桂蚕8号亲本不同时间点交配产卵即浸试验初探

韦红群，兰艳妮，于永霞，蒙雪姣，吴婧婧，欧冰冰，陆俣伽，赖艳梅，梁思思

（1.广西壮族自治区蚕业技术推广站，南宁市 530007；2.广西田园生化股份有限公司，南宁市 530007）

桂蚕8号是广西蚕业技术推广站育成的新品种，属亚热带型夏秋用抗病四元杂交种，于2020 年6 月通过省级品种审定委员会审定［1］，是广西计划重点推广的家蚕品种，具有抗血液型脓病强、茧质优、产量高、强健好养的特点，深受蚕农喜爱。据统计，截至2021年6月底，广西累计推广该品种50万张左右，售茧收入8.5亿元［2］。广西大力推广和饲养桂蚕8号并产生了较高的经济收益，使得该品种的蚕种供不应求，蚕种生产企业经常需要进行大批量的即时浸酸，以满足市场的需求。

蚕种催青必须先经过人工孵化处理技术，目前使用最广泛的方法是盐酸孵化法，也是最具实用性、效果最佳的人工孵化法［3］。浸酸中重要的3 个因素分别为盐酸液温、浸酸浓度和浸酸时长，据研究，这3个因素中，蚕种对盐酸液温的变化最为敏感，浸酸时长及浸酸浓度的安全使用范围较宽［4］。在浸酸过程中，3个关键因素相互制约且各有其安全范围［5］。而浸酸后蚕种孵化情况除了跟浸酸的3 个重要因素相关外，还受到浸酸适期的影响。宋仕琦［6］的研究表明，即时浸酸适期与蚕种的孵化及死卵的发生有密切的关系，在适期范围内浸酸能获得良好的孵化率。生产上通常以产卵后的保护温度、经过时间长短及卵色变化来确定品种的浸酸时期。即时浸酸是一项成熟的技术，主要是在蚕卵产下后一定时期，按照中系品种、日系品种的不同浸酸技术规程［7］进行浸酸处理，可以达到实用孵化率的要求。即时浸酸技术要求高，受蚕种产卵时长、保护条件及温湿度等条件的影响制约，在生产上因即时浸酸处理不当导致蚕种孵化不齐甚至不孵化的事故时有发生，给蚕种企业造成巨大的损失。对于即时浸酸适期范围，余武昌等［8］的研究表明浸酸适期范围不仅与保护时间和保护温度相关，还应结合卵色和积温进行综合考虑。桂蚕8号的即时浸酸处理，仅按照中系和日系品种的不同，设定不同时长的浸酸方法，对于单个品种的浸酸技术特点并无针对性的试验，并且对于各个品种在实际生产上常出现不同保护时间或者不同冷藏时间等情况，而单一采用中系和日系品种的区分进行浸酸，所获得的蚕种孵化效果并不理想，有时甚至会出现浸酸死卵多、蚕种孵化率低及孵化不齐等现象，严重影响了蚕种的出库收蚁计划。桂蚕8号是新品种，该品种的即时浸酸标准是否适用两广二号的标准，还需要进行试验论证。本研究以两广二号原原种中系和日系的即时浸酸技术要求为参照，设计桂蚕8号不同交配时间点所产的蚕卵的即浸试验，初步探索孵化桂蚕8号亲本的原原种即时浸酸标准，以期更好地掌握桂蚕8 号亲本原原种的即时浸酸特点，完善新品种良种扩繁配套技术，加快优质新品种的示范应用。

1 试验时间和地点

1.1 试验时间

2020年7—8月。

1.2 试验地点

广西壮族自治区蚕业技术推广站原种场及冷库。

2 试验材料与方法

2.1 试验材料

桂蚕8号亲本原原种锦、绣、壮、丽蚕蛾（锦、绣为中系品种，壮、丽为日系品种），由广西壮族自治区蚕业技术推广站原种场提供。

2.2 试验方法

2.2.1 制种处理 选取2020 年春制桂蚕8 号亲本锦、绣、壮、丽4 个品种的即将羽化的蚕蛹，统一在早上5：00 进行感光，6：30 盛出蛾时选取新鲜羽化的蛾。共设6个处理，按照每个处理有21只蛾，每个处理设置3个重复的方法设计试验，各样本的处理方法如表1所示。

表1 各样本的不同处理方法

2.2.2 即浸处理 收种后蚕种统一放入温度为25 ℃、湿度为75%～85%的保护室中进行保护，直至收种当日下午15：00 进行即时浸酸处理。统一按照盐酸浓度4.54 mol/L、温度46.0～46.5 ℃的条件进行浸酸处理。其中，中系品种浸酸时长分别设为270 s、330 s、390 s，日系品种浸酸时长分别设为300 s、360 s、420 s。

2.2.3 调查方法 浸酸后的蚕种放入温度25 ℃、湿度80%～85%的环境中进行催青，调查各个处理的蚕种发育情况以及孵化成绩。

2.2.4 分析方法 通过SPSS 25.0 软件对各品种交配至浸酸的时长（因素A）和浸酸时长（因素B）作双因素方差分析，并进行多重比较。因素A（各梯度用A1～A6表示）和因素B（各梯度用B1～B6表示）对应的时间如表2 所示，中系品种浸酸时长对应的梯度为B1～B3，日系品种浸酸时长对应的梯度为B4～B6。

表2 双因素所对应的时长

3 结果与分析

3.1 锦的孵化成绩统计与分析

3.1.1 锦的孵化成绩调查结果 从表3 可看出，各处理中锦的两日孵化率成绩都很高，均超过90%，除了处理4和处理5的浸酸时长为270 s的蚕种孵化率未达到实用孵化率标准（92%）以外，其他处理的蚕种孵化率都高于92%；未孵化的蚕种除了不良卵之外，浸酸死卵也较少。处理3 组合为9：00 进行交配产卵，蚕种孵化率成绩最高，3个浸酸时长（270 s、330 s、390 s）的蚕种孵化率分别为98.65%、99.30%、98.62%。从催青调查情况来看，未孵化的蚕种中，浸酸时长为270 s的蚕种未见有浸酸死卵现象，孵化后第4 d 观察还可看到转青蚕卵，证明蚕种还能孵化，只是浸酸刺激还不够，时长稍不足；浸酸时长为360 s的条件下，蚕种死卵现象增加，特别是孵化后第3 d出现扁死、瘪死、黑死现象，证明浸酸时间偏长刺激稍微偏大。

表3 锦的孵化率调查结果

3.1.2 两日孵化率的双因素方差分析和多重比较结果 对锦的两日孵化率的数据进行方差分析，从表4 可知，因素A 存在极显著差异，因素B 存在显著差异，即锦在交配至浸酸时长不同以及浸酸时长不同条件下的孵化率成绩均存在显著差异。再对两个因素开展多重比较分析，由表5 可知，交配至浸酸时长不同的蚕种孵化率成绩由高至低排序为A3＞A6＞A2＞A1＞A4＞A5，其中，A3的蚕种孵化率平均值高达98.86%；浸酸时长不同的蚕种孵化率成绩排序为浸酸330 s＞390 s＞270 s，其中浸酸330 s 的蚕种孵化率平均值达96.38%。综合以上结果，锦的最佳处理组合为A3+B2，即早上9：00交配，即时浸酸时长为330 s。

表4 锦的两日孵化率双因素方差分析

表5 锦的两日孵化率多重比较

3.2 绣的孵化成绩统计结果与分析

3.2.1 绣的孵化成绩调查结果 孵化成绩见表6，从绣在浸酸时长不同条件之间的孵化成绩比较可知，每组处理均发现浸酸330 s的蚕种孵化率成绩最高，当浸酸时长延长到390 s 时，孵化率成绩下降明显，通过催青调查发现未孵化的蚕种中部分存在浸酸死卵现象。通过试验观察产卵过程，发现绣的产卵高峰在晚上19：30～22：30，至24：00 产卵基本结束，因此绣的各个处理样本浸酸时的卵龄约为16～20 h，蚕种卵龄偏小，浸酸时容易发生扁死卵。从各个样本间的数值观察可知，绣在处理3的3个不同浸酸时长条件下的蚕种孵化率都超过90%，孵化成绩最好。

表6 绣的孵化率调查结果

3.2.2 双因素方差分析和多重比较结果 对绣的两日孵化率进行方差分析的结果见表7。浸酸时长不同的蚕种孵化率有显著差异，交配至浸酸时长不同的蚕种孵化率无显著差异。双因素多重比较结果见表8，孵化率由高到低依次为A3＞A5＞A4＞A6＞A1＞A2，其中A3的蚕种孵化率平均值达到94.39%，其他处理的蚕种孵化率都低于90%；不同浸酸时长条件下的蚕种孵化率由高至低为浸酸330 s＞浸酸270 s＞浸酸390 s。综上可知，绣的最佳处理组合为A3+B2，即早上9：00交配，即时浸酸时长330 s。

表7 绣的两日孵化率方差分析

表8 绣的两日孵化率多重比较

3.3 壮的孵化成绩统计结果与分析

3.3.1 壮的孵化率调查结果分析 表9 的结果显示，壮的两日孵化率除了处理4 的浸酸时长为360 s条件下的蚕种孵化率超过92%外，其他处理的蚕种孵化率都未达到实用孵化率标准（92%）。催青后，通过对未孵化的蚕种进行调查，发现死卵率随着浸酸时长的增加而增大，即死卵率表现为浸酸420 s＞360 s＞300 s。试验中观察壮的产卵时期的特点，发现壮的产卵高峰时间为晚上19：30～22：30，至24：00产卵基本结束，即时浸酸时间点为收种当日15：00，壮的即时浸酸的卵龄约为16～20 h，大部分蚕种卵龄偏小，当浸酸时间延长后，发育晚的卵龄小的蚕种出现浸死的现象比较明显；此外，试验中通过对蚕蛾产卵状态的观察，发现其交配时容易出现散对现象，交配时间长短不一，易导致蚕种卵龄开差过大，蚕卵种龄不齐，使浸酸处理难度增大，浸酸后期死卵增多。

表9 壮的孵化率调查结果

续表9

3.3.2 两日孵化率双因素的方差分析及多重比较 结果由表10 可知，浸酸时长不同的蚕种两日孵化率有极显著差异，交配至浸酸时长不同的蚕种孵化率则无显著差异，即壮在不同的时间点进行交配产卵的孵化成绩结果不显著，原因在于不论什么时间点交配，所有处理的蚕种都会待到下午17：00才开始产卵，跟交配时间点无显著相关性；由表11 可知，交配至浸酸时长不同的蚕种孵化率进行比较，A4的孵化率平均值最高，达到96.98%，A1最低，仅为72.66%，孵化 率由高至低为A4＞A2＞A3＞A6＞A5＞A1；对浸酸时长不同的蚕种孵化率进行比较，孵化率由高至低为浸酸360 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s。综合以上结果，壮的最佳组合为A4+B5，即早上10：00 交配，浸酸时长360 s。

表10 壮的两日孵化率方差分析

表11 壮两日孵化率多重比较

3.4 丽的孵化成绩统计结果与分析

3.4.1 丽的孵化成绩调查结果 通过试验结果显示，丽不论是在产卵表现还是浸酸孵化成绩上都表现很好，具体为产卵齐一、卵面整齐、卵质均匀、很少出现卵龄开差等情况；浸酸的范围也比较宽松，浸酸死卵现象较少，孵化率高。由表12可知，试验中所有处理的两日孵化率都超过92%。其中处理3 的蚕种孵化率最高，3 个不同浸酸时长（300 s、360 s、420 s）条件下的蚕种孵化率分别达到96.45%、98.28%、96.12%。浸酸时长为420 s 的条件对丽的孵化影响也比较小，最低的孵化率达到94.57%，证明适宜浸酸的时间范围较广。

表12 丽的孵化率调查结果

3.4.2 双因素方差分析及多重比较结果 丽的两日孵化率的方差分析结果和多重比较结果见表13及表14，浸酸时长不同的蚕种的两日孵化率有极显著差异，交配至浸酸时长不同的蚕种的两日孵化率有显著差异；比较交配至浸酸不同时长的蚕种孵化率，由高至低排序 为A3＞A1＞A2＞A4＞A5＞A6，最低的两日孵化率达到95.05%，最高的两日孵化率达到96.95%；比较浸酸不同时长的两日孵化率，从高到低排序为浸酸360 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s，浸酸360 s的蚕种两日孵化率平均值高达97.54%，浸酸300 s的蚕种孵化率为95.29%，浸酸时长为420 s条件下的蚕种孵化率为95.22%。综合以上结果，丽的最佳组合为A3+B5，即早上9：00交配，浸酸时长360 s。

表13 丽的两日孵化率的方差分析

表14 丽的两日孵化率的多重比较

4 小结

本次试验中通过观察记录各品种的产卵特点规律，结果如表15所示，锦和丽在投蛾后10 min左右开始产卵，绣和壮则待到下午17：00后开始产卵，4个品种的产卵开始时间表现差别大；锦和丽的快速产卵期为14：00～18：00，绣和壮稍晚。4个品种的产卵结束时间情况为，锦和丽一致，绣和壮一致。锦和丽的产卵时长为8～11 h，绣和壮的产卵时长较短，为6～7 h。

表15 各品种的产卵规律特点

各品种的产卵特性差异主要表现在：绣和壮两个品种不论在哪个时间点交配，都会待到下午17：00后才开始产卵，19：00 左右进入高峰期；锦和丽两个品种在投蛾后不久即产卵。绣和壮的产卵时间相对短而密集，盛产卵的速度快，24：00基本产卵结束，产卵时长6～7 h；锦和丽有两个时间段的产卵高峰期，投蛾后集中产卵1.0～1.5 h后产卵速度放慢，再经过1 h左右进入第二次快速产卵时期；产卵跨时相对长，不论是11：00 投蛾还是16：00 投蛾，至晚上22：00 产卵基本结束，产卵时长为8～11 h。各品种产卵的速度由高至低排序为丽＞锦＞绣＞壮，蚕种的产附情况表现为丽和绣卵量足，卵面平整，锦次之。壮则蛾圈不完整，卵面不齐，蚕种排列较散，卵量少，可能与交配时散对现象严重有关。

浸酸结果显示，锦和丽的整体表现比较稳定，设置的3 个不同浸酸时长条件下的蚕卵孵化成绩都很理想，死卵情况较少，浸酸适宜时间范围比较广，浸酸时长为270～420 s，催青时的孵化率都超过90%，绣和壮的孵化率远远低于锦和丽。根据各处理的孵化成绩，本次试验中在不同交配时间点对产卵效果、孵化成绩的影响下，各品种表现最优的组合为：锦于早上9：00 交配，浸酸时长为330 s；绣于早上9：00 交配，浸酸时长为330 s；壮于早上10：00 交配，浸酸时长为360 s；丽于早上9：00 交配，浸酸时长为360 s。

5 讨论

本次试验中，锦和丽的孵化成绩最好，基本能达到蚕种生产上要求的实用孵化率标准92%以上，绣和壮的孵化率大部分都低于92%，原因可能为这两个品种不论什么时间点交配，母蛾都待到当天17：00左右开始产卵，产卵时间短而集中，产卵后到即浸所经过的时间较短，导致卵龄偏小。浸酸时难以把握标准，当浸酸时间过长，浸酸死卵就增多明显，与试验结果表现一致。方差分析结果显示，这两个品种的两日孵化率跟交配时间点差异不显著，表示蚕种孵化率跟交配时间点没有关系，跟产卵后至浸酸的时间段即蚕种的卵龄有关，证明即时浸酸的蚕种孵化效果受产卵时间的先后、浸酸时间的长短等因素的影响，因此生产上应当注重制种关键技术，在种茧保护时期注意保护室的光线昼夜分明，促使发蛾统一集中，盛产期一致，缩小卵龄开差。即时浸酸时根据各个品种的产卵习性结合蚕种的保护时间及卵色判定浸酸适期，方可达到理想的孵化效果。

本次试验存在一定的局限性，在统计未孵化率时，对死卵率没有做具体的数值统计。试验参考因素比较单一，孵化后的蚁蚕24 h 疏毛率及72 h 绝食生命力等强健性还有待进一步的试验研究。此外，试验的样本数量相对少，得出的试验结果仅代表本次试验的结果，可能与实际生产有差异，是否具有代表性需要更多批次更多样本的试验数据进行论证。