溶血对电化学发光微粒子免疫法检测胰岛素与C肽结果的影响

潘永康

[摘要]目的：分析溶血对采取电化学发光微粒免疫法测定胰岛素、C肽结果的影响。方法：选取81例糖尿病患者为研究对象，在空腹状态下采集血液，之后在口服葡萄糖耐量试验（OGTT）后0.5.h、1.h、2.h、3.h采集血清，之后进行标本溶血，对不同标本进行血清胰岛素、C肽的测定，比较检测结果的差异。结果：溶血前胰岛素与C肽的检测结果分别为（36.11±2.25）μU/mL、（6.51±0.51）ng/mL，溶血后分别为（30.14±2.35）μU/mL、（5.88±0.48）ng/mL，对比差异有统计学意义（P<0.05）;不同时间段标本血清胰岛素与C肽水平比较差异无统计学意义（P>0.05）;胰岛素的浓度同标本溶血以及放置时间呈现出负相关关系。结论：采取电化学发光微粒子免疫法测定糖尿病患者的胰岛素与C肽水平，若是标本发生溶血可引起检测结果的降低。

[关键词]溶血;电化学发光微粒免疫法;胰岛素;C肽

[中图分类号]R446.6.R587.1.

[文献标识码]A.

[文章编号]2096-5249（2022）03-0157-03

糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病，发病原因主要为机体胰岛素分泌不足或相对不足，胰岛素作用缺陷导致以高血糖为典型特征的代谢性疾病，若机体长时间处在高血糖状态容易引起多脏器功能损伤或者衰竭，因此对疾病尽早诊断及合理治疗有非常重要的意义[1]。研究显示胰岛素与C肽释放试验、口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test，OGTT）对诊断糖尿病有一定价值。其中胰岛素与C肽释放试验，常需要在不同的时间点采集血液，根据采集情况对测定结果进行综合分析，而为了确保测定结果的准确性，需要保证任意时间点的测定结果准确无误，确保判定结果的科学性及合理性[2]。而日常进行血生化检验工作中，存在诸多对检测结果准确性的影响因素，其中最常见的一种影响因素是溶血。标本溶血可导致红细胞破裂，造成多项检测结果的准确性差异改变，继而影响检测结果的准确性[3]。在研究分析溶血对电化学发光微粒子免疫法测定胰岛素、C肽结果的影响，报道如下。

1对象与方法

1.1研究对象

选取2020年1月至2021年3月在本院接受胰岛素与C肽释放试验检测的81例糖尿病患者为研究对象。男性50例，女性31例;年龄33～85（54.12±2.16）岁。

（2017年版）》[4]糖尿病相关诊断标准;（2）病例资料完整，精神意识良好，具备正常沟通交流能力。

排除标准：（1）合并严重肝肾功能损伤患者;（2）合并恶性肿瘤疾病患者;（3）精神疾病或者认知功能障碍患者;（4）依从性差患者。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂

罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪;胰岛素与C肽检测试剂盒，上海罗氏制药有限公司;真空采血管、一次性采血针，广州阳普医疗科技股份有限公司;离心机，北京白洋医疗器械有限公司。

1.2.2研究方法

在清晨空腹状态下，采集患者的肘静脉血液4mL到真空采血管，将这一时间点作为0h。进行OGTT试验，主要是饮用250mL含75g葡萄糖，在饮用后1h、0.5h、2h、3h均采集4mL的血液。将试管放在常温下15min，血液完全凝固后置入到离心机中，以3500r/min的速度离心5min，离心后的血清呈现淡黄色，肉眼未见溶血、黄疸及脂浊。每一例患者采集的五管血在集齐后同时上机进行检测。完成标本的测定后，即刻应用吸管吹打搅拌红细胞，实现人为溶血处理，然后将溶血的标本置入离心机中，以3500r/min的速度持续离心5min，观察溶血标本的离心血清呈现为纳入标准：（1）均符合《中国2型糖尿病防治指南淡红色，将标本即刻上机进行检测。81例患者的血液标本在溶血前后应用罗氏电化学发光免疫分析仪与配套试剂盒检测胰岛素与C肽，控制检测室内环境的温湿度适宜，使得测定结果满意。

为了避免标本质量对于检测结果的影响，肘静脉血液采集主要参照如下标准进行。（1）标本采集前准备。要求采血者需禁食12h，但是不能过度空腹，前一天晚上6～8点可正常进食，但注意避免饮酒及过量使用糖分及脂肪含量高的食物。准备好采血需要用到的器械，包括一次性注射器、一次性塑料试管、压脉带、真空采血管、碘伏、无菌棉签、抗凝管。（2）标本采集操作。仔细核对检验申请单、受检者的姓名，为受检者讲解操作目的以取得患者的配合，将标签贴在采血管上;选择受检者适合的血管，通常可选择肘窝静脉、肘正中静脉、前臂内侧静脉，穿刺部位肢体下可垫一次性垫巾以及压脉带;应用复合碘棉前对穿刺部位消毒处理，于静脉穿刺上4～7cm部位绑扎压脉带，指导受检者握紧拳头，充分显露静脉充盈情况;操作者采取真空采血方式，将静脉穿刺针上保护套摘掉予以静脉穿刺操作，成功穿刺后应用贴好的标签负压真空采集管采血，松开压脉带后囑咐患者松拳，用棉签压住进针部位并拔出针头。（3）标本采集后处理。采血完成后嘱咐患者应棉垫压疮穿刺部位，观察几分钟若是无不适可自行离开。

1.3观察指标

比较标本溶血前后的胰岛素与C肽检测结果。对0h、0.5h、1h、2h、3h的标本测定结果进行对比。对溶血或者时间因素干扰测定结果的情况进行评价，主要根据下面的共识评价溶血或者时间因素对于测定结果的影响：|F|=（X-X0）/X0。上式中的|F|表示溶血或者时间因素引起的误差;X表示溶血标本或者放置一定时间待测物的浓度;X0为非溶血血清待测物浓度。如果|F|>0.10主要是表示溶血干扰客观存在，而如果|F|<0.10则是表示溶血受轻微干扰，基本可以忽略不计。

1.4统计学方法

使用SPSS21.0软件做统计学结果分析。计量资料用（x±s）表示，使用t检验;计数资料用[n（%）]表示，使用χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1溶血前后标本检测结果

采集的血液标本，在标本发生溶血后，可见血清胰岛素与C肽检测结果降低，溶血前后检测结果比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2不同时间点检测结果

对不同时间采集的未溶血标本，血清胰岛素与C肽的检测比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3不同时间段不同溶血标本胰岛浓度

分析溶血程度与时间段的关系，显示标本溶血会让胰岛素浓度降低，溶血程度越大、标本放置时间越长，胰岛素浓度降低情况也更佳明显，胰岛素浓度测定同标本溶血程度、标本放置时间呈现负相关关系，见表3。

3讨论

胰岛素是一种多肽类物质，主要是在胰岛β细胞中合成，分子量为5700，由两条氨基酸肽链组成，胰岛素是引起糖尿病的直接因子，主要是胰岛素功能障碍可造成疾病发生及持续进展。胰岛素能直接或者间接的影响机体每个组织的功能，在糖代谢中的作用多种多样，包括抑制糖原分解以及糖异生，增加葡萄糖转运到脂肪和肌肉，增强脂肪以及肌肉中糖酵解并且刺激糖原的合成;胰岛素能明显增强脂肪、肌肉以及肝脏等组织部位糖原合酶活性水平，通过增强汤酵解通路使得骨骼肌与脂肪组织中糖酵解速率提高[6]。此外胰岛素也可以促进氨基酸转运肝细胞、骨骼肌以及成纤维细胞，明显增加核糖体数量以及翻译效益，抑制蛋白质的分解[7]。C肽则是胰岛素β细胞的分泌产物，同胰岛素一样存在共同前体胰岛素原。胰岛素前体可分解同等摩尔量的胰岛素、C肽，测定C肽可以评估胰岛β细胞的活性[8]。在胰岛素与C肽的特征上，胰岛素40%～50%是由肝脏灭活，半衰期大约是5min，对于C肽则不经过肝脏摄取但是却经肝脏清除，C肽的半衰期在30min以上，同时在波动幅度上更，因此在一些特殊的情况下，检测C肽更具有优势。

胰岛素与C肽的检测对于评估糖尿病及判定疗效有一定的价值。对胰岛素、C肽的测定，主要是采取联合释放试验，而在实际的检测工作上发现，实际的测定过程中常容易出现溶血的情况[9]。在胰岛素与C肽的试剂盒中就标明，若是标本存在溶血不能测定，需要重新进行标本的采集;放射免疫分析的方式报告时间长并且结果不稳定，并且还经常存在同位素污染的问题，这一检测方式也趋于淘汰;酶联免疫分析的方式虽然可以充分克服放射免疫分析中放射性污染的弊端，在使用的检测设备上简单以及操作安全，但是这种方式却依赖比色法以及偏振光法测定技术，存在的缺陷如光度测定范围广、灵敏度低、容易遗漏等，这样使得测定的方式在应用上受限[10]。电化学发光微粒免疫法则具有灵敏度高及特异性强的优点，检测应用的试剂也具备良好稳定性，测定的范围宽，仪器可以实现自动化，不会污染环境还可以消除常规荧光测定高背景的优点，属于非放射免疫分析中的优势测定方式[11]。本研究结果显示，在应用电化学发光微粒免疫法测定糖尿病患者的胰岛素与C肽上，溶血后在血清胰岛素与C肽的检测水平上明显低于溶血前，而空腹及OGTT不同时间采集的血液标本，在胰岛素与C肽的检测结果上比较差异无统计学意义;根据溶血对检测胰岛素的影响，显示溶血程度提供胰岛素的测定值呈现负相关关系。这一结果表明溶血可造成胰岛素与C肽测定结果偏低情况。分析原因主要是在标本出现溶血后，红细胞膜破裂时胰岛素降解酶释放到血清中，高效的分解胰岛素，随着溶血程度的增加胰岛素的检测浓度也不断降低[12]。而对于C肽而言，溶血对其水平的影响相关研究报道的结果不一，这主要同检测方式、检测仪器以及检测试剂等因素相关。

考虑到标本溶血对胰岛素与C肽测定结果的不良影响，应确保实验室获得合格的标本，便于及时、正确及有效的得出测定结果。首先是需要控制好标本采集的工作，按照规范进行采集，应加强对标本管理人员的培训，具体培训包括标本采集、标本处理及标本运送等，结合实际情况建立起完整规范的标本检测前处理流程，提高标本的合格率，对于出现溶血的标本应建立退回制度。实际中对于出现静脉条件差、多次静脉穿刺等引起的标本溶血情况，需要对患者进行解釋，告知采血困难的基本情况，避免患者出现恐惧以及不配合的情况，顺利的完成血液标本的采集。此外还需要正确分析溶血对检测结果的影响，按照检测的规范要求进行相关指标的测定，将测定的结果记录下来。单个分析研究结果，在肉眼下可见标本溶血引起胰岛素与C肽降低的情况，其中溶血对胰岛素的测定结果影响更加明显，这样影响医师的判断。

综上所述，标本溶血会影响电化学发光微粒免疫法测定血清胰岛素与C肽的结果，原因主要在于溶血后红细胞内降解酶存在，为避免对检测结果的影响，可考虑尝试在真空采血管内加胰岛素酶抑制剂，以确保测定结果的准确性。

参考文献

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（收稿日期：2021-09-19）