芪归紫草油干预大鼠Ⅳ期压力性损伤的实验研究❋

程 红， 马希佳， 任 娟， 邵 帅， 陈梦利， 马纯政△

(1.河南省中医院， 郑州 450002；2.河南中医药大学， 郑州 450000)

压力性损伤是典型的慢性难愈性伤口，其诊疗、康复、预防、护理及基础研究等是国际伤口修复领域研究的热点和难点[1]。尤其是Ⅳ期压力性损伤愈合困难，严重影响患者生命安全及生活质量。前期临床研究发现，芪归紫草油治疗深度压力性损伤能达到加速创面愈合、减轻疼痛的作用[2]。为深入探讨其作用机制，更有效地解决临床问题，笔者通过构建大鼠Ⅳ期压力性损伤模型观察芪归紫草油对模型大鼠创面愈合率及血清中C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)含量的变化,现报道如下。本研究通过河南省中医院实验动物伦理委员会批准(批号20180315WZ)。

1 材料与方法

1.1 动物

选用SPF级Wistar健康雄性大鼠 60只，12～14周，体质量200～300 g，由河南省中医院中心实验室，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号SCXK(京)2016-0006。大鼠分笼饲养，自由饮水和进食。在室内温度22～30 ℃、相对湿度 50%～70%、明暗周期 12 h 的环境中适应性喂养1周。

1.2 主要试剂

CRP及TNF-α ELISA试剂盒购自R&D公司,货号分别为EIA05976及0807168。

1.3 造模材料

圆片形铁片，直径12 mm、厚1 mm、重1 g，磁通量1750 Gs(磁铁表面磁通量经过检测)，购置于东莞市众城磁性材料有限公司。

1.4 药物制备方法

芪归紫草油制备方法为取黄芪60 g、当归30 g、新疆紫草60 g、大黄30 g(以上中药均购置于河南省中医院中药房)，均匀切碎加入1 kg的芝麻油浸泡1周后，置锅中用武火加热至油沸，油温计测量油温稳定在170 ℃后改用文火加热，油温稳定在100 ℃，不断搅动将药物炸枯至表面色黑、内部色深褐色时关火，待油温降至60 ℃左右时过滤去渣，加入凡士林30 g、珍珠粉60 g、冰片60 g搅匀成膏状，置于洁净容器中高压灭菌密封保存，绵白糖100 g碾粉装瓶备用即可[3]。龙珠软膏购自马应龙药业集团股份有限公司，国药准字Z10950017，规格：每支10 g。

1.5 Ⅳ期压力性损伤大鼠模型的构建

将适应性喂养1周的大鼠于实验前8 h禁食水，用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，在其背部正中线做一深至筋膜的切口钝性分离，将高压灭菌的圆片形磁铁植入大鼠背部皮下，体外采用圆环形磁片间歇性施加压力造成皮肤缺血，每次缺血2 h后将磁片拿下，让局部血流恢复30 min，如此进行1个循环。每只大鼠每日进行3个循环，连续进行4 d即可得Ⅳ期压力性损伤大鼠模型。

1.6 建模成功判断标准

颜色：借助无色透明玻璃按压3 s，皮肤颜色未改变[3]。外观：铁片边缘红肿糜烂有渗液或渗血。可伴有坏死，针刺皮肤无痛感，铁片暴露或滑脱，皮肤会变硬或变成黑色焦痂，伴有骨骼、肌腱或肌肉的暴露[4]。

1.7 分组与治疗方法

连续造模4 d后共有55只大鼠造模成功，淘汰1只，其余54只大鼠随机分为模型组、龙珠软膏组和治疗组(芪归紫草油组)每组各18只。第5天开始清创治疗。模型组先用 0.9% 氯化钠溶液清洗创面，再用碘伏消毒液进行3次消毒创面，用无菌剪祛除坏死组织或痂皮后进行纱布填塞或覆盖，保证纱布与创面充分接触，用透气低敏胶布固定。龙珠软膏组外科清创及换药同模型组，再将龙珠软膏纱布填塞或覆盖在皮肤损伤处，保证纱布与创面充分接触，用透气低敏胶布固定。治疗组(芪归紫草油组)外科清创及换药同模型对照组，再将芪归紫草油纱布层洒上粉碎后的白糖粉加压包扎，用透气低敏胶布固定。所有大鼠均隔天换药1次，直到创面愈合或实验结束。

1.8 观察指标及检测方法

1.8.1 创面愈合率测定 创伤后第3、7、15、21天，用创面照相结合透明方格纸描记法测量创面大小，计算创面愈合率[5]。创面愈合率=(原创面面积-现创面面积)/原创面面积×100%。

1.8.2 血清CRP和TNF-α检测 于治疗后2 h、3 d、15 d、21 d晨取大鼠尾静脉血0.5 mL，分别用ELISA试剂盒检测血清CRP和TNF-α值。

1.9 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠创面愈合率比较

表1示，在观察终点第21天，治疗组与龙珠软膏组创面愈合率均明显高于模型组(P<0.05，P<0.01)，其中治疗组创面愈合率较龙珠软膏组更高(P<0.05)。

表1 各组不同时间点大鼠创面愈合率比较(%)

2.2 各组大鼠血清CRP与TNF-α含量比较

表2、3示，第15天和第21天时治疗组与龙珠软膏组血清CRP与TNF-α含量均明显低于模型组(P<0.05，P<0.01)，其中治疗组CRP与TNF-α含量较龙珠软膏组更低(P<0.05)。

表2 各组不同时间点大鼠血清C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)含量

表3 各组不同时间点大鼠血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF -α)含量比较

3 讨论

现代医学认为，压力性损伤发生的最重要原因为局部组织长期受压引起血液循环障碍伴神经营养功能紊乱。局部组织持续缺氧缺血最终导致软组织坏死和皮肤损伤，同时伴有血清炎症指标升高[6]。在疗效方面，损伤部位的创面愈合率是最重要的评价标准，血清CRP与TNF-α则是反映机体炎症水平的重要指标[4]。本实验数据显示，治疗组无论在降低创面愈合率还是在血清炎症指标方面都明显优于龙珠软膏组，说明芪归紫草油换药具有更佳的抗菌消炎、敛疮生肌作用。该方为经验方，方中黄芪为君药，具有托毒排脓、敛疮生肌之功效[7]；当归为臣药，具有补血活血、化瘀止痛之作用；黄芪、当归两者相伍既能托毒外出又能补气生血，促进新肉生长；佐使药为大黄、紫草、珍珠粉，其中大黄对炎性渗出物引起的肿胀有明显的抑制作用[8]；紫草应用于创面后可明显抑制毛细血管通透性，加速上皮修复进程[9]，减少瘢痕组织的形成；珍珠粉解毒生肌，具有疏通微循环功能[10]；麻油具有极强的亲脂性，可使创面内的环境呈油润状态，能有效避免干燥损伤的刺激，减轻换药造成的疼痛；油化后的紫草、大黄等药物其抗菌、去腐作用加速坏死组织的脱落，控制或减少由创面感染引起败血症的机会，全方共奏益气养血、化瘀止痛、敛疮托毒之功效。此外，用麻油纱布贴敷创面可在创面组织表面结合成一层保护屏障，有利于创面上皮细胞的生长[11]，具有一举三得的功效；采用食用白糖作为芪归紫草油的基质，主要是考虑到食用白糖溶化后可在创面形成高渗状态，导致炎症细胞脱水变性坏死，使创面内的pH 值下降形成酸性环境，促进炎症吸收和创面收敛[12]，协同芪归紫草油共同达到促进创面愈合的目的。

总之，实验证明芪归紫草油对大鼠Ⅳ期压力性损伤具有比龙珠软膏更强的修复作用，结合前期临床研究结果，建议将此方法在临床中推广应用，让更多的患者受益。