小檗碱对利血平诱导的抑郁症小鼠行为学影响的实验研究

王晴 刘竞元 齐晓娟

[摘要]目的探討小檗碱对利血平诱导的抑郁症模型小鼠行为学变化的影响。方法将40只实验动物随机分为正常对照组、模型组、小檗碱组及氟西汀组，每组各10只。模型组、小檗碱组及氟西汀组小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理盐水配制），正常对照组每日腹腔注射等量的生理盐水，每组小鼠连续注射4周。造模4周后采用灌胃法给药，每天1次，共21 d。小檗碱组190 mg/kg灌胃;氟西汀组3 mg/kg灌胃;正常对照组和模型组每天给予同体积蒸馏水灌胃。采用强迫游泳、悬尾及高架十字迷宫实验法观察小鼠的行为学变化。结果与正常对照组比较，模型组的悬尾不动时间及强迫游泳不动时间均明显延长（P<0.01）。与正常对照组比较，小檗碱组强迫游泳不动时间缩短（P<0.05）。与模型组比较，小檗碱组的悬尾不动时间及强迫游泳不动时间均缩短（P<0.05）;氟西汀组的悬尾不动时间及强迫游泳不动时间均明显缩短（P<0.01）。与正常对照组比较，模型组开臂区进入次数明显减少（P<0.05）;与模型组比较，氟西汀组开臂区进入次数明显增多（P<0.01）。与正常对照组比较，模型组开臂区滞留时间明显缩短（P<0.05）;与模型组比较，小檗碱组开臂区滞留时间明显延长（P<0.01），氟西汀组开臂区滞留时间明显延长（P<0.01）。结论小檗碱具有抗抑郁作用。

[关键词]小檗碱;抑郁症;小鼠;行为学

[中图分类号]R285.5    [文献标识码]A    [文章编号]2095-0616（2022）05-0023-04

Experimental study of the effect of berberine on behaviors of mice with reserpine-induced depression

WANG Qing    LIU Jingyuan    QI Xiaojuan

Staff Room of Physiology，Qiqihar Medical University，Heilongjiang，Qiqihar 161006，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of berberine on the behavioral changes in a mouse model of reserpine-induced depression. Methods A total of 40 experimental animals were randomly divided into the normal control group，the model group，the berberine group and the fluoxetine group，with 10 mice in each group. The mice in the model group，the berberine group and the fluoxetine group were intraperitoneally injected with 200 mg/kg reserpine （prepared in normal saline）every day，the normal control group was intraperitoneally injected with the same amount of normal saline every day，and the injection in each group lasted for 4 weeks. After 4 weeks of modeling，the drug was administered by gavage once a day for 21 days. The berberine group was given 190 mg/kg by gavage;the fluoxetine group was given 3 mg/kg by gavage;the normal control group and the model group were given the same volume of distilled water by gavage every day. The behavioral changes of mice were observed by forced swim test （FST），tail suspension test （TST）and elevated plus-maze test. Results Compared with the normal control group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the model group were significantly longer （P<0.01）. Compared with the normal control group，the immobility time of forced swimming in the berberine group was shortened （P<0.05）. Compared with the model group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the berberine group were shorter （P<0.05）;the immobility time in TST and immobility time in FST in the fluoxetine group were significantly shorter （P<0.01）. Compared with the normal control group，the number of entries into the open arms in the model group was significantly reduced （P<0.05）. Compared with the model group，the number of entries into the open arms in the fluoxetine group increased significantly （P<0.01）. Compared with the normal control group，the time spent in the open arms in the model group was significantly shorter （P<0.05）. Compared with the model group，the time spent in the open arms in the berberine group was significantly longer （P<0.01）;and the time spent in the open arms in the fluoxetine group was significantly longer （P<0.01）. Conclusion Berberine has antidepressant effects.

[Key words] Berberine;Depression;Mouse;Behavior

抑郁症是一种常见的精神障碍性疾病，以显著而持久的情绪低落为主要临床表现，严重者会出现悲观厌世的情绪和自杀行为，患者自杀率高达12%～14%[1]。近年来由于人们生活和工作压力的增大，该病发病率逐年上升且发病人群越发广泛，严重影响人们的身心健康[2]。在临床上，抑郁症还会继发或伴发其他疾病，甚至会在一定程度上加重其病情[3-4]。因此，人们对抑郁症的治疗越来越重视。西药治疗抑郁症主要选用丙咪嗪、氟哌噻吨美利曲辛片及新型抗抑郁焦虑药物盐酸帕罗西汀等，但存在禁忌证多、成瘾性大、副作用明显、停药后易复发、有效率较低、患者依从性较差等问题[5-6]。因此，研究者将研究重点逐渐聚焦在具有广阔前景的植物药领域，特别是我国传统的中药领域，当前研究并开发安全且有效的抗抑郁中草药已成为研究者的共识，是目前一个新的研究热点[7]。本实验研究了中药小檗碱对小鼠抑郁症模型行为学改变的影响，为临床抑郁症的治疗探讨新思路并提供相应的数据支撑。

1    材料与方法

1.1    实验动物

40只清潔级ICR小鼠，购于哈尔滨医科大学实验动物部，动物许可证号为SCXK（黑）2013-001，雌雄各半，体重（20.45±2.23）g，所有实验动物均饲养在齐齐哈尔医学院实验动物中心，动物许可证号为SYXK（黑）2016-001。所有小鼠均自由进食和饮水，分笼饲养，每日日光灯照明时间为12 h，温湿度条件分别为（22.32±2.16）℃和40%～60%，实验动物的使用严格遵循3R原则。

1.2    试剂与仪器

利血平注射液购自天津金耀药业有限公司（国药准字H12020905），盐酸小檗碱购自武汉远成共创科技有限公司，盐酸氟西汀片购自礼来苏州制药有限公司（国药准字J20080016），高架十字迷宫为成都泰盟科技有限公司生产。

1.3    方法

将实验动物随机分为正常对照组、模型组、小檗碱组及氟西汀组，每组10只，每组小鼠适应性喂养3 d后造模，正常对照组小鼠每日腹腔注射等量的生理盐水，模型组、小檗碱组及氟西汀组小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理盐水配制），每组小鼠连续注射4周。造模4周后采用灌胃法给药，给药剂量按动物体重折算系数公式换算。氟西汀组3 mg/kg灌胃;小檗碱组190 mg/kg灌胃;每天给予模型组及正常对照组同体积的蒸馏水灌胃。每天1次，共21 d。

1.3.1    悬尾实验    将胶带粘住尾巴的小鼠倒挂于水平木棍上，保持小鼠头部与地面距离为5～6 cm，分别记录每只小鼠在实验6 min内的后4 min累积不动的时间。

1.3.2    强迫游泳实验    将小鼠置于高25 cm、直径18 cm柱形器皿内，内装有清水，温度保持在（25.00±1.00）℃，分别记录每只小鼠在实验6 min 内的后4 min累积不动的时间。

1.3.3    高架十字迷宫实验    测试前将待测小鼠置于一个鼠笼内，先任其自由探索5 min，然后迅速置于高架十字迷宫的中央平台处，使其头部正对其中任一开放臂，释放后即开始测试，每只小鼠测试5 min。取出小鼠后，用酒精棉球彻底擦拭箱底，待酒精完全挥发后，继续下一只小鼠的测试[8]。

1.4    统计学方法

2    结果

2.1    悬尾实验结果比较

由于实验过程中部分小鼠死亡，最终各组小鼠数量见表1所列。与正常对照组比较，模型组、小檗碱组及氟西汀组的悬尾不动时间明显延长，差异有统计学意义（F=7.080，P=0.001）;与正常对照组比较，模型组悬尾不动时间明显延长，差异有统计学意义（P=0.000），与正常对照组比较，小檗碱组悬尾不动时间延长，差异无统计学意义（P=0.275），与正常对照组比较，氟西汀组悬尾不动时间延长，差异无统计学意义（P=0.246）。与模型组比较，小檗碱组悬尾不动时间明显缩短，差异有统计学意义（P=0.005）;与模型组比较，氟西汀组悬尾不动时间明显缩短，差异有统计学意义（P=0.002）。见表1。

2.2    强迫游泳实验结果比较

与正常对照组比较，模型组、小檗碱组及氟西汀组的强迫游泳不动时间有明显改变，差异有统计学意义（F=11.916，P=0.000）;与正常对照组比较，模型组强迫游泳不动时间明显延长，差异有统计学意义（P=0.002），与正常对照组比较，小檗碱组强迫游泳不动时间缩短，差异有统计学意义（P=0.014），与正常对照组比较，氟西汀组强迫游泳不动时间缩短，差异无统计学意义（P=0.352）。与模型组比较，小檗碱组强迫游泳不动时间明显缩短，差异有统计学意义（P=0.000）;与模型组比较，氟西汀组强迫游泳不动时间明显缩短，差异有统计学意义（P=0.000）。见表2。

2.3    高架十字迷宫实验结果比较

与正常对照组比较，模型组、小檗碱组及氟西汀组开臂区进入次数有改变，差异有统计学意义（F=3.300，P=0.034）;与正常对照组比较，模型组开臂区进入次数减少，差异有统计学意义（P=0.023），与正常对照组比较，小檗碱组开臂区进入次数减少，差异无统计学意义（P=0.179），与正常对照组比较，氟西汀组开臂区进入次数增多，差异无统计学意义（P=0.726）。与模型组比较，小檗碱组开臂区进入次数增多，差异无统计学意义（P=0.366）;与模型组比较，氟西汀组开臂区进入次数增多，差异有统计学意义（P=0.009）。

与正常对照组比较，模型组、小檗碱组及氟西汀组开臂区滞留时间明显改变，差异有统计学意义（F=4.528，P=0.010）;与正常对照组比较，模型组开臂区滞留时间减少，差异有统计学意义（P=0.010），与正常对照组比较，小檗碱组开臂区滞留时间延长，差异无统计学意义（P=0.648），与正常对照组比较，氟西汀组开臂区滞留时间延长，差异无统计学意义（P=0.648）。与模型组比较，小檗碱组开臂区滞留时间延长，差异有统计学意义（P=0.005）;与模型组比较，氟西汀组开臂区滞留时间延长，差异有统计学意义（P=0.003）。见表3。

3    讨论

抑郁症是一种常见的精神类疾病，主要症状一般表现为长期情绪低落、思维迟钝、意志力缺乏，严重时可表现为自杀行为[9]。流行病学调查显示，抑郁症已经成为继冠心病之后影响人类健康的第二大类疾病，对人类的健康产生极大的危害，严重影响人们的日常生活及工作，因而受到越来越多的关注[10-11]。

行为学测试方法有很多种，目前常见且被多数学者公认的最标准的行为学测试方法是强迫游泳实验和悬尾实验，由Isingrini等[12]发明，这两种测试方法是通过记录动物在强迫游泳实验和悬尾实验中的相对客观指标即不动时间来量化反映动物在实验过程中的绝望程度[13]，因其实验操作简单以及条件容易控制，且多种抗抑郁药急性给药后其反应较为敏感，故常用于抗抑郁药物的初筛[11，14-15]。

此外，高架十字迷宫实验也是一种比较常见的评估动物行为学的测试方法。通常情况下，正常小鼠在实验中进入开放臂较进入闭合臂的次数更多、滞留时间也更长，表示其探索新环境的行为能力更强，而抑郁模型小鼠進入开放臂的次数及滞留时间较正常小鼠明显减少[16-17]。

小檗碱是中草药如黄连、刺檗、白毛茛等的根茎和皮中的重要成分之一，研究显示其具有多种药理作用，如抑菌、抗炎、抗病毒等，且对多种疾病具有较好的治疗作用，如肿瘤、糖尿病、心血管疾病、消化道疾病等[18-19]。目前多项研究表明小檗碱可显著缩短动物在强迫游泳实验中的不动时间，并具有抗焦虑作用，其作用机制可能与某些神经递质如单胺类神经递质及5-羟色胺受体等有关[7，20-23]。

本研究显示，小檗碱能明显缩短动物的强迫游泳及悬尾不动时间，与文献研究结果一致[20-22]。高架十字迷宫实验结果显示，与模型组比较，小檗碱组开臂区滞留时间更长，表明该实验组小鼠在行为上具有较强的探索新环境的能力，与文献研究结果一致[23]。但模型组与小檗碱组开臂区进入次数比较，差异无统计学意义（P>0.05），可能与本研究观察的动物数量有限有关，今后应扩大研究动物数量，进一步观察小檗碱的抗抑郁效果。

综合所述，提示小檗碱在利血平诱导的抑郁模型小鼠中有抗抑郁作用，其作用机制有待进一步研究。

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