血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在冠心病伴颈动脉粥样硬化患者中的表达及临床意义*

肖志娇,王玲玲,郭晓雷,郭晓伟,王鸿章,付 鹏,姚新艳,赵丽娜

邯郸市中医院:1.检验科；2.老年科，河北邯郸 056000

冠心病一般是指冠状动脉粥样硬化性心脏病，其中颈动脉粥样硬化(CAS)与冠心病关系密切，CAS严重程度可有效反映冠状动脉的病变程度，早期检测CAS有助于早期诊断冠心病及其严重程度，进而提出积极的治疗方案，在一定程度上有助于改善患者的预后[1-2]。临床研究显示，视黄醇结合蛋白4(RBP4)是一种循环性脂肪源性因子，与胰岛素抵抗、向心型肥胖等糖脂代谢紊乱疾病密切相关，但与CAS的相关报道较少[3]。内脏脂肪素(visfatin)、受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)分别为新型脂肪因子、程序性坏死中关键的蛋白质分子，前者在各种代谢、应激反应、炎性反应中起着关键作用，后者参与动脉粥样硬化。心力衰竭等多种心血管疾病发生、发展[4-5]。但RBP4、visfatin、RIPK1三者联合在冠心病患者CAS中报道鲜少，故本研究主要通过检测冠心病患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平变化分析RBP4、visfatin、RIPK1与冠心病伴CAS的关系，并探讨可能的作用机制，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年2月至2021年2月于本院就诊的163例冠心病患者作为研究对象，其中男81例，女82例；年龄18～80岁，平均(46.55±29.45)岁；病程4～7年，平均(5.23±1.42)年；体质量指数(BMI) 20.68～24.59 kg/m2，平均(21.50±1.86)kg/m2；基础疾病：高血压21例，高血脂38例，高血糖42例。根据是否伴CAS分为冠心病组79例和冠心病伴CAS组84例。选取同期72例于本院进行体检的健康者作为健康组，年龄19～88岁，平均(50.83±32.77)岁。所有研究对象均自愿参与本次研究且其家属对本次研究均知情并签署知情同意书。本研究经本院伦理委员会讨论通过。

纳入标准：(1)冠心病组符合《稳定性冠心病诊断与治疗指南》[6]中冠心病诊断标准；(2)入组前3个月未接受降脂药治疗且无降脂药服药史；(3)健康组无心血管疾病，身体健康。

排除标准：(1)主动脉弓及以上CT血管造影(CTA)显示脑血管动脉瘤、动静脉畸形、夹层、动脉炎及烟雾病者；(2)伴有出血性疾病者；(3)患有心力衰竭、严重心律失常者。

1.2方法

1.2.1标本采集 在所有研究对象入组后次日清晨抽取3 mL空腹8～12 h静脉血，以3 000 r/min离心10 min，将上层血清储存于1.5 mL PE管，-80 ℃冰箱保存备用，以便后续实验检测血清RBP4、visfatin、RIPK1水平。

1.2.2血清RBP4、visfatin、RIPK1水平检测方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清RBP4、visfatin、RIPK1水平，实验步骤：制作标准品，稀释样品；在反应孔中加入以稀释的标准品100 μL/孔，在35 ℃、温育2 h；将反应板洗涤3次后，加入抗体工作液100 μL/孔，放于35 ℃、湿育45 min；将100 μL/孔TMB溶液加入至反应孔并放置于35 ℃下反应45 min后，加入终止液以终止反应，采用酶标仪检测上述指标水平(颜色反应深浅与上述指标呈正比)。RBP4、visfatin酶联免疫试剂盒购自上海邦景实业有限公司，货号：BJ-0615R、BJ-0555R；RIPK1酶联免疫试剂盒购自无锡云萃生物科技有限公司，货号：YRX102846H。

1.2.3冠心病伴CAS严重程度 采用Gensini评分[7]评估冠心病伴CAS严重程度，轻度(Gensini评分<20分)、中度(20分≤Gensini评分<40分)、重度(Gensini评分≥40分)。

2 结 果

2.1血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在各组中表达情况比较 如表1所示，冠心病伴CAS组、冠心病组血清RBP4、visfatin、RIPK1水平均高于健康组，差异有统计学意义(P<0.05)；冠心病伴CAS组血清RBP4、visfatin、RIPK1水平高于冠心病组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在各组中表达情况比较

2.2血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在不同严重程度冠心病伴CAS中比较 如表2、图1所示，血清RBP4、visfatin、RIPK1水平随着疾病程度加重而升高，重度、中度冠心病伴CAS患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平明显高于轻度冠心病伴CAS患者，差异有统计学意义(P<0.05)；重度冠心病伴CAS患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平高于中度冠心病伴CAS患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在不同严重程度冠心病伴CAS中比较

2.4Gensini评分、RBP4、visfatin、RIPK1的相关性分析 Pearson相关性分析显示，RBP4、Gensini评分呈正相关(r=0.429，P=0.001)；RBP4、Gensini评分呈正相关(r=0.486，P=0.001)；visfatin、Gensini评分呈正相关(r=0.630，P=0.001)。Pearson相关性分析显示，RBP4、visfatin之间呈正相关(r=0.471，P=0.001)；RBP4、RIPK1之间呈正相关(r=0.449，P=0.012)；visfatin、RIPK1之间呈正相关(r=0.481，P=0.001)。见图1、2。

图1 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平与Gensini评分相关性分析图

图2 RBP4、visfatin、RIPK1之间相关性分析图

3 讨 论

有研究显示，RBP4水平随冠状动脉病变程度、冠状动脉病变支数增加逐渐升高，且与冠状动脉病变范围、狭窄程度呈正相关[8-10]；visfatin具有广泛的内分泌和心血管系统活性，在动脉粥样硬化发病过程中起着一定作用；RIPK1是程序性坏死因子中关键蛋白质分子之一，可通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL通路，导致程序性坏死发生且参与动脉粥样硬化的发生。冠状动脉内硬化是全身动脉硬化的局部表现，颈动脉在动脉硬化病变中是最容易受累的部位，可根据CAS程度变化判断冠心病的严重程度[11-12]。在本文研究中，对冠心病组患者及健康者进行对照研究，结果发现冠心病患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平较高且与CAS程度密切相关。

RBP4是一种脂肪细胞因子，主要参与维生素A的储存、代谢和转运，在一定程度上有助于维持视黄醇稳定，既往研究证实，其在冠心病患者血清中呈异常高表达且与炎症因子水平密切相关[13]。临床研究证实，RBP4对冠心病的发展具有促进作用，其原因可能为RBP4可诱导磷酸烯醇、丙酮酸激酶的基因表达，减少肝脏和肌肉组织对葡萄糖的利用，引起糖脂代谢紊乱，进而导致冠心病，且其与冠心病患者冠状动脉病变严重程度密切相关[14-15]。目前临床上鲜见血清RBP4水平与冠心病伴颈动脉粥样硬化的报道。本研究发现，RBP4水平在冠心病伴CAS患者中显著高于冠心病患者，且RBP4水平变化与颈动脉粥样硬化呈正相关，与上述研究基本一致，其原因可能为RBP4主要参与结合、转运维生素A，维持视黄醇稳定，其可通过影响脂代谢、糖代谢促进动脉粥样硬化。此外，在本文研究中并未探究RBP4与冠心病患者炎性因子的相关性，存在一定的局限性，有待后续深入研究。

visfatin经临床证实为一种多效性因子，可作为调节因子参与促炎与免疫调节过程，参与包括动脉粥样硬化等多种疾病的发展过程[16]。钟素等[17]研究报道，visfatin在冠心病患者血清中呈异常高表达且与颈动脉粥样硬化密切相关，与本文研究结果一致。有研究显示，visfatin水平与冠心病患者氧化应激、颈动脉内-中膜厚度及斑块面积密切相关，有望成为评估冠心病患者预后的指标之一[18]。在本研究中，血清visfatin水平在冠心病伴CAS患者显著升高，且与CAS严重程度呈正相关，说明降低血清visfatin水平可能发挥抗CAS的作用，其原因可能为冠心病患者动脉粥样硬化斑块的泡沫细胞和巨噬细胞中均可发现高表达visfatin，其可通过PPARγ信号转导通路诱导泡沫细胞形成，还可通过激活NF-κB信号通路在动脉粥样硬化的形成和斑块稳定性降低方面发挥关键作用；但在本文研究中并未探究血清visfatin水平变化与冠心病患者氧化应激的相关性，以及visfatin水平在冠心病伴CAS中的具体机制尚未明确，存在一定局限性。

临床研究显示，RIPK1可参与心肌缺血等多种疾病发生及发展过程，抑制其表达可降低心肌细胞凋亡率、Bax蛋白水平、MDA水平，缓解心肌细胞氧化损伤，可能为心肌缺血再灌注损伤治疗的新靶点[19-20]。在肖真等[21]研究中，RIPK1在单支病变、双支病变及多支病变冠心病患者中表达存在显著差异，且与病变支数密切相关，对冠心病患者预后的评估具有一定的预测价值。本研究结果显示，血清RIPK1水平与冠心病伴CAS患者密切相关，且与CAS程度呈正相关，RIPK1与CAS密切相关，是严重CAS的独立危险因素，其原因可能为RIPK1水平升高可通过激活PIPK1-PIPK3-MLKL信号通路，诱导巨噬细胞程序性坏死，进而对冠状动脉粥样硬化的发展起促进作用。

综上所述，本文研究结果显示，血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在冠心病伴CAS患者中异常高表达，且与CAS疾病严重程度密切相关，临床可根据上述指标水平变化，早期诊断冠心病伴CAS，有助于患者积极治疗、提高预后。但本研究为单中心研究，病例数偏少，需要多中心、大样本佐证本文得出结果，为临床上冠心病伴CAS的早期诊断提供理论支持；此外，本研究未对RBP4、visfatin、RIPK1在冠心病伴CAS中具体机制进行探究，今后还需深入分析其指标具体机制。