不同离子浓度、温度、pH对拉氏精子活力的影响

吴 晨，骆小年，段友健，曾永聪，缪云亮，韩 峰，罗 超

( 大连海洋大学 水产与生命学院，辽宁 大连116023 )

1 材料与方法

1.1 亲鱼来源

试验鱼取自辽阳县兴大养殖场。2020年5月繁殖季节，挑选身体健康、发育良好的雄亲鱼10尾，体质量80.0～100.0 g，体长10.0～20.0 cm。

1.2 人工催产及精液采集

1.3 精子激活液的配制

参考高体雅罗鱼(Leuciscusidus)精子活力试验的配制方法[13]。以NaCl、KCl、CaCl2、葡萄糖、Tris缓冲剂(C4H11NO3)作为外界因子，将不同晶体配制成不同浓度梯度的离子激活液，所有溶液现配现用，纯水作为对照组，每个梯度试验3个平行。NaCl：25、50、75、100、125 mmol/L；KCl：5、25、75、100、150 mmol/L；CaCl2：25、35、50、75、100 mmol/L；葡萄糖：25、50、75、100 mmol/L；Tris缓冲剂：5、10、20、50、100 mmol/L。并在单因子试验的基础上设计了复合因子试验：复合液A[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1∶1]、复合液B[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L =1∶1)]、复合液C[V(Na+100 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]和复合液D[V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]。

参考不同pH对乌鳢(Channaargus)精子活力影响的试验方法[15]，采用浓度为0.1 mol/L的NaOH、KH2PO4、H3BO33种溶液配制出不同pH梯度的缓冲液。pH设置为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.4 精子活力观察

R1=(t2-t1)/t1×100%

R2=(t4-t3)/t3×100%

式中，R1为精子快速运动时间变化率(%)，R2为寿命变化率(%)，t1为对照组精子快速运动时间(s)，t2为试验组精子快速运动时间(s)，t3为对照组寿命(s)，t4为试验组寿命(s)。

1.5 数据处理与分析

试验数据用Microsoft Excel 2010统计，SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，并使用Duncan法对多组样本间进行差异显著性分析，以P=0.05为检验水准，统计结果以平均值±标准误表示。

2 结 果

2.1 Na+对拉氏精子活力的影响

表1 拉氏精子在不同Na+浓度中的活力(n=3)Tab.1 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Na+

2.2 K+对拉氏精子活力的影响

表2 拉氏精子在不同K+浓度下的活力(n=3)Tab.2 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of K+

2.3 Ca2+对拉氏精子活力的影响

表3 拉氏精子在不同Ca2+浓度中的活力(n=3)Tab.3 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Ca2+

2.4 葡萄糖对拉氏精子活力的影响

表4 拉氏精子在不同葡萄糖浓度下的活力(n=3)Tab.4 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of glucose

2.5 Tris缓冲剂对拉氏精子活力的影响

表5 拉氏精子在不同Tris缓冲剂(C4H11NO3)浓度中的活力(n=3)Tab.5 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Tris buffer

2.6 温度对拉氏精子活力的影响

表6 拉氏精子在不同温度下的活力(n=3)Tab.6 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent temperature

2.7 pH对拉氏精子活力的影响

表7 拉氏精子在不同pH下的活力(n=3)Tab.7 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent pH

2.8 几种因子复合液对拉氏精子活力的影响

表8 拉氏精子在几种因子复合液下的活力(n=3)Tab.8 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different types of commpound liquids

3 讨 论

3.1 Na+、 K+、 Ca2+对拉氏精子活力的影响

表9 几种淡水鱼类精子活力最强时金属离子浓度Tab.9 Concentration of metal ions at the maximal sperm motility in several freshwater fishes

3.2 Tris缓冲剂对拉氏精子活力的影响

3.3 葡萄糖对拉氏精子活力的影响

鱼类精液中的碳水化合物主要是葡萄糖、半乳糖和果糖[31]。鲤(Cyprinuscarpio)精浆的碱性磷酸酶能使来自血糖的6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖转变为葡萄糖和果糖，葡萄糖、果糖在体外受精鱼类的精子中经三羧酸循环可为精子运动提供能量[32]。适宜浓度的葡萄糖可明显提高白斑狗鱼(Esoxlucius)[33]、高体雅罗鱼[13]、蛇(Saurogobiodumerili)[34]、萨罗罗非鱼(Sarotherodonmelanotheron)[35]的精子活力。相比之下，适宜葡萄糖浓度下细鳞斜颌鲴精子活力虽然较高，但对精子活力提升作用不明显[27]。本试验结果显示，葡萄糖在0～100 mmol/L浓度下，拉氏精子快速运动时间均无显著差异，但在寿命上适宜葡萄糖浓度对拉氏精子活力有明显促进作用。

3.4 温度对拉氏精子活力的影响

3.5 pH对拉氏精子活力的影响

3.6 几种因子复合液对拉氏精子活力的影响

4 结 论