老年T2DM病人外周血CD8+CD25+调节性T细胞比率变化及其与胰岛素抵抗的关系研究

张小兰 陈锐

糖尿病是一种常见的以慢性血糖升高为主要表现的代谢性疾病，发病率较高且后期并发症较多，已严重威胁人类生命健康。调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)是调节外周免疫耐受的重要介质，具有免疫抑制效应，包括CD4+CD25+Treg、CD8+CD25+Treg等。已有较多研究证实[1-2]，T2DM病人外周血CD4+CD25+Treg比率下降，但CD8+CD25+Treg比率变化在T2DM病人中的研究较少，且T2DM病人外周血CD8+CD25+Treg比率变化与胰岛素抵抗的关系目前尚不明确。鉴于此，本研究旨在探讨老年T2DM病人外周血CD8+CD25+Treg比率变化与胰岛素抵抗的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2019年4月至2020年9月本院收治的42例老年T2DM病人及40例在本院进行体检的健康者，分别纳入研究组和对照组。本研究经本院医学伦理委员会批准(批号：KY20190130)。纳入标准：研究组均符合《中国2型糖尿病防治指南(2017年版)》[3]中T2DM的诊断标准；对照组均为体检健康者；年龄>60岁；参与者对本研究知情同意。排除标准：严重糖代谢紊乱、心脑血管疾病；恶性肿瘤；心、肝、肾、免疫系统或血液系统等严重疾病；风湿系统疾病、1型糖尿病等影响免疫功能的疾病；T2DM急性并发症。

1.2 检测方法 生化指标检测：采集所有研究对象空腹肘静脉血5 mL,主要检测TC、TG、HDL-C、LDL-C、FPG、空腹胰岛素(FINS)、餐后2 h血糖(2hPG)、HbA1c，并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，均于纳入研究后次日进行检测，其中FPG、2hPG均采用葡萄糖氧化酶法测定；FINS采用放射性同位素免疫标记法测定；HbA1c采用亲和层析法测定；HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。CD8+CD25+Treg比率检测：分别采集2组研究对象空腹外周静脉血5 mL，2500 r/min离心10 min并分离血清，采用流式细胞仪(型号：FACS Calibure，美国Beckman公司)检测CD8+CD25+Treg比率。

1.3 观察指标 (1)对比2组临床资料及生化指标；(2)对比2组血糖水平指标及HOMA-IR；(3)对比2组免疫学指标；(4)分析老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率变化与胰岛素抵抗的关系。

2 结果

2.1 临床资料及生化指标的比较 2组性别、年龄、TG、HDL-C比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，研究组BMI、TC、LDL-C、FPG、2hPG、HbA1c及FINS水平均高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 2组研究对象临床资料及生化指标对比

2.2 CD8+CD25+Treg比率及HOMA-IR的比较 研究组HOMA-IR高于对照组(P<0.01)，CD8+CD25+Treg比率低于对照组(P<0.01)，见表2。

表2 2组CD8+CD25+Treg比率及HOMA-IR比较

2.3 老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率与各指标的关系 CD8+CD25+Treg比率与HOMA-IR、FINS均呈负相关(r=-0.506、-0.382，P<0.05)，与HbA1c、2hPG、FPG、LDL-C及TC无相关性(r=-0.205、0.284、0.325、-0.218、0.214，P>0.05)。

3 讨论

T2DM是一种以胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损为主要特征的慢性代谢性疾病，慢性高血糖、循环细胞因子水平升高等代谢性炎性反应致使免疫发生紊乱，严重影响病人的生命健康[4]。相关研究表明，胰岛素抵抗的发生涉及胰岛素与受体结合发挥作用的多个环节，其中Treg在其过程中具有重要意义[5]。探讨老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率变化与胰岛素抵抗的关系具有十分重要的临床意义。

本研究结果显示，老年T2DM病人BMI、TC、LDL-C、FPG、2hPG、HbA1c及FINS水平均高于健康者，与Palumbo等[6]研究结果相近。Treg细胞是一类具有较强免疫抑制活性的调节性细胞，可通过产生炎性因子发挥抗炎作用，是机体免疫和代谢反应的重要因素，可通过细胞-细胞间接触依赖性方式或通过分泌细胞因子发挥特异性免疫抑制功能。本研究结果表明，老年T2DM病人HOMA-IR异常偏高，CD8+CD25+Treg比率异常偏低。朱静和等[7]的研究也表明，新诊断的T2DM病人外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比率降低，推测其可能与T2DM的发病密切相关。CD8+CD25+Treg比率降低可使对单核细胞或巨噬细胞免疫抑制作用减弱，可引发炎性反应状态，致使糖尿病的发生、发展。动物实验研究也发现，胰岛B细胞功能缺陷、Treg比率降低可促进糖尿病进展。Treg及其分泌的细胞因子可调节脂肪细胞表面转运载体-4的表达及对葡萄糖的代谢，通过细胞-细胞间接触依赖性方式或通过分泌细胞因子，发挥非特异性免疫抑制的功能，导致胰岛素抵抗的发生[8]。既往多认为T2DM胰岛素抵抗与先天性免疫功能有关，即巨噬细胞通过分泌促炎细胞因子诱导胰岛素抵抗的发生[9-10]，但何凌等[11]的研究表明，适应性免疫功能在T2DM的发生、发展中也具有重要作用，T2DM主要与脂肪组织中胰岛素抵抗和低度炎症状态有关。本研究发现， CD8+CD25+Treg比率与HOMA-IR、FINS存在一定的相关性。T2DM除胰岛素抵抗外还与胰岛素分泌缺陷有关，在T2DM病人的胰岛细胞中存在炎症因子表达、免疫细胞浸润，浸润胰岛的免疫细胞所产生的炎性因子会破坏胰岛细胞[12]。

综上所述，相比健康者，老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率异常偏低，其可能与老年T2DM病人胰岛素抵抗有关，但具体机制还有待进一步研究。