子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达与患者临床病理分期相关性研究

徐 珊，程 珂，刘鹏宇

(1.新乡医学院第三附属医院妇科，河南 新乡 453003；2.新乡医学院医院管理处,河南 新乡 453003)

子宫内膜癌为绝经后以及围绝经期女性多发的，部位在子宫内膜的恶性、上皮性肿瘤，是仅次于宫颈癌的妇科常见的恶性肿瘤，约占妇科总体恶性肿瘤的20%～30%[1]。临床子宫内膜癌早期诊断多采取相关血清标志物检测进行，但缺乏敏感度和特异性，对患者预后和治疗价值有限，故寻求更为有效、具有参考价值的标志物对预后及诊疗进行参考具有重要价值[2-3]，恶性肿瘤与抑癌和原癌基因活性关系密切，微小RNA(miRNA,miR)为一类非编码RNA单链，能够结合相应基因序列对靶基因的表达产生抑制调节效果[4]，有研究[5]显示：miR-106b对胃癌组织中癌细胞的迁移和增殖有促进作用，其在子宫内膜癌中可能也有类似作用。另有学者[6]指出：肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)是人体体液、水钠平衡以及生理功能调节的重要系统,血管紧张素(1-7)为该系统中的一种活性肽,存在于循环系统中的同时，在子宫中也发挥重要调节作用，与子宫内膜癌可能存在紧密联系，故本研究探究子宫内膜癌患者子宫内膜组织中血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况及其与患者病理分期间的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 择本院2019年11月至2021年11月间107例子宫内膜癌患者将其子宫内膜癌组织切除后作为患病组，病例纳入标准：①均接受穿刺活检后确诊为子宫内膜癌[7]；②未进行过放疗以及化疗等治疗；③我院伦理委员会许可，签署知情同意书。排除标准：①合并其他严重疾病或原发性肿瘤者；②合并急性炎症、血液系统疾病者；③自身免疫缺陷及肝、肾严重病变者等。年龄49～70岁，平均(53.12±5.71)岁；孕次1～3次，平均(2.01±0.97)次；宫腔深度5～11 cm,平均(7.19±1.81)mm。据其TNM病理分期分组，Ⅰ-Ⅱ期组69例，年龄49～68岁，平均(52.98±5.25)岁；孕次1～3次，平均(1.99±0.94)次；宫腔深度5～10 cm,平均(7.16±1.63)mm。Ⅲ-Ⅳ期组38例，年龄52～70岁，平均(53.37±5.34)岁；孕次1～3次，平均(2.05±0.94)次；宫腔深度5～11 cm,平均(7.24±1.70)mm。TNM病理分期各分组患者间宫腔深度、孕次和年龄比较差异无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。另择同期20例健康子宫内膜组织为健康组，年龄48～70岁，平均(53.27±5.93)岁；孕次1～3次，平均(2.00±0.98)次；宫腔深度5～12 cm，平均(7.24±1.94)mm。患病组与健康组间宫腔深度、孕次和年龄比较差异无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血管紧张素(1-7)检测：采用预冷处理过的0.9%氯化钠溶液多次对新鲜冷冻的子宫内膜组织进行洗涤后取0.2 g，按照组织净重(g)、0.9%氯化钠溶液、甲基磺酰氟(Pheny1methylsulfonyl fluoride，PMSF)比例1∶10∶100将0.9%氯化钠溶液和PMSF依次加入，后进行超声匀浆到无颗粒、透明状，取12 000 g于4 ℃下进行3000 r/min，5 min离心后取上清，以酶联免疫吸附法检测血管紧张素(1-7)含量，试剂盒来自上海江莱生物科技有限公司，操作均严格参照试剂盒说明进行。

1.2.2 miR-106b检测：将子宫内膜组织样本中的总RNA提取后，采用DEPC水将其溶解后对RNA纯度和浓度进行测定后，以反转录试剂盒(上海梦泽生物科技有限公司，型号A3500)转录成cDNA，按照两步法荧光定量反转录试剂盒(上海研生生化试剂有限公司)说明书步骤进行测定，其中，引物：上游序列：5’-TTTTTCGCCCTTAGCGTGAAGA-3’,下游序列：5’-GAGGCAGTCGAAGCTCTCG-3’,U6作内参基因,上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,下游序列：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’，实时荧光定量聚合酶链式反应,反应体系包含引物各0.5、1 μl cDNA、5.5 μl RNase-free ddH2O、7.5 μl SYBR Green Mix，共15 μl。实时荧光定量PCR仪设置程序95 ℃、12 min，95 ℃、15 s，60 ℃、15 s，72 ℃、15 s，40循环，进行反应，结束后分析记录数据，miR-106b表达以2-△△CT进行计算。

1.3 观察指标

1.3.1 子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况：对比患病组和健康组子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达水平差异。

1.3.2 不同TNM病理分期分组患者子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况：对比Ⅰ-Ⅱ期组和Ⅲ-Ⅳ期组患者子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达水平差异。

1.3.3 子宫内膜癌患者TNM病理分期与血管紧张素(1-7)、miR-106b表达间相关性：Pearson检验子宫内膜癌患者血管紧张素(1-7)、miR-106b和TNM病理分期间的相关性。

1.3.4 子宫内膜癌患者TNM病理分期与血管紧张素(1-7)、miR-106b表达的关系：采用有序多分类逻辑回归分析子宫内膜癌病理分期和血管紧张素(1-7)、miR-106b间的关系。

2 结 果

2.1 两组血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况比较 患病组患者血管紧张素(1-7)和miR-106b表达均高于健康组(P<0.05)，见表1。

表1 两组血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况比较

2.2 不同TNM病理分期分组患者血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况比较 Ⅰ-Ⅱ期组患者血管紧张素(1-7)表达低于Ⅲ-Ⅳ期组，Ⅰ-Ⅱ期组患者miR-106b表达高于Ⅲ-Ⅳ期组(均P<0.05)，见表2。

表2 不同TNM病理分期分组患者血管紧张素(1-7)和miR-106b表达情况比较

2.3 子宫内膜癌患者TNM病理分期与血管紧张素(1-7)、miR-106b表达的相关性 Pearson检验表明，子宫内膜癌患者血管紧张素(1-7)与其病理分期呈正相关(r=0.805，P=0.000)，miR-106b表达与其病理分期呈负相关(r=-0.547，P=0.000)。

2.4 子宫内膜癌患者TNM病理分期与血管紧张素(1-7)、miR-106b表达的关系 以子宫内膜癌TNM病理分期分组为因变量，血管紧张素(1-7)和miR-106b为自变量，行有序多分类逻辑回归，分析子宫内膜癌患者子宫内膜血管紧张素(1-7)和miR-106b表达和其TNM病理分期间关系密切(均P<0.05)，见表3。

表3 子宫内膜癌患者病理分期与血管紧张素(1-7)、miR-106b的有序多分类逻辑回归分析

3 讨 论

子宫内膜癌的发生现多认为是Wnt/β联蛋白经典通路及Notch信号通路异常、p53基因突变以及微卫星的不稳定性等多因素综合作用的结果，以上因素还可能影响子宫内膜癌患者的预后和转移过程，但仍有较多机制难以明确，探索新思路，新方法对子宫内膜癌的治疗和预防有重要价值[8-9]，临床以往多采用CA199、CA125等肿瘤标志物对该病患者预后和诊断进行判断，但其在卵巢癌、盆腔炎症、子宫内膜异位症等疾病中也有异常表达，从而使其对子宫内膜癌患者预后的评判特异性有限，故寻求具有更好诊断价值的特异性指标对该病患者预后改善以及有效诊治具有重要作用[10-11]。

血管紧张素Ⅱ以及血管紧张素(1-7)是RAS系统中的一类多功能活性肽，前者对血管内皮生长因子具有促进作用，从而有利于肿瘤血管的形成，还可调节相关基因和转化因子促进肿瘤细胞的增殖进程，血管紧张素(1-7)对其具有抑制作用而对肿瘤细胞增殖产生抑制效果[12]。miR-106b为人类7号染色体上的，对多种基因通路和细胞因子具有调节作用的因子，在乳腺癌、肝癌、胃癌及肿瘤细胞侵袭以及增殖过程中均发挥重要作用[13]，本研究患病组血管紧张素(1-7)和miR-106b均高于健康组，提示子宫内膜癌患者体内存在miR-106b和血管紧张素(1-7)表达的异常，据其病理分期分组比较后发现，Ⅰ-Ⅱ期组患者血管紧张素(1-7)低于Ⅲ-Ⅳ期组，Ⅰ-Ⅱ期组miR-106b高于Ⅲ-Ⅳ期组，且经Pearson检验得，子宫内膜癌患者血管紧张素(1-7)与其病理分期正相关，miR-106b表达与其病理分期负相关，提示其血管紧张素(1-7)和miR-106b表达与子宫内膜癌患者TNM病理分期有较好相关性，结合有序多分类逻辑回归分析得，子宫内膜癌患者子宫内膜血管紧张素(1-7)和miR-106b表达和其TNM病理分期间关系密切，进一步证实了血管紧张素(1-7)和miR-106b表达与子宫内膜癌患者TNM病理分期间具有密切关系。分析原因：有学者对子宫内膜癌患者可能参与调节癌细胞组蛋白乙酰化修饰的相关miRNA进行调控、分析后发现有101种miRNA出现表达的异常，其中miR-106b相关基因簇与子宫内膜癌的变化有密切关系[14]，另有学者[15]研究发现:miR-106b可能在子宫内膜癌患者肿瘤细胞迁移和侵袭过程中发挥着重要作用,且与患者组织学分级、淋巴结转移以及FIGO分期间有明确正相关关系，对子宫内膜癌具有一定诊断价值。残疾基因同源物2(Disabled homolog 2,DAB2)是一类与多种恶性肿瘤关系密切的抑癌基因磷蛋白，可通过丝裂原信号的转导过程参与癌细胞分裂过程，还可作用于肿瘤胞外信号的相关调节蛋白，从而调控肿瘤的分化与增殖[16]，已有学者[17]指出，在子宫内膜癌发展与发生中有DAB2的参与且与患者疾病进展表现出一定的正相关关系，而miR-106b可对子宫内膜癌患者肿瘤细胞上相关靶基因DAB2的表达产生下调作用，进而有助于癌细胞的侵袭和增殖，促进患者病理分期的进展和恶化[18]。而血管紧张素(1-7)可通过拮抗血管紧张素Ⅱ作用，抑制血管紧张素Ⅱ对c-myc基因和转化生长因子β的调节作用，从而对子宫内膜癌细胞的增殖进行调控，也可拮抗其促血管内皮生长因子分泌作用，达到减少肿瘤组织内血管的形成的作用[19]。此外，其还可直接对子宫内膜上皮细胞产生抑制分化的效果，从而使异常增生的细胞编程性死亡，达到调控子宫内膜相关组织生长的作用，进而阻碍患者病理进程的进一步发展和恶化[20]。

综上所述，子宫内膜癌患者存在血管紧张素(1-7)和miR-106b表达的异常升高状态，其TNM病理分期Ⅰ-Ⅱ期较Ⅲ-Ⅳ期患者具有更低的血管紧张素(1-7)表达和更高的miR-106b表达，TNM病理分期与血管紧张素(1-7)和miR-106b表达水平关系密切且具有较好相关性，临床可针对患者病理分期结果进行术后辅助治疗的指导，并将其作为新靶点达到改善预后的效果。