重组抗体药物的质量控制分析

刘净

摘要：重組抗体药物是一种新型的生物技术，它在治疗传染性疾病和肿瘤方面具有重要意义;在器官移植等领域取得了比较明显的效果，并已成为我国医药行业的重要组成部分。作为一种成功的生物制剂，其质量控制是人们所关心的问题。本文重点介绍重组抗体药物各个环节的质量控制。

关键词：重组抗体，药物，质量控制

在重组抗体药物的生产中，主要是细胞的培养;工程单元的构建与扩充;抗体的提纯，产品的包装，都是由生产部门负责的，这也是为了确保药品的安全和高效。鉴于许多药物生产工艺大同小异，因此本文着重从细胞、质量标准物质、质量控制等几个方面进行了探讨。

1 生产细胞方面的质量控制

1.1 建构工作细胞和细胞库

在相关资料的基础上，建立工作细胞，并确定构建的步骤和方法;另外，还要说明所需的培养条件、生产特点、匹配培养液的成分、所引入的目标基因的表达等。通过细胞库的建立，可以为重组抗体药物提供质量稳定、充足的细胞种子，确保其生产的一致性。细胞库的管理与建立档案相结合，每一个细胞都有自己的标签，例如名称、批号、代次、保存日期等。

1.2 细胞检定

1.2.1 鉴别细胞

目前有多种鉴定细胞的方法，如生物化学法、遗传学检测法，免疫检测法等，也可以结合上述方法一起使用。利用 PCR、 Southern杂交和限制性内切酶技术，结合细胞库，可以对最终细胞进行完整的鉴定。

1.2.2 检测病原微生物

主要检测目标为支原体，细菌;细胞内外的病毒，其检测方法取决于细胞的性质和类型。通常通过观察其形态、红细胞吸附实验、鸡胚法、细胞传代培养等来检测病毒。目前，我们正在研制的重组抗体药物，还需要在这一基础上，对细胞的采集和分离产物进行外源性因素的检测。

1.2.3 检查致瘤性

CHO等重组抗体的细胞系被检测出具有致瘤性，通常不需要重复检测，但也有专家认为，插入抗体等重组工程细胞是一种全新的细胞，有必要进行这项检查，并与传代试验进行比较，以确定肿瘤的致癌性是否发生了变化。

2 质量控制的标准物质

标准物质是一种相对稳定、单一的物质，是质量管理的一个重要环节，而其主要作用是由其分子的分子结构决定的，标准物质由两个方面组成，一是活性标准物质，二是理化标准物质。

2.1 理化对照品

它的结构是否合理，直接关系到其作用，而理化对照品是整个抗体质量控制的基础和先决条件，它可以简化传统的质量控制方法，而无需使用大量的仪器，只需对其进行分析、比较，就可以发现其成分是否有异常。

2.2 活性标准品

生物学活性测定标准品，要求性质稳定，材料均匀，赋值准确。通常，这种标准物在配制时，需要某些辅助材料，例如稳定剂或赋形剂，因此，可以增加其活性组分的分装量，以减少辅料对产品质量控制的影响，然后再进行梯度稀释。尽管许多抗体通过使用活性标准品 EC来检测其生物活性。相对活性值，通过与试验样品的比较来测定，也就是说，在贮存期间，如果这两种药物的生物活性逐渐降低或者保持一致，则其相对生物活性无法准确反映药物的作用。

3 重组抗体产品的质量控制

3.1 理化分析

3.1.1 结构明确

目前常用的检测抗体的方法主要有肽图、 N端氨基酸序列、糖基化分析等，并将其与物理化学比较相结合，故要对其进行结构鉴定。传统的N-端氨基酸序列是用来作为物理化学的参照物，而在使用肽谱分析时，会因为自身的特性而影响酶解的效果，所以必须在酶解前将抗体转化，然后再用还原剂进行还原，从而得到完整的试样和物理化学控制品的酶解。为了防止受到糖链的影响，必须在酶分解之前把它切掉。糖基化分析是将抗体药物的性质与对照品相结合，通过测定唾液中的酸和低聚糖图谱，从而实现判断和质量控制。上述方法可以保证每批抗体药品的生产过程的一致性和稳定性。

3.1.2 纯度分析

通常情况下，为了避免误差，通常会采用两种或多种不同的方法来进行测试，从而得到比较精确的分析结果。用SDS-PAGE法测定其纯度，毛细管电泳法，HPLC等，前两种方法都是以轻、重链带的含量之和为95%为标准，而采用液相色谱法时，要选择适当的流动相和柱子，在进行分析前，必须设置无杂峰的空白对照，这样才能得到峰面积大于95%的面积。

3.1.3 测定蛋白含量

目前常用的检测抗体蛋白的方法是利用光谱法，利用相关原理来确定消光系数，并对其进行修正，计算出相应的蛋白的消光系数。在国外，许多生物工程技术都是通过测定具有相同结构的标准物的蛋白质含量，但没有一个确切的数据来源。若要追溯，可用氨基酸成分分析。

3.2生物学活性的测定

3.2.1 补体依赖的细胞毒法

其作用是将表面的抗原与抗体结合，从而形成复合体，从而改变抗体的整体结构，从而使 Fc位置的补体结合点暴露;下一步是培育补体，激活它的串联，完成攻膜复合体的组装，并在细胞表面穿孔，最终使细胞溶解。通过对抗体的溶解程度进行细胞的吸收，得到了相应的反应曲线，并将其与对照品进行比较，从而计算并评估其相对活力。

3.2.2 基因报告法

这实际上是一种评估信号途径的一种评估手段。通常情况下，由于获得细胞株的困难，或者是对加价法的品质曲线信号的干扰较弱，可以通过对这条途径的了解，将目标反应单元（携带抗体）和报告基因的质粒稳定地将转染到细胞上，然后利用对应的靶点和抗体的相关效应，启动报告基因法，对重组抗体的生物活性进行检测。

3.3 残留杂质

按照有关的重组抗体药物的生产过程，其杂质的控制主要集中在残留的宿主细胞蛋白、DNA和蛋白质 A等杂质中，对杂质的检测主要采用夹心ELISA法。从理论上讲，DNA在遗传过程中会有一定的致癌风险，FDA规定，残留 DNA不能超过100 pg，而现在的残留 DNA检测主要有定量 PCR、荧光染色、杂交等，杂交技术使用非放射性物质作为核酸探针的标记，但由于要同时进行蛋白酶的消化，所以准确率会下降。而荧光染色则是使用复合物的荧光染料，通过荧光酶标仪对其进行测定，并记录其强度，从而得出残留 DNA。此方法较为简便，但因 DNA残留质量控制的要求较高，且检测能力较弱，故不适合。

3.4 成品控制

对产品质量控制，既要检验其含量，又要有生物活性;理化性质：外观、分装量、鉴别试验、 PH值、毒素检查等，可参照《中华人民共和国药典》等文件。

参考文献：

[1]孙昱，郑蕊，文海若.单一成分药物有关物质的质量控制研究要点[J].药物评价研究，2021，44（05）：924-930.

[2]张世雄.重组抗体药物研究进展[J].化工管理，2017（29）：136.