HPLC 法测定康骨宁颗粒中芍药苷的含量*

黄学娣 唐莉华 彭天忠 熊 跃※ 黄 宽 李 凡

（1.江西省中西医结合医院药剂科，江西 南昌 330003；2.南昌市洪都中医院康复医学科，江西 南昌 330008）

康骨宁颗粒是江西省中西医结合医院正在研发的一个具有活血化瘀、行气止痛、续筋接骨之功效，用于骨折初期的医疗机构传统中药制剂。该方由龙血竭、乳香、没药、当归、赤芍、川芎等13 味药组成。该制剂为传统工艺配制的中药，因此制备工艺必须遵循水煎煮[1]的原则，而方中君药龙血竭及乳香、没药等均为脂溶性树脂成分，故将难以测出；而方中当归所含的阿魏酸与处方中的川芎中的阿魏酸有阴性干扰，故选择赤芍中含量较高的有效成分芍药苷作为含量测定指标。

1 实验材料及仪器

安捷伦1260 型高效液相色谱仪；十万分之一电子分析天平（METTLER TOLEDO）；冠博仕超声波清洗机；康骨宁颗粒（自制，批号20200701-20200710 共10 批）；康骨宁缺赤芍阴性样品（自制）；芍药苷（购自中国食品药品检定研究院，批号110736-202044）；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯；娃哈哈纯净水等。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 依据查阅文献[2-8]及预实验的结果，确定色谱条件如下。色谱柱：C18柱，5 μm×4.6 mm×250 mm；流动相：以乙腈为流动相A，以水（用磷酸调pH 值为3）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃。见表1。

表1 流动相梯度洗脱情况表

2.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇超声溶解，定容至刻度，制成每1 mL 含30 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取批号为20200701 康骨宁颗粒样品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W；频率40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 缺赤芍阴性溶液的制备 取缺赤芍阴性样品适量，照“2.3 项”方法制备，即得。

2.5 系统适应性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及缺赤芍阴性溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。见图1～图3。

图1 芍药苷对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 缺赤芍阴性溶液色谱图

结果表明：本品系统适应性良好。芍药苷保留时间约在9 min，与其他各峰达到基线分离，且阴性无干扰，理论塔板数按芍药苷峰计达3000 以上，符合要求。

2.6 线性关系考察 按2.1 项色谱条件，分别吸取对照品溶液（芍药苷浓度为30.32 μg/mL）2 μL、5 μL、8 μL、10 μL、15 μL、20 μL 进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=1.6262x-14.4976，R2=0.9990，线性范围为60.64～606.40 ng。结果见表2、图4。

表2 芍药苷线性关系考察表

图4 芍药苷线性关系图

结果：芍药苷在60.64～606.40 ng 范围内呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 取芍药苷对照品溶液，按2.1 项色谱条件，连续进样6 次，记录峰面积。结果表明，本法精密度良好。见表3。

表3 精密度试验测定结果

2.8 重复性试验 取批号20200701 康骨宁颗粒样品6份，按2.1 项色谱条件，依法测定，计算含量，结果表明，本法重复性良好。见表4。

表4 重复性试验测定结果

2.9 溶液稳定性试验 取供试品溶液，按2.1 项下的色谱条件，分别在0、2、4、8、12、18、24 h 后依法测定，记录峰面积。结果表明，供试品溶液在24 h 内稳定性良好。见表5。

表5 溶液稳定性试验结果

2.10 加样回收试验 取已知含量的康骨宁颗粒（批号：20200701，每1 g 含芍药苷1.54 mg）6 份，各0.50 g，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品溶液1 mL（每mL含芍药苷0.8344 mg），挥干，按供试品溶液的制备方法制备加样回收样品溶液，依法测定，计算回收率。结果表明，本法回收率良好。见表6。

表6 加样回收试验结果

2.11 样品含量测定 测定10 批样品的含量，结果见表7。

表7 10 批样品含量测定结果

3 讨论

供试品提取方法参照《中华人民共和国药典》[2]2015年版一部芍药苷的含量测定中供试品的提取方法，制备供试品溶液。《中华人民共和国药典》2015 年版一部芍药苷的含量测定中供试品溶液的制备均为超声处理，仅是超声处理时间不一，故采用超声处理的方法，考察了0.25、0.5、1.0 和1.5 h 超声时间的提取效率，发现0.5 h 即可提取完全；关于提取溶剂，芍药苷的提取多为稀乙醇和50%甲醇溶液，二者提取效率和分离效果相当，为与对照品溶液溶剂保持一致，因此选择50%甲醇溶液。

《中华人民共和国药典》2015 年版一部赤芍饮片项下规定：含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.5%。本品每1 袋中含赤芍1.44 g，前期工艺筛选中测定芍药苷的转移率约为67%。考虑到大生产环节中的损耗等因素，以60%转移率计算，本品每袋含芍药苷为13.0 mg。故拟将本制剂含量限度定为：本品每袋含赤芍以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于13.0 mg。

通过方法学各项指标考察，均符合中药指导原则的要求，说明本方法可操作性强，专属性好，准确度、精密度都高，稳定性亦可靠，可以作为康骨宁颗粒中芍药苷定量测定方法。