HPLC法测定金泽冠心胶囊中泽泻醇B-23-乙酸酯的含量

万 能

（湖南食品药品职业学院，湖南长沙 410208）

金泽冠心胶囊其功能与主治为增加心肌营养性血流、降低心肌耗氧量和调节血脂的作用，用于冠心病、心绞痛和高脂血症。由泽泻和雪胆两味中药材组成，处方中君药泽泻，中国药典2015版标注为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis（Sam.）Juzep.的干燥块茎，味甘、淡，性寒，归膀胱、肾经；功效为利水渗湿、泄热；常用于水肿胀满、小便不利、尿少、泄泻、眩晕、痰饮、热淋涩痛等症状；现代化学研究表明泽泻中主含的三萜类成分为泽泻醇B-23-乙酸酯、泽泻醇B-24-乙酸酯，它们均具有抗脂肪肝及保肝、利尿、降血脂等作用。收载于《部颁中药成方制剂》第十一册中，原标准中无含量测定，由于泽泻中泽泻醇B-23-乙酸酯的含量较高，故选择泽泻醇B-23-乙酸酯为含量测定指标建立金泽冠心胶囊含量测定方法，来有效控制中成药金泽冠心胶囊的内在质量，为其制剂质控标准提供依据。

1 仪器设备与试药

1.1 仪器设备

高效液相色谱仪 SPD-10A（日本岛津）；AP 250D电子天平（上海奥豪斯国际贸易有限公司）；N3000色谱工作站（浙江大学智能工程有限公司）；超声波清洗器（功率300W，频率40kHz），KQ-300 型（苏州昆山仪器有限公司）。

1.2 试药

泽泻醇B-23-乙酸酯对照品（含量98.5%，上海海灿生物科技有限公司，批号：ZX20190504）；金泽冠心胶囊由重庆市中药研究院制药厂提供。除乙腈为色谱纯，水为纯化水外，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱检测条件

色谱柱为Hypersil ODS2（4.6×200mm，5µm大连依利特），流动相为乙腈-水（70∶30），流速1.0mL/ min，检测波长210nm，柱温30℃，进样量10µl。

2.2 对照品（泽泻醇B-23-乙酸酯）溶液的制备

精密称取泽泻醇B-23-乙酸酯对照品适量（五氧化二磷减压干燥24h），加乙醇，制成每1mL含0.4mg的溶液，振摇即得。

2.3 供试品（溶液的制备）

取金泽冠心胶囊20粒的内容物，准确称定重量，于研钵中研细，再精密称定重量约1g，置磨口具塞锥形瓶中，准确加入50mL乙醇，用磨口塞密封，称重，再超声处理（频率40kHz，功率300W，）30min，放冷后，再精密称定重量，用乙醇补足减失的重量，振摇均匀，再过滤，取续滤液，即得金泽冠心胶囊供试品溶液。

2.4 阴性（无泽泻的金泽冠心胶囊）溶液的制备

取按处方比例配制的除泽泻外的金泽冠心胶囊20粒，照上述供试品溶液制备的方法制备，即得阴性对照液。

2.5 专属性实验

分别准确吸取上述对照品溶液和供试品溶液及阴性溶液各10µL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱检测条件测定，记录色谱图，结果见图1，结果显示：在上述的色谱条件下，泽泻醇B-23-乙酸酯完全达到基线分离，与邻峰分离度大于1.5，按泽泻醇B-23-乙酸酯计算理论板数为14 089；阴性溶液色谱图中在与泽泻醇B-23-乙酸酯对照品色谱峰相应位置上无峰，表明该方法专属性强，阴性溶液无干扰。

图1 金泽冠心胶囊HPLC图

2.6 提取溶剂的选择

取金泽冠心胶囊20粒的内容物，准确称定重量，于研钵中研到所需要求，准确称取1g，共2份，两份均精密称重，分别置具塞磨口锥形瓶内，编取标号为①及②，编号①加入50mL甲醇，50mL乙醇，分别精密称定重量，再超声处理（频率40kHz，功率300W）30min，放冷却，再准确称重，分别用乙醇补足编号①和编号②减失的重量，振摇，滤过，取续滤液，即得。另精密称取以五氧化二磷减压干燥24h的对照品泽泻醇B-23-乙酸酯适量，加乙醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。精密吸取上述提取溶液及对照品溶液各10µL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；以主峰面积，按外标法计算，结果见表1，结果表明：本品采用乙醇作为溶剂较好。

表1 提取溶剂考察结果表

2.7 提取方法考察

取20粒金泽冠心胶囊的内容物，精密称重，研细研匀，称准确取约1g，共制成2份，标签号为①和②，将编号①及编号②精密称重，置具塞磨口锥形瓶中，在编号①②中均加入50mL乙醇，准确称定重量，标号①超声处理（功率300W，频率40kHz）提取30min，标号②回流提取30min，放冷到完全冷却，再精密称定重量，用乙醇补足标号①②减失的重量，振摇摇匀，过滤，取续滤液，即得。另精密称取泽泻醇B-23乙酸酯对照品适量，其要求在五氧化二磷减压干燥24h方可称重，加乙醇制成每0.4mg/mL的溶液，即得对照品溶液。准确吸取上述溶液及对照品溶液各10µL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2，结果表明：样品回流30min含量与超声30min提取效果相近，由于超声提取操作简便，故选用超声提取方法。

表2 提取方法考察结果表

2.8 提取时间考察

取金泽冠心胶囊20粒的内容物，准确称定重量，研细研匀，精密称取1g，共制成3份，分别精密称定重量，置磨口具塞锥形瓶中，编号为①②③，在三个标号的锥形瓶中均加入50mL乙醇，分别精密称定重量，分别用功率为300W，频率为40kHz的超声处理，标号①超声处理20min、标号②超声处理30min、标号③超声处理40min，提取完成后分别放置冷却，再准确称定重量，用乙醇补足标号①②③减失的重量，过滤，取续滤液，即得。另准确称取泽泻醇B-23-乙酸酯对照品适量，条件必须是在五氧化二磷减压干燥环境下24h的对照品，加乙醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。精密吸取上述溶液及对照品溶液各10µL注入高效液相色谱仪，记录色谱图；以主峰面积，按外标法计算，结果见表3，结果表明：样品超声处理30min已提取完全。

表3 提取时间考察结果表

2.9 线性关系考察

精密称取泽泻醇B-23-乙酸酯对照品适量，加乙醇制成0.67mg/mL的溶液，分别准确吸取1、2、4、6、8µL注入高效液相色谱仪，依上述方法测定其峰面积，横坐标为进样量，纵坐标为峰面积，绘制其标准曲线，其回归方程为Y=1 213 111.85X-217 771.74，r=0.9999，结果表明：泽泻醇B-23-乙酸酯对照品进样量在0.67～5.36µg线性关系良好。

2.10 精密度试验

准确吸取同一份供试品溶液10µL注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定其峰面积，峰面积分 别 为2 890 450、2 872 349、2 887 121、2 852 438、2 846 079，2 837 982，计算得RSD为0.57%，说明本方法精密度较好。

2.11 溶液稳定性实验

分别精密吸取供试品溶液10µL，于0、1、2、4、8h内进样，测定其峰面积，结果见表4，RSD为0.70%，故供试品溶液在8h内基本稳定。

表4 稳定性实验结果

2.12 重复性试验

取190801批样品，按含量测定的方法，重复测定6次，平均含量为3.81mg/粒，RSD为0.78%，结果表明：该方法重复性较好。

2.13 回收率试验

取本品（190 801批：含量为3.81mg/粒）内容物适量，研细，取约0.5g，精密称定，共5份，分别精密加入泽泻醇B-23-醋酸酯对照品适量，编号为1、2、3、4、5，分别置磨口具塞锥形瓶中，准确加入25mL乙醇，用磨口塞密封，精密称定重量，均用频率为40kHz，功率为300W的超声器超声处理30min，提取完成后放置放冷，再分别精密称定重量，用乙醇补足五份各自减失的重量，振摇摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。另精密称取以五氧化二磷减压干燥24h的泽泻醇B-23-醋酸酯对照品适量，用乙醇制成含泽泻醇B-23-醋酸酯0.4mg/mL的溶液，作为对照品溶液。分别准确量取供试品溶液及对照品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，按上述方法测定，计算回收率，结果见表5。

表5 回收率测定结果

2.14 样品含量测定

取20粒金泽冠心胶囊内容物，精密称重，研磨研细，准确称取1g，称定重量，置具塞磨口锥形瓶中，准确加入50mL乙醇，用磨口塞密封，精密称定重量，再用功率为300W，频率为40kHz超声器超声处理30min，提取完成后自然冷却，再准确称定重量，用乙醇补足提取过程中减失的重量，轻轻振摇直至摇匀，过滤，取续滤液，即得。精密称取泽泻醇B-23-乙酸酯对照品适量，对照品要求：五氧化二磷减压干燥24h，加乙醇制成每1mL含0.4mg的对照品溶液，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10µL，注入高效液相色谱仪，测定结果见表6。

表6 金泽冠心胶囊样品含量测定结果

3 结论

泽泻为方中君药，主要含三萜类，还含有倍半萜及二萜类等成分，其中泽泻醇B-23-乙酸酯含量较高，故以泽泻醇B-23-乙酸酯为指标成分进行含量测定。在溶剂选择上，分别以甲醇、乙醇为提取溶剂，结果表明，乙醇对泽泻醇B-23-乙酸酯提取效率高，故以乙醇作为提取溶剂。