细胞分裂周期因子25-A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性研究

程波，刘巧珍，曹清

（江西省九江市第三人民医院，江西 九江 332000）

胃癌是临床上较为常见的消化道恶性肿瘤之一，相关报道指出，胃癌的发病率和病死率位居我国恶心肿瘤前位[1]。临床以奥沙利铂为基础的联合化疗是治疗晚期胃癌的主要手段，但大部分患者会出现原发或继发耐药，严重影响化疗效果[2]。目前，关于奥沙利铂联合用药在胃癌耐药中的分子机制研究较少，本研究旨在从蛋白水平初步分析胃癌中细胞分裂周期因子25A（cell division cycle 25-A，CDC25A）的表达水平，进一步分析其表达水平与胃癌耐药的相关性，以期为早期胃癌的发现和晚期胃癌化疗方案的制定提供支持，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年7月至2020年11月本院收治的100 例胃癌患者作为观察组，其中男56例，女 44 例；年龄 31～77 岁，平均年龄（53.45±10.51）岁；TNM分期：ⅢB 46例，ⅢC 37例，Ⅳ17例；分化程度：低分化35例，中分化28例，高分化37例；有淋巴结转移54例，无淋巴结转移46例。纳入标准：观察组研究对象均为本院首诊或入院前未经放、化疗等相关治疗；化疗方案为奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶，治疗2 个疗程后评估疗效；临床分期均为ⅢB～Ⅳ期；观察组患者均经病理明确诊断为胃癌。排除标准：合并其他恶性肿瘤；临床及病理资料不全或缺失；合并严重基础疾病。根据化疗后疗效评估标准，参照世界卫生组织针对实体瘤疗效评价标准（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST），分为完全缓解、部分缓解、稳定及进展[3]，并根据其分为敏感组（完全缓解+部分缓解）和耐药组（稳定+进展）。另选取同期于本院行胃镜检查的100胃炎患者作为对照组，其中男52例，女48例；年龄30～76岁，平均年龄（54.08±9.81）岁。纳入标准：对照组患者均在本研接受治疗；胃镜活检标本均经病理明确诊断为胃炎。排除标准：合并其他恶性肿瘤；萎缩性胃炎或其他特殊类型胃炎；合并严重基础疾病；临床/病理不全或缺失。两组性别、年龄比较差异无统计学意义，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会审核批准。所有患者均对本研究知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法 采集两组患者的胃黏膜组织，通过免疫组织化学SP法检测CDC25A的表达水平，严格按照SP 检测流程进行：经考片、脱蜡、水化处理后，置于浓度3%的双氧水中孵育10 min，然后进行微波抗原修复，滴加一抗后将切片置于4 ℃下过夜。随后加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的二抗，室温孵育2 h 后，用2031 加强型二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，孵育1 h，苏木精复染，脱水，透明，最后用中性树胶封固。其中SP 检测试剂盒来自北京中山生物技术有限公司；CDC25A 抗体（ab19204）来自 Abcam 公司；小鼠P27抗人单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司；DAB购自福州迈新技术开发有限公司。用光学倒置显微镜观察免疫组化结果。

1.3 观察指标 免疫组化结果判定标准：CDC25A均以镜下胞浆呈现黄褐色或深黄色颗粒为阳性细胞，每张切片镜下选取3个高倍视野，根据每张切片阳性细胞所占比例和细胞染色程度评分，最后采用半定量积分法综合判断结果。①按阳性细胞所占比例：0分细胞不显色；1分阳性细胞所占比例≤25%；2分阳性细胞所占比例＞25%～49%；3分阳性细胞所占比例≥50%。②按细胞染色程度：0分细胞不显色，1分细胞呈浅黄色，2分细胞呈深黄色，3分细胞呈深褐色。评分相加：＞3分计为阳性，≤3分计为阴性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析，计量资料以“”表示，组间比较采用双样本方差假设t检验，计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验，采用Spearman 进行相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CDC25A阳性表达比较 观察组CDC25A阳性率为86.00%（86/100），高于对照组的21.00%（21/100），差异有统计学意义（χ2=84.916，P=0.000）

2.2 CDC25A 表达与胃癌临床病理特征的关系CDC25A 在胃癌组织中的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05），与性别、年龄、解剖位置无关，见表2。

表2 CDC25A与胃癌临床病理特征的关系[n（%）]Table 2 Relationship between CDC25A and clinicopathological features of gastric cancer[n(%)]

2.3 CDC25A 与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药性的相关性 100例胃癌患者中有47例对奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药，耐药率为47.00%。敏感组CDC25A阳性表达率低于耐药组，差异有统计学意义（P＜0.05）。Spearman 相关性分析显示，CDC25A表达水平与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药成正相关（r=0.582，P＜0.05），见表3。

表3 CDC25A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药性的相关性Table 3 Correlation between CDC25A and drug resistance of oxaliplatin combined with 5-fluorouracil in gastric cancer

3 讨论

肿瘤的发生与多基因密切相关，但大部分肿瘤均存在细胞周期调节絮乱，主要表现为促进细胞增殖或对DNA 损伤的不应答。CDC25A 是细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependentkinase，CDK）的上游调节蛋白，具有双特异磷酸酶活性，已被证实可调节细胞周期和影响细胞凋亡[4]。奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶是目前胃癌常用的化疗方案，但该类治疗方案尚未能有效改善晚期转移性胃癌的总生存时间。

本研究结果显示，观察组CDC25A 阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），提示CDC25A在胃癌组织中表达水平较高，其主要与CDC25A能直接作用于细胞周期蛋白依赖性激酶有关[5]。CDC25A 在胃癌中的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM 分期相关，主要由于CDC25A 可通过去磷酸化激活CDK1活性，加快细胞周期转换，完成细胞的有丝分裂，促进肿瘤发展[6]。另外，本研究100例胃癌患者中有47 例对奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药，而敏感组的CDC25A 阳性率低于耐药组，差异有统计学意义（P＜0.05）。Spearman 相关性分析显示，CDC25A 表达水平与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药呈正相关。说明CD25A 的表达能影响胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶的耐药性。5-氟尿嘧啶通过在体内转化，可干扰蛋白质的合成，改变DNA 的稳定性，从而抑制肿瘤的发展[7]；而奥沙利铂属于第3 代铂类化疗药物，其药理机制与顺铂类似，均可靶向作用于细胞中的DNA，从而阻断肿瘤细胞DNA的复制，进而诱发细胞凋亡[8]。研究[9]认为，肿瘤耐药性可能与细胞微环境改变、膜转运蛋白介导的药物外排及细胞内药物浓度改善、细胞凋亡和增殖异常有关，而CDC25A与细胞凋亡密切相关，可能是其高表达水平能影响奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药性的主要原因。

综上所述，CDC25A基因表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM 分期相关，可反映胃癌临床病理特征，且与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药性密切相关。