慢性乙肝患者肝纤维化严重程度与血清TGF-β 的相关性分析

郭金伟

中国科学院大学深圳医院（光明）感染性疾病科，广东深圳 518106

慢性乙型肝炎是我国较为常见的一种传染性疾病，是由于感染乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）所致[1]。慢性乙肝患者普遍存在肝纤维化，肝纤维化晚期表现为肝区疼痛、脾大、蜘蛛痣等症状，但早期临床症状缺乏特异性，诊断难度较大[2]。肝纤维化是慢性乙肝患者病情进展为肝硬化的一个重要阶段，肝纤维化分期也是评估患者疾病严重程度的参考标准[3]。临床有研究表明：转化生长因子-β（transforming grouth factor-β, TGF-β）在瘢痕形成、器官纤维化发展中发挥着重要作用，高水平的TGF-β 会促进纤维化进程进展[4-5]。基于此，为探究慢性乙肝患者肝纤维化严重程度与血清TGF-β的相关性，本文对中国科学院大学深圳医院（光明）感染性疾病科2019 年5 月—2022 年1 月收治的296例慢性乙肝患者研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将本院感染性疾病科收治的296 例慢性乙肝患者作为观察组，以及同期本院门诊体检的296 名健康人员作为对比组。观察组：172 例男、124 例女；年龄34～74 岁，平均（53.72±3.09）岁；病程2～5 年，平均（3.46±1.68）年；肝纤维化分期：21 例S0期、131 例S1-2期、144 例S3-4期；疾病严重程度：30 例轻度、157例中度、109 例重度；体质指数（body mass index, BMI）23～33 kg/m2，平 均（28.62±1.44）kg/m2。对 比组：190 例男、106 例女；年龄35～74 岁，平均（53.55±3.01）岁；BMI 24～33 kg/m2，平均（28.58±1.41）kg/m2。两组一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。研究经医院伦理委员会审批。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①均满足《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中对“慢性乙肝”诊断标准；②年龄在18 周岁以上，男、女均可；③影像学资料完整；④均为自愿参与本研究，并已签署知情同意书。

排除标准：①入组前1 月接受过抗病毒等对症治疗者；②妊娠期、哺乳期女性；③既往存在肝区手术史者；④合并艾滋病等疾病者；⑤合并腹水等疾病者；⑥同期参与其他研究者；⑦凝血机制异常者；⑧中途转院、死亡、退出者；⑨合并肝癌等恶性肿瘤者。

1.3 方法

①血清TGF-β 检测：抽取所有受检者5 mL 空腹静脉血，以10 cm 离心半径、2 800 r/min 离心速率、离心处理10 min，将上层清液分离，并置于-70℃环境待检，以ELISA 法检测转化生长因子-β（transforming grouth factor-β, TGF-β）。

②肝纤维化分期病理检测：以B 超引导下活检枪穿刺法进行穿刺，协助患者采取左侧卧位，通过B 超定位穿刺点，对穿刺部位进行常规消毒、铺巾，给予2%的利多卡因麻醉，在B 超引导下活检枪沿着穿刺点进针，取出肝组织长约1.5 cm，迅速置入10%的福尔马林溶液中保存并及时送检，进行常规HE、网织、Masson 染色，由本院两名病理科资深医生独立阅片，给出具体的病理诊断结果，对于存在异议的地方，应再从讨论，确定最终诊断结果。严格遵循《肝纤维化中西医结合诊疗指南(2019 年版)》[7]中对肝纤维化分期的判定标准。

③肝纤维化相关标志物测定：抽取所有受检者5 mL 空腹静脉血，分离血清并置于-37℃水浴箱温浴30 min，以2 800 r/min 离心速率、10 cm 离心半径、离心处理10 min，分离血清，以放射免疫分析（radioimmunoassay, RIA）法检测Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ, C-Ⅳ）、层黏蛋白（laminin, LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen Ⅲ, PC-Ⅲ）、透明质酸（Hyaluronic acid, HA）。

1.4 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件处理数据，计量资料符合正态分布，以（±s）表示，组间差异比较采用t检验，多组间差异比较采用F检验，Prarson 相关性分析肝纤维化指标与血清TGF-β 的相关性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数比较

观察组血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于对比组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者血清TGF-β、肝纤维化实验室参数比较(±s)

表1 两组患者血清TGF-β、肝纤维化实验室参数比较(±s)

组别观察组（n=296）对比组（n=296）t 值P 值TGF-β（pg/mL）816.25±64.15 316.25±20.04 127.997＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）168.26±19.62 20.16±1.44 129.520＜0.001 LN（ng/mL）216.52±34.05 37.26±2.41 90.350＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）319.06±29.04 21.52±1.44 176.060＜0.001 HA（ng/mL）592.62±34.05 40.26±1.57 278.798＜0.001

2.2 轻、中、重度组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比

重度组均血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均显著比中度组高，中度组均显著比轻度组高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 轻、中、重度组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比(±s)

表2 轻、中、重度组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比(±s)

组别重度组（n=109）中度组（n=157）轻度组（n=30）F 值P 值TGF-β（pg/mL）938.26±95.52 615.25±52.01 519.62±34.06 824.870＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）186.26±34.52 152.26±20.14 66.25±13.52 255.206＜0.001 LN（ng/mL）248.62±18.62 175.62±34.62 92.52±9.26 443.668＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）338.62±35.62 234.25±12.14 127.62±6.25 1 184.101＜0.001 HA（ng/mL）682.62±45.06 408.62±34.16 225.26±15.12 2 580.684＜0.001

2.3 不同S 分期组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比

血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HAS3-4期组均高于S1-2期，S1-2期均显著比S0期组高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 不同S 分期组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比(±s)

表3 不同S 分期组血清TGF-β、肝纤维化实验室参数对比(±s)

组别S0期组（n=21）S1-2期组（n=131）S3-4期组（n=144）F 值P 值TGF-β（pg/mL）451.26±12.62 692.62±15.11 838.62±20.14 5 534.365＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）82.62±5.62 128.62±9.62 160.33±6.74 1 112.149＜0.001 LN（ng/mL）134.25±13.06 182.62±19.05 258.26±34.01 368.620＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）132.52±20.62 178.62±34.51 255.62±34.52 242.500＜0.001 HA（ng/mL）62.15±1.52 352.62±19.62 401.52±20.14 2 864.017＜0.001

2.4 肝纤维化实验室参数、血清TGF-β 的相关性

C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 与TGF-β 均呈正相关（P＜0.05），见表4。

表4 肝纤维化实验室参数与血清TGF-β 的相关性

3 讨论

肝纤维化是慢性乙肝患者组织修复产生的一种代偿反应，也是慢性乙肝发展成为肝硬化、肝癌的必经阶段，是由于细胞外基质降解减少、合成增加，导致大量的ECM 沉积，从而引发肝纤维化。据调查显示：将近40%的肝纤维化患者会发展成为肝癌[8]。肝纤维化是一个多细胞、多因素参与的生理过程，与多种细胞因子异常变化有着极为密切的联系[9]。TGF-β 可以将肝星状细胞激活，在肝硬化无创性诊断中具有重要价值，而关于TGF-β 异常变化在促肝纤维化发展中的作用机制成为目前临床关注的热点。

本研究显示，观察组血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于对比组（P＜0.05）。提示慢性乙肝患者相对于健康人群，血清TGF-β 水平显著增高。分析如下：HBV 会通过免疫病理性损伤间接或直接的激活、浸润大量的Kupffer 细胞，导致机体释放更多TGF-β，从而增加血液循环系统中TGF-β 浓度，而高水平的TGF-β 又会对贮脂细胞等其他间质细胞形成刺激，刺激以上细胞释放TGF-β，形成一个恶性循环[10-11]。TGF-β 又会对HSG 形成一定的刺激，促使其转化成肌成纤维细胞，加快ECM 合成，上调不同类型胶原浓度以及LN、HA 表达[12-13]。在李虓等[14]研究中，HBV携带者组血清TGF-β（357.07±41.17）μg/L、慢性乙肝组（327.59±25.04）μg/L 均高于健康对照组（24.06±5.29）μg/L，（P＜0.05），与本研究重度组组TGF-β（938.26±95.52）pg/mL 高于中度组，而中度组TGF-β（615.25±52.01）pg/mL 高于轻度组（P＜0.05）的结果接近，证实了HBV 感染会导致血清TGF-β 浓度增高。

肝穿刺活检是临床诊断慢性乙肝的金标准，但存在创伤性大、价格昂贵、并发症多等不足，并未在临床中推广开来[15]。而C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA现已在《肝纤维化诊断及治疗共识》[16]中被定为评估肝纤维化程度的重要实验室指标。以“胶原”为主的ECM，降解量减少，合成量增多，是肝纤维化发展的本质，降解与合成之间的平衡性被打破，导致肝脏内部大量的细胞外基质沉积，最终形成肝纤维化[17]。C-Ⅳ是基底膜的重要成分，可以反映出基底膜胶原的更新率，血清C-Ⅳ增高，可反映出肝纤维化进程，也是肝纤维化的早期标志之一。肝纤维化发展早期，血清C-Ⅳ浓度就会增高。LN主要来源于肝星状细胞，在细胞分化、粘连、基因表达中具有重要作用。肝纤维化发展过程中，肝窦内皮细胞间隙会沉积大量的LN，降低内皮细胞的通透性，升高门静脉压。PC-Ⅲ与肝纤维化程度存在密切相关性，但PC-Ⅲ缺乏特异性，如果其他器官发生纤维化，血清PC-Ⅲ浓度也会增高，然而持续性的血清PC-Ⅲ浓度增高，提示病情向肝纤维化方向发展。HA 由间质细胞合成，可以更加灵敏的反映出肝脏细胞受损程度，是肝纤维化诊断的敏感性指标。

本研究显示，重度组血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于中度组，中度组均高于轻度组，S3-4期组均高于S1-2期，S1-2期均高于S0期组（P＜0.05）。说明肝纤维化程度越重，以上指标血清浓度就越高。分析如下：慢性乙肝患者在感染HBV 之后，会触发机体释放大量的TGF-β，加快肌纤维母细胞转换成纤维细胞、纤维样细胞的速度，促使患者病情从肝纤维化向肝硬化方向发展[18-19]。TGF-β 作为一种促纤维化因子，会促使大量的肌纤维母细胞，合成大量的胶原，加重肝纤维化程度。另外，TGF-β 通过基因水平，抑制基质金属蛋白酶等降解酶的活性，增加内源性抑制剂含量，促使大量的细胞外基质不能被降解，从而发生肝纤维化。在朱萍等[20]研究中，S4组C-Ⅳ（217.8±140.1）ng/L 高于S3（175.0±175.5）ng/L，S3高于S2（99.6±70.5）ng/L，S2高 于S1（49.6±34.2）ng/L（P＜0.05），与本研究结果接近。本研究显示，C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 与TGF-β 均呈正相关（P＜0.05）。提示血清TGF-β 浓度会随着肝纤维化程度的加重而增高，临床可通过检测血清TGF-β 浓度，评估肝纤维化程度，从而对患者病情作出准确的诊断，辅助临床医生为患者制定针对性的治疗计划。

综上所述，慢性乙肝患者机体血清TGF-β 浓度较高，且随着肝纤维化程度加重，血清TGF-β 浓度会逐渐增高，临床可将TGF-β 作为评估肝纤维化进程的一个特异性指标。