AEMAb、ACPAb、AHCGAb在不孕患者中表达水平及与生殖激素含量的相关性

郭婉茹 曾彬 崔静 于婉莹★

不孕是困扰育龄期女性的常见生殖系统疾病。近年随我国社会老龄化进程加快，国内陆续出台多项刺激人口增长政策，如何有效进行不孕筛查及治疗成为临床研究热点［1⁃2］。生殖激素水平一直是临床诊断不孕的主要辅助手段，但有部分不孕患者生殖激素水平正常［3］。近年来对免疫学的深入研究发现，不孕还与自身免疫体系密切相关［4］。抗子宫内膜抗体（Anti endometrial anti⁃body，AEMAb）是一种以子宫内膜为靶抗原并能诱发一系列免疫反应的自身抗体，与免疫性不孕关系密切［5］；抗心磷脂抗体（Anticardiolipin anti⁃bodies，ACPAb）与组织炎症、损伤等关系密切，极易诱发微血管血栓形成，造成生殖器官血流障碍引起不孕或反复性流产等［6］；人绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）是维持早期妊娠的关键激素，而抗绒毛膜促性腺激素抗体（Anti chorionic gonadotropin antibody，AHCGAb）可通过免疫过程调节HCG 水平［7］。外周血AEMAb、ACPAb、AHCGAb 可能与妊娠建立及维持有关，但三者在不孕患者中表达特征及与生殖激素水平的关系如何，尚未见相关报道。本文旨在为临床完善不孕筛查及治疗机制提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年4月唐山市妇幼保健院女性不孕患者89 例设为研究组，纳入标准：①符合不孕诊断标准［8］；②未采取任何避孕措施，正常性生活一年以上而未受孕；③有周期性排卵，输卵管、子宫正常，无生殖器官畸形；④男方精液正常；⑤患者知情本研究并签署同意书。排除标准：①精神疾病患者；②存在肝肾心功能异常者；③伴甲状腺功能缺陷者；④有高泌乳素血症等内分泌系统疾病者；⑤近3 个月内有激素药物应用史者；⑥系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病患者。另选同期参加常规体检的女性89 例设为对照组。纳入标准：①身体健康，有生育史；②有周期性排卵，输卵管、子宫正常，无生殖器官畸形；③知情本研究并签署同意书。排除标准：①有子宫体炎、子宫内膜炎等感染性疾病者；②存在肝肾心功能异常者；③伴甲状腺功能缺陷者；④有高泌乳素血症等内分泌系统疾病者；⑤近3 个月内有激素药物应用史者；⑥系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病患者。研究组年龄平均（28.56±1.69）岁，体质量指数平均（21.39±1.06）kg/m2；对照组年龄平均（28.73±1.70）岁，体质量指数平均（21.43±1.03）kg/m2。两组年龄、体质量指数、饮食偏好基础资料差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 方法

AEMAb、ACPAb、AHCGAb 及生殖激素水平检测：经期第7 d 采用非抗凝管采集晨空腹肘静脉血4 mL，分装2 管，各2 mL，加温（37℃）促凝，离心（半径8 cm，时间15 min，转速3 500 r/min）采集上层血清，采用广州万孚生物技术股份有限公司AEMAb 酶联免疫试剂盒、ACPAb 酶联免疫试剂盒、上海信然实业有限公司AHCGAb 酶联免疫试剂盒及杭州诚信生物科技有限公司垂体泌乳素（Pituitary prolactin，PRL）、促黄体生成素（Luteiniz⁃ing hormone，LH）、促卵泡成熟激素（Follicle stimu⁃lating hormone，FSH）、雌二醇（Estradiol，E2）酶联免疫试剂盒分别检测AEMAb、ACPAb、AHCGAb、PRL、LH、FSH、E2水平。操作均由相同资深检验科医师严格参考试剂盒说明书步骤规范完成。AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性判断标准：在450 nm 处检测样本孔、标准品孔、空白对照孔吸光度值，计算Cutoff 值为0.368，若样本孔孔吸光度值大于Cutoff 值则为阳性，小于Cutoff 值为阴性。

1.3 统计学处理

采用统计学软件SPSS 22.0 处理数据，计数资料n（%）描述，采用卡方检验。计量资料采以（±s）描述，用t检验；采用Logistic 回归分析模型分析女性不孕发病危险因素，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基本资料比较

研究组与对照组在盆腔病变、流产或产后并发症、痛经、精神压力、受教育程度、AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性率等比较，差异有统计学意义（P<0.05）；在妇科手术史、宫外孕史、促排卵用药史、平均月收入、结婚年龄等比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 两组基本资料比较（n=178）［n（%）］Table 1 Comparison of basic data between the two groups（n=178）［n（%）］

2.2 女性不孕发病危险因素分析

以女性不孕为因变量，以盆腔病变、流产或产后并发症、痛经、精神压力、受教育程度为初中与以下、AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性作自变量进行分析，盆腔病变、流产或产后并发症、痛经、精神压力、受教育程度为初中与以下、AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性均为女性不孕发病重要影响因素（P<0.05）。见表2。

表2 女性不孕发病危险因素分析Table 2 Analysis of risk factors for female infertility

2.3 两组生殖激素含量比较

研究组PRL、LH 及FSH 水平高于对照组，E2水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 研究组与对照组生殖激素含量比较（±s）Table 3 Comparison of reproductive hormone content between study group and control group（±s）

表3 研究组与对照组生殖激素含量比较（±s）Table 3 Comparison of reproductive hormone content between study group and control group（±s）

组别研究组对照组t 值P 值n 89 89 PRL（ng/mL）36.29±10.21 17.43±6.04 14.999<0.001 LH（mIU/mL）7.11±2.34 3.69±1.25 12.162<0.001 FSH（mIU/mL）9.40±1.51 5.56±1.10 19.391<0.001 E2（pg/mL）30.26±6.98 43.04±9.01 10.578<0.001

2.4 不同AEMAb、ACPAb、AHCGAb 表达情况者生殖激素水平比较

AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性表达者PRL、LH 及FSH 水平高于AEMAb、ACPAb、AHCGAb阴性表达者，E2水平低于阴性表达者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表4。

表4 不同AEMAb、ACPAb、AHCGAb 表达情况者生殖激素水平比较（±s）Table 4 Comparison of reproductive hormone levels in patients with different expression of aemab，acpab and ahcgab（±s）

表4 不同AEMAb、ACPAb、AHCGAb 表达情况者生殖激素水平比较（±s）Table 4 Comparison of reproductive hormone levels in patients with different expression of aemab，acpab and ahcgab（±s）

表达情况AEMAb 阳性AEMAb 阴性t 值P 值ACPAb 阳性ACPAb 阴性t 值P 值AHCGAb 阳性AHCGAb 阴性t 值χ2值n 31 58 34 55 18 71 PRL（ng/mL）41.04±10.04 33.75±8.12 3.711<0.001 40.08±9.55 33.95±7.98 3.264 0.002 44.61±8.79 34.18±8.03 4.829<0.001 LH（mIU/mL）8.71±2.40 6.26±1.98 5.160<0.001 9.01±2.51 5.94±2.02 6.343<0.001 10.01±2.22 6.38±1.92 6.940<0.001 FSH（mIU/mL）11.04±1.97 8.53±1.23 7.392<0.001 10.94±2.02 8.45±1.40 6.865<0.001 11.13±2.10 8.96±1.95 4.153<0.001 E2（pg/mL）26.79±4.13 32.12±4.04 5.884<0.001 27.36±3.96 32.05±4.97 4.660<0.001 25.30±4.28 31.52±4.35 5.435<0.001

3 讨论

目前世界范围内不孕发病率约13%～15%，发展中国家高于发达国家，且近年来不孕发病率有显著升高趋势［9］。不孕致病因素众多，临床诊断、治疗难度较大，明确导致不孕的相关因素对指导临床筛查、制定治疗方案具有重要意义。

本研究发现，盆腔病变、流产或产后并发症、痛经、精神压力等均是女性不孕的独立危险因素，与国内相关研究结果一致［10］，且AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性也与女性不孕的发生有关。免疫学观点认为，妊娠是同种异体器官移植过程，免疫应答在妊娠过程中发挥重要作用，受精卵、胚胎可被看作具有一半父方遗传物质的异体自然移植物，另一半遗传物质来自母体，故胚胎具同种异体移植及自体移植双重特性［11］。正常情况，母体免疫系统可识别携带父源抗原的胚胎并启动保护性免疫应答直至整个妊娠过程结束，因此，母胎间免疫活化及抑制调控平衡在胚胎、胎儿生长发育过程中发挥关键作用［12］。AEMAb 是子宫内膜异位症标记性抗体，可引起机体免疫内环境紊乱，但从其生物学特性方面分析，AEMAb 对精子活性及精卵结合过程影响较小，且有研究显示，继发性不孕患者外周血AEMAb 阳性率显著高于习惯性流产及原发性不孕患者［13］。推测AEMAb 可能是通过影响机体免疫环境层面而影响受精卵着床造成生化妊娠，此病理生理特征与上述免疫学观点一致，受免疫排斥作用，受精卵难以正常回到子宫着床而造成妊娠失败。ACPAb 是机体受各种携带有负电荷磷脂及其结合蛋白刺激而生成的一种自身抗体［14］。有研究表明，正常妊娠过程中磷脂作为一种黏合剂可辅助受精卵着床、胎盘附着于子宫内壁，而ACPAb 与细胞膜上携带负电荷的磷脂结合会阻断磷脂作用导致不孕［15］。AHCGAb 能通过免疫调节过程灭活HCG 继而降低机体HCG 水平，引起流产发生，而AHCGAb 产生的机制主要有：有流产史女性在流产过程中滋养层细胞损伤致绒毛膜组织内HCG 进入血液循环作为抗原被免疫细胞识别刺激机体生成AHCGAb；在促排卵女性中，HCG 可能会作为抗原刺激生成AHCGAb［16］。本研究也发现，流产史、盆腔病变是女性不孕的独立危险因素，推测流产、盆腔病变可能通过刺激机体生成AHCGAb 而抑制HCG 活性，从而导致女性不孕。

此外，临床已证实，内分泌系统在妊娠过程中发挥重要调节作用［17］。从生殖内分泌学角度看，生殖激素水平正常是成功受孕、维持妊娠的基础。PRL、LH、FSH、E2是机体主要生殖激素，在整个月经周期中呈规律性变化，其主要作用是促进子宫内膜生长，尤其是对促进功能层上皮、腺体、螺旋小动脉生长具有重要作用，可为受精卵着床做准备［18］。多项研究表明，不孕及习惯性流产患者外周血PRL、LH 及FSH水平升高显著，而E2水平降低，上述生殖激素水平异常与不孕关系密切［19］。本研究结果提示在不 孕女 性中AEMAb、ACPAb、AHCGAb 阳性 表达与生殖激素水平有关。可能与因AEMAb、ACPAb、AHCGAb 主要作用部位均是子宫内膜，而子宫内膜的生长发育同时受生殖激素调节，其异常发育可反馈调节造成PRL、LH、FSH、E2等生殖激素平衡紊乱，形成恶性循环继而引起不孕有关。

综上可知，不孕患者AEMAb、ACPAb、AHCGAb阳性率显著升高，且与生殖激素水平有关，可为临床筛查不孕及治疗提供依据。