胶体层析法、酶联免疫吸附实验法应用于艾滋病病毒抗体初次筛查中的研究价值

谢 芳

（贵阳市疾病预防控制中心检验科，贵州 贵阳 550003）

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是一种危害性极大的传染病，由艾滋病病毒（HIV）感染引起，HIV是一种主要攻击人体免疫系统的病毒，其将人体免疫系统中最重要的T淋巴细胞作为攻击目标，大量破坏免疫细胞，使人体免疫功能低下，导致感染各种疾病，也有引发恶性肿瘤的风险。HIV抗体检测是目前诊断AIDS患者感染HIV的重要诊断依据，以往临床上主要应用免疫印迹法、胶体层析法、明胶吸附实验等方法检测HIV，其中免疫印迹法常作为临床检测的金标准，其是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术，具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定与病毒的抗体或抗原检测等，但该检测方法试剂成本昂贵，难以进行大范围的HIV抗体筛查，存在一定局限性[1-2]；胶体层析法应用较多，操作迅速、简单，适合初次筛查，但有学者指出，该方法检测的特异度较低，易导致漏检，对不确定样本需复检[3]。酶联免疫吸附实验法是目前临床实验室检测免疫学指标最受欢迎、应用范围最广泛的方法之一，被广泛应用于乙肝、丙肝、梅毒、AIDS及结核等传染类疾病的诊断与激素的检测，具有灵敏度高、特异性强、快速简便、成本低、环保且适合大批量人群筛查等优点[4-5]。因此，本研究旨在探讨胶体层析法、酶联免疫吸附实验法在HIV抗体初次筛查中的应用，并分析其对HIV感染的诊断价值，为临床诊断与合理治疗AIDS提供指导，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析贵阳市疾病预防控制中心利用全国艾滋病实验室检测管理系统收集的2020年9月至2021年9月贵阳市的308例疑似AIDS检测者的临床资料。其中男性222例，女性86例；年龄23～54岁，平均（38.28±4.20）岁。纳入标准：与HIV携带者有性接触者；所有检测者均为初次筛选；临床资料完整者等。排除标准：已接受抗HIV治疗者；合并其他血液系统疾病、免疫系统疾病、肝、脑、心等脏器功能衰竭者；已确诊为HIV感染者等。本研究已通过贵阳市疾病预防控制中心医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 主要仪器 全自动蛋白印迹仪（新加坡健利检验诊断有限公司，型号：AutoBlot System-20）；酶标分析仪（深圳市汇松科技公司，型号：MB-580）；全自动酶标洗板机（深圳市汇松科技发展有限公司，型号：PW-960plus）。

1.2.2 检测方法 采集所有检测者空腹静脉血5 mL，离心（3 000 r/min的转速，时间10 min）后取血清，于-20 ℃环境中储存待检。①胶体层析法：将标本恢复至室温，取60 μL检测样本（微量加样器），置于试剂卡加样处，在30 min内得到检测结果。应用免疫层析原理，对HIV1+2抗体进行定性检测，血样中若存在HIV1+2抗体，则硒胶体- 抗原则会结合HIV1+2抗体。阳性判断：检测区、对照区均有紫红色条带；阴性：仅对照区可见紫红色条带。②酶联免疫吸附实验法：选择HIV1+2抗原、HIV1+2包被的微孔板，应用过氧化物酶标记，按照说明书完成HIV1+2抗体检测。取出酶标板，分别设置1孔样品、1孔空白对照、2孔阴性对照、3孔阳性对照，除空白孔外，每孔分别加100 μL阳性、阴性对照品、样品。实验步骤：孵育30 min，反复洗板6次，干燥。除空白孔外，每孔分别加100 μL酶标记抗原，孵育20 min，反复洗板6次，干燥。加底物液，避光反应15 min，随后加终止液，读取酶标分析仪上吸光度（OD）值。阳性判断：样品OD值≥ 1，否则为阴性。③免疫印迹法[6]：阳性判断：至少有2条膜带（gP41/gP120/gP160）或至少1条膜带与P24带同时出现；阴性：无HIV抗体特异性条带出现。

1.3 观察指标 ①以免疫印迹法为金标准，分析胶体层析法、酶联免疫吸附实验法对HIV感染的检测结果、诊断效能。灵敏度 = 真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%，特异度 = 真阴性例数/（假阳性+真阴性）例数×100%，准确度=（真阳性+真阴性）例数/总例数×100%，阳性预测值 = 真阳性例数/（真阳性+假阳性）例数×100%，阴性预测值 = 真阴性例数/（真阴性+假阴性） × 100%。②通过酶联免疫吸附实验定量测定阳性样本带型分布情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件分析数据，其中计量资料、计数资料分别采用(±s)、[例(%)]表示，组间比较分别行t、χ2检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 酶联免疫吸附实验法与免疫印迹法 HIV感染308例检测者中免疫印迹法检测出HIV感染阳性有220例，阴性88例；酶联免疫吸附实验法检测出HIV感染阳性有219例，阴性89例，阳性检出率为71.10%（219/308），低于免疫印迹法阳性检出率的71.43%（220/308），但两组间比较，差异无统计学意义（χ2= 0.008，P＞0.05），见表1。

表1 酶联免疫吸附实验法与免疫印迹法检测结果( 例 )

2.2 胶体层析法与免疫印迹法 308例检测者中胶体层析法检测出HIV感染阳性有220例，阴性88例，阳性检出率为71.43%（220/308），与免疫印迹法阳性检出率71.43%（220/308）比较，差异无统计学意义（χ2= 0.000，P＞0.05），见表 2。

2.3 诊断效能 酶联免疫吸附实验法检测对HIV感染诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于胶体层析法检测，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表 3。

表3 两种检测方式的诊断效能比较(%)

2.4 酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布 酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布情况可见，219例AIDS患者中gP160、gP120带型出现率最高，出现率为100.00%，P55出现率最低，出现率为32.88%，见表4。

表4 酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布情况

3 讨论

HIV又被称为人类免疫缺陷病毒，HIV感染会引起各种机会性感染和肿瘤的发生，也会引发群众的恐慌心理，部分恶性并发症会对人的健康生活带来严重影响，甚至会威胁患者生命。近年来，我国AIDS发病率已经进入快速增长阶段，做好AIDS预防、控制工作刻不容缓[7]。因此，如何有效防控AIDS已经成为临床上关注的重点。与其他病原微生物检测相比，HIV检测的要求更加严格，任何微小的错误均可能造成检查结果误差，对受检者造成严重影响，因此，保证HIV检测的灵敏度与特异度非常重要[8]。免疫印迹法作为HIV抗体检测的金标准，检测技术准确率极高，但费用高昂，因此不适合作为广泛性筛查手段，而在选择初筛检测方法时，为降低成本支出，减少检测人员工作量，应尽量选择高准确度的HIV抗体初筛方法[9]。

胶体层析法、酶联免疫吸附实验法均是目前常用的HIV抗体初筛方法，其中，胶体层析法可对HIV抗体进行定性，其检测原理为HIV抗体与硒胶体- 抗原结合，可被合成肽、重组抗原捕捉固定，显示红线，该检测方法还具有检测费用低、需要设备少、反应快速等特点，胶体层析法对HIV抗体检测的检出率较高，可作为HIV筛查、风险评估的参考依据，但在应用胶体层析法检测时，也可能出现漏诊、误诊情况[10-11]。

酶联免疫吸附实验法对高、低值质控血清的HIV抗体检出率均处于较高水平，且能够显示带型分布，更适合作为HIV初次筛查手段，从其检测原理上看，主要是通过将HIV抗原包被于固相载体，然后加入酶标记HIV抗原后，再加入待检样品，通过底物显色，以酶标仪显示检测结果，其利用酶催化底物反应，形成放大效果，有效提高检测的灵敏度；由于该检测方法的稳定性较高，且受溶血因素影响较小，因此检测误差较小[12]。本研究结果显示，308例检测者中免疫印迹法阳性检出率为71.43%，酶联免疫吸附实验法阳性检出率为71.10%，胶体层析法阳性检出率为71.43%；酶联免疫吸附实验法检测的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于胶体层析法检测，表明酶联免疫吸附实验法应用于艾滋病病毒抗体初次筛查中的诊断价值更高。酶联免疫吸附实验法可在室温环境下完成，无需特殊设备，可一次性检测多个样本，操作简单，更适合广泛性筛查；此外，通过酶标仪读取数据，降低温度、标本处理等因素对检测结果的影响，也能够提高酶联免疫吸附实验法检测结果的客观性、准确性及科学性。相关研究显示，采用酶联免疫吸附实验法经过初次筛选，结果显示2 875份标本呈阳性份27份，阳性概率为0.94%，对27份标本进行实验室确认，其中，确定为阳性份的17份，占原本阳性份62.96%；不确定份4份，占23.53%；阴性份6份，占22.22%，提示酶联免疫吸附实验法运用于艾滋病检验中HIV抗体筛查效果较好，但是为了保证准确率，应该规范操作，同时选取合格标本，保证试剂质量，充分降低假阳性率[13]。本研究结果显示，酶联免疫吸附实验法检测的219例阳性病例中，gP160、gP120带型出现率最高，出现率为100.00%，P55出现率最低，出现率为32.88%，说明HIV在gP160、gP120带型人群中较为活跃、传染性较强，对此类人群需加强HIV监测。

应注意的是，虽然酶联免疫吸附实验法检测价值高，但也存在假阳性、假阴性情况，可能与实验操作繁琐、类风湿因子、人为因素及环境因素干扰等有关[14]。相关标本干扰因素主要包括以下方面：①内源性干扰因素，即高浓度非特异性免疫球蛋白、补体、类风湿因子等。处理方法为，在标本采集后，可用0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液稀释，在56 ℃温度下灭活30 min。②外源性干扰因素，即标本采集、送检、保存过程中因人为或环境因素引起的污染、溶血、存储时间过长、加入抗凝物质不当、凝集不全等。处理方法为，严格按照说明书及无菌操作执行相关操作，避免过度剧烈震荡，防止溶血；待其凝固或血块收缩后进行离心处理，立即检测标本。

综上，与胶体层析法相比，酶联免疫吸附实验法在HIV抗体初次筛查中诊断价值更高，可用于临床HIV抗体初次筛查。