态分布计量资料的描述以中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，比较采用秩和检验。计数资料采用例数表示，比较采用χ2检验。采用logistic 回归模型分析影响因素。采用受试者操作特征曲线分析诊断价值。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较

钙化组病程长于无钙化组，CKD 分期高于无钙化组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

表1 两组基线资料比较

2.2 两组生化指标比较

钙化组血清CKAP4 水平低于无钙化组，血钙、血磷、PTH、MMP-2 水平高于无钙化组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 两组生化指标比较

2.3 CKD 患者血管钙化发生的影响因素分析

以CKD 患者是否发生血管钙化为因变量（发生=1，未发生=0），单因素分析中差异有统计学意义的指标为自变量（CKD 分期：G1期=0，G2期=1，G3期=2，G4期=3，G5期=4）进行多因素分析，结果显示CDK分期、血钙、血磷、PTH、MMP-2、CKAP4 均为CKD 患者血管钙化发生的独立影响因素（P ＜0.05）。见表3。

表3 CKD 患者血管钙化发生的影响因素分析

2.4 血清CKAP4 水平对CKD 患者血管钙化的预测价值

血清CKAP4 水平预测CKD 患者血管钙化发生的受试者操作特征曲线下面积为0.823（95%CI：0.753～0.880，P ＜0.05），灵敏度为84.62%，特异度为72.28%，约登指数为0.569，截断值为173.50 pg/ml。见图1。

3 讨论

血管钙化可导致血管壁僵硬度和脆性逐渐增加，增加血管壁破裂和血栓形成概率，因此易发心血管疾病，同时血管钙化还会影响透析CKD 患者动静脉内瘘功能，降低透析效果[4]。目前主要依靠血管成像、血管彩超诊断血管钙化，动态评估功能受限，亟须探索相关机制。既往研究认为血管钙化是一个被动的、不可避免的现象，近年研究表明其是一个与骨矿化相似的细胞介导的主动调节过程，在氧化应激、炎症、高糖、高钙、高磷等刺激作用下，骨髓源性细胞、血管周边细胞、血管平滑肌细胞向软骨或成骨样细胞转分化为血管钙化中心环节[8-9]。

Wnt/β-catenin 信号通路激活能通过调节骨形成促进血管钙化发生[10-11]。Dickkopf-1 作为Wnt 信号通路的抑制剂，能结合低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6抑制Wnt 信号中β-catenin 依赖性途径，拮抗Wnt/βcatenin 信号通路作用[12]。肌节同源盒2 能激活Wnt 信号通路促进血管钙化发生，Dickkopf-1 在肌节同源盒2 基因敲除小鼠钙化动脉中表达受抑制[13]。同时临床研究表明，血清Dickkopf-1 水平降低与CKD 患者血管钙化相关[14]，说明Dickkopf-1 与血管钙化发生密切相关。CKAP4 主要定位于内质网，在血管平滑肌细胞的细胞膜上广泛表达，作为Dickkopf 家族受体，已成为众多癌症诊断和治疗的新型分子靶标[15-16]。本研究结果显示，钙化组血清CKAP4 水平低于无钙化组，提示CKAP4 可能参与血管钙化发生，但是否与CKAP4为Dickkopf-1 结合受体有关有待进一步证实。

CKD 患者随着病情进展，可出现钙磷代谢紊乱，最终引起继发性甲状旁腺功能亢进症，引起软组织和心血管钙化[17-19]，与本研究结果一致。MMP-2 是重要的细胞外基质降解蛋白，在CKD 氧化应激条件下，血管平滑肌会大量分泌MMP-2，降解血管弹性纤维，诱导钙沉积，与血管钙化密切相关[20]。本研究结果也显示，钙化组血清MMP-2 高于无钙化组，是血管钙化的影响因素。血管钙化是与骨发育相似的生物学过程，yes 相关蛋白能通过β-catenin 促进骨生成[21-22]。近期Xu 等[23]研究也证实，下调yes 相关蛋白表达能抑制CKD 高磷酸盐引起的血管钙化。肾细胞癌研究中，CKAP4 能通过细胞周期素B1/细胞周期蛋白依赖性激酶1 促进yes 相关蛋白向细胞核转移[24]。尼古丁导致的动脉僵硬研究中，抑制yes 相关蛋白能下调MMP-2 表达[25]。本研究结果显示，CKAP4 对血管钙化发生具有一定预测价值，因此CKAP4 可能成为CKD血管钙化一个新的标志物。

综上所述，CKD 患者血清CKAP4 水平降低，为血管钙化发生独立影响因素，可作为CKD 血管钙化预测指标，但其血管钙化机制尚不明确，还需进一步深入完善相关研究。