CD44与CA125与老年结核性胸膜炎感染患者体内的炎症免疫关系

张海燕 范晖 张偲 王永勤

结核性胸膜炎和肺结核一样均是由结核分枝杆菌侵犯引起感染，但无传染性，以不同程度肺外表现为主要的疾病表现形式［1］，9 成［2］患者会出现因该病引起的胸腔积液而并发一定程度的肺栓塞［3］、心衰［4］。该病的诊断大多情况下需要医者结合一系列的临床综合检查和胸膜活检［5］等以达到最终的明确诊断，这一点明显区别于肺结核。以往相关资料中关于肺结核胸膜感染的诊断虽有一定的介绍和报道，但是基于结核菌培养、免疫学检查等情况，极易造成敏感性、检出率等客观情况出现最终诊断结果的偏差。故基于该病有效、便捷的诊断方法仍旧是解决此病临床实际需求的最大问题。黏附分子（Adhesion molecule，CD44）是机体内能够广泛参与巨噬细胞活化［5⁃6］、淋巴免疫细胞活化的一种多糖蛋白［6］。基于其白细胞黏附分子的属性，在体内存在结核菌感染的情况下，CD44 互大量聚集以有效参与体内的免疫反应［7］。此外，糖链抗原⁃125（carbohy⁃drate antigen，CA125）最早的临床研究发现其作为一种血清学［8］的中路标志物，参与肿瘤的发生、发展，但是对于一些疾病的渗出液检测也会发现该物质一定程度的高水平表达。借助两种物质本身特有的属性，能够综合反应结核性胸膜炎感染患者体内的感染情况和相应的免疫反应情况。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年7月至2020年7月江苏省如皋市人民医院住院的结核性胸膜炎感染患者120 例为观察组，其中男65 例，女55 例，平均年龄（65.0±4.1）岁，病程平均（3.4±1.7）年。选取同时期的120例健康体检者作为对照组，其中男63 例，女57例。平均年龄（64.8±3.9）岁。所有患者及家属均签署知情同意书。

纳入标准：均为渗出液性质［8］，符合Light 标准［9］；患者入院前经临床综合检查，结合影像学检查与痰液抗酸杆菌检测可确诊；经过临床行胸腔穿刺术，对患者胸水检测。观察组剔除标准：中途退出，拒绝配合本次研究，存在严重的其他系统并发症［10］，不能耐受住院药物治疗。本研究已通过单位伦理委员会审查。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 法检测患者的CD44

于96 孔板50 mmol/L 缓冲液溶解细胞抗原，恒温4℃条件过夜，弃除样本的包被液体后进行洗涤，放入100 μL 血清及进行稀释，在对照组样本置入后孵育2 h，所获得的最终样本洗涤并PBST 清洗，加入二抗、孵育，再次进行清洗操作后加入OPD 显色，将获得样本放置在490 nm 波场条件下进行检测。

1.2.2 外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mono⁃nuclear Cell，PBMC）中提取RNA 检测

对患者血液样本进行检测，测定总RNA 浓度后进一步检测cDNA。CD44 引物序列5′ACAACTGGTGATGGAGACTCATCC⁃3′。

1.2.3 THP⁃1 细胞培养，并分化为巨噬细胞

用结核杆菌H37Ra［11］（其MOI 值 为5）感 染THP⁃1 细胞，感染后将CD44（浓度单位为10 ng/mL）加入，静置采用PBS 将上清洗去。获得的样本以完全培养基进行后续培养，3 d 后，SDS（浓度条件为0.7%）将样本中的细胞进行有效裂解，涂板后将培养皿置于二氧化碳条件下，进行彻底密封3 周，后取出进行结核杆菌的CFU 值统计。

1.2.4 红包裂解液分离患者胸水

进行巨噬细胞的刺激试验。待THP⁃1 有效诱导巨噬细胞后，接种于6 孔板，试验组分别加入0.5 mL 胸水，并以TNF⁃a 中和。在24 h 后对所获得的上清进行取液体，并ELISA 检测。

1.2.5 ELISA 检测CA⁃125 以及观察指标

对患者治疗1、2、3月末时，取清晨肘静脉血5 mL，有效分离血清后，使用ELISA、免疫组化等方法检测CA⁃125。其阳性值为35 U/mL 以上。

1.2.6 患者预后效果胸水量以及观察指标

于患者治疗1、2、3月末时，予以X 光胸片检查，胸液平面高于第2 肋上缘为大量，低于第4 肋下缘为小量，两者之间为中量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 26.0 软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示，两组比较用t检验，计数资料用n（%）表示，采用χ2检验，相关关系采用皮尔森分析法，以P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CD44 水平的表达

外周血外周血单个核细胞中，观察组的CD44、CD44mRNA 水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 血浆CD44、CD44mRNA 的水平情况（±s）Table 1 Plasma CD44 and CD44 mRna levels（±s）

表1 血浆CD44、CD44mRNA 的水平情况（±s）Table 1 Plasma CD44 and CD44 mRna levels（±s）

组别对照组观察组t 值P 值n 120 120 CD44（ng/mL）治疗前0.54±0.42 5.16±0.16 15.425 0.001治疗1月末0.00±0.00 5.90±0.42 153.884 0.000 2月末0.00±0.00 4.92±0.42 128.323 0.000 3月末0.00±0.00 3.84±0.42 100.155 0.000 CD44mRNA（ng/mL）治疗前0.52±0.17 5.42±0.75 14.234 0.001治疗1月末0.00±0.00 4.90±0.35 315.746 0.000 2月末0.00±0.00 2.76±0.17 177.849 0.000 3月末0.00±0.00 1.12±0.50 24.538 0.000

2.2 CD44 与巨噬杆菌的关系研究

结核杆菌感染的CD44 中加入巨噬细胞后，3周后计算CFU，其结核杆菌载量（1.12±0.02）相较于对照组，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 CD44 与IL⁃10、TNF⁃α 炎症免疫因子的关系

TNF⁃α 中和抗体加入胸水前，观察组各指标显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），TNF⁃α 中和抗体加入胸水后，观察组IL⁃10 指标较对照组，差异无统计学意义（P>0.05），TNF⁃α 水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），加入TNF⁃α 中和抗体后，观察组CD44 水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 两组的炎症因子水平情况（±s）Table 2 Levels of inflammatory factors in the two groups（±s）

表2 两组的炎症因子水平情况（±s）Table 2 Levels of inflammatory factors in the two groups（±s）

注：与加入胸水后相比，aP<0.05。

组别对照组观察组t 值P 值n 120 120 CD44（ng/mL）加入胸水前0.67±0.21a 8.72±2.14a 4.120 0.008加入胸水后0.83±0.64 12.48±3.45 8.427 0.000 IL⁃10（pg/mL）加入胸水前33.49±6.42a 97.13±9.18a 19.452 0.000加入胸水后65.14±3.42 108.42±24.10 10.758 0.000 TNF⁃α（pg/mL）加入胸水前42.30±9.152a 188.12±21.03a 25.752 0.000加入胸水后66.75±11.47 271.42±30.20 22.727 0.000

2.4 老年结核性胸膜炎感染患者治疗前后CA⁃125 水平比较

治疗前，观察组CA⁃125 水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后各个时间点的组间水平，比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 两组患者CA⁃125 的水平（±s）Table 3 Levels of CA⁃125（±s）

表3 两组患者CA⁃125 的水平（±s）Table 3 Levels of CA⁃125（±s）

组别对照组观察组t 值P 值治疗前6.0±2.5 58.2±8.16 10.245 0.001治疗1月末0.00±0.00 69.15±21.03 36.020 0.000 2月末0.00±0.00 40.15±13.23 33.020 0.000 3月末0.00±0.00 17.42±4.12 46.317 0.000

2.5 CD44 与CA125 与老年结核性胸膜炎感染患者体内的炎症免疫的相关性分析

CD44 与CA125 与老年结核性胸膜炎感染患者体内的炎症免疫呈正相关（P<0.05）。见表4。

表4 CD44 与CA125 与老年结核性胸膜炎感染患者体内的炎症免疫的相关性分析［n（%）］Table 4 Correlation analysis of CD44 and CA125 with inflammatory immunity in senile patients with tuberculous pleurisy infection［n（%）］

3 讨论

CD44 作为机体内可促进因巨噬细胞活化的因子［12］，对炎症反应的发生及变化均有一定的促进作用［13］。本次研究中发现，观察组的CD44 水平均显著高于对照组，进一步的外周血CD44mRNA 水平检测也呈现出高水平表达，这可能提示本次研究CD44 在体内的表达与患者的病情呈现一定的关联性，故本次研究通过3 个月的抗结合治疗后，动态观察该指标的水平情况，侧面得到了证实。而CD44 是否与患者治疗期间的炎症免疫改善有一定关系，本次研究发现加入结合杆菌后患者CD44 水平显著升高，说明CD44 在该病的发生中存在一定的特异性。而结核杆菌会激发［14］机体内T 细胞产生大量TNF⁃α，以对抗组织局部的炎症变化，进而诱发［15］CD44 表达。分析认为，经过一定时间的抗结核治疗后，患者体内的结核杆菌载量得到了有效的改善，其载量下降，使得原本因结核杆菌而引发的炎症免疫反应也得到了相应的控制，TNF⁃α 由此水平降低，最终受其刺激的CD44 也相应减少了，实验的CD44 检测水平也降低。在王中丽等的研究中认为该刺激可能与TNF⁃α 调控P38MAPK 的表达方面有一定关系［16］，但是其机制是否适用于本次研究中CD44 的治疗后水平下降，还需要更深入的研究。

CA⁃125 在临床多被认为是与肿瘤［17］有直接关联。但是在本次研究中，结核性胸膜炎患者的CA⁃125水平较健康对照组水平显著较高，且虽然经过3 个月的针对性治疗，观察组该指标的水平显著降低，但是相比对照组，其阳性水平仍较高，说明该指标在患者体内始终存在较高的表达水平状态，分析认为，这种情况主要在于，患者本身存在较大的结核杆菌聚集［18］，且代谢产物相对较多，这会大量刺激肺部组织间皮细胞。CA125、CD44 转阴之间与胸腹水呈正相关，推测毒性代谢产物还会进一步损害肝内细胞，使得一些与CA⁃125 等类似抗原性［18］的物质大量产生，并释放进入患者体内血流中，呈现较高的水平。患者在此种状态下，CA⁃125 等大量有毒物质通过主动重吸收再次进入血液中，一方面对肝脏功能的损害，导致其抗原处理能力［18］显著下降，另一方面患者表现出病情的进展，这也是结核性胸膜炎免疫功能相对较差，且此类患者基本普遍存在胸水、腹水情况的的原因之一。而包义波［19］等人的研究中进一步发现，CA⁃125 对于此类结核性胸膜炎患者的临床诊断方面，尤其是胸水连个性方面有显著较高的价值，且其研究中对于患者进行抗结核治疗后，动态监测CA⁃125 能够为患者的预后提供一定的帮助，其与炎症反应因子同样具有一定的疗效预测价值，以上综合说明了CA⁃125 对于结核性胸膜炎的临床治疗和炎症免疫存在一定的关联。

综上所述，结核性胸膜炎患者的CD44 表达与体内的炎症免疫反应变化存在一定的关联，经过系统的抗结核治疗后，CD44 水平显著降低，患者的炎症免疫指标水平也得到了改善，这可能是结核杆菌刺激，导致体内TNF⁃A 水平升高而激活CD44 表达，但是其具体的信号机制尚需研究；而动态监测CA⁃125 与结核性胸膜炎的临床治疗和炎症免疫存在一定的关联，对于此类患者的临床预后有一定的价值，但也仍需进一步机制探索。